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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及制造寡核苷酸的方法。
技术介绍
1、在dna寡核苷酸、rna寡核苷酸等核酸的化学合成中,广泛使用亚磷酰胺法。在亚磷酰胺法中,典型地,寡核苷酸是通过在合适的活化剂的存在下向核苷、核苷酸或寡核苷酸依次加成核苷亚磷酰胺而合成的。
2、在亚磷酰胺法中,通常核苷亚磷酰胺以相对于理论量为1.5~10.0倍的量使用。核苷亚磷酰胺在合成原料中也是昂贵的,因此如果能够削减核苷亚磷酰胺的用量,则可期待生产成本的大幅削减。
3、然而,迄今为止尚未知有在削减核苷亚磷酰胺的用量的同时以良好的纯度得到寡核苷酸的方法。
4、专利文献1中,关于所使用的活化剂的量,记载了相对于核苷衍生物的量,1~20倍是适当的,优选为1~10倍摩尔量,但没有记载在抑制合成工序中的核苷亚磷酰胺的反应容器内残留量、削减核苷亚磷酰胺的用量的同时以良好的纯度得到寡核苷酸的方法。
5、现有技术文献
6、专利文献
7、专利文献1:国际公开第2006/022323号
技术实现思路
1、专利技术所要解决的课题
2、本专利技术的目的在于,提供一种在制造寡核苷酸的方法中抑制核苷亚磷酰胺的反应容器内残留量、削减核苷亚磷酰胺的用量的方法。
3、用于解决课题的手段
4、本专利技术者们对制造寡核苷酸的方法进行了深入研究,其中发现,通过增加活化剂的用量,能够抑制合成工序中的核苷亚磷酰胺的反应容器内残留量,能够削减核苷亚磷酰胺的用量。进而基于
5、即,本专利技术涉及以下。
6、[1]一种制造寡核苷酸的方法,其包含在活化剂的存在下,使核苷亚磷酰胺与直接或间接负载于载体的核苷的3’位或5’位的羟基、巯基或氨基键合的工序,其中,所述工序中使用的所述活化剂的量为所述工序中使用的核苷亚磷酰胺的量的10.0~15.0倍当量。
7、[2]根据[1]所述的方法,其中,所述工序中使用的所述活化剂的量为所述负载的核苷的10.0~25.0倍当量。
8、[3]根据[1]或[2]所述的方法,其中,所述工序中使用的所述核苷亚磷酰胺的量为所述负载的核苷的1.0~2.0倍当量。
9、[4]根据[1]~[3]中任一项所述的方法,其中,活化剂选自4,5-二氰基咪唑、5-(乙硫基)-1h-四唑、5-(苄硫基)-1h-四唑和邻磺酰苯甲酰亚胺1-甲基咪唑。
10、[5]根据[1]~[4]中任一项所述的方法,其中,所述工序中的溶液的温度为0~20℃。
11、专利技术效果
12、通过在制造寡核苷酸的方法中增加活化剂的用量,能够抑制合成工序中的核苷亚磷酰胺的反应容器内残留量,能够在削减作为昂贵材料的核苷亚磷酰胺的用量的同时,以良好的纯度得到寡核苷酸。另外,通过使寡核苷酸的制造中的各工序中的溶液的温度为低温,也能够抑制核苷亚磷酰胺的反应容器内残留量,也能够在削减作为昂贵材料的核苷亚磷酰胺的用量的同时,以良好的纯度得到寡核苷酸。
13、虽然不希望被特定的理论约束,但认为核苷亚磷酰胺在反应容器内的残留是由于核苷亚磷酰胺在偶联工序中与通过寡核苷酸的磷酸部位的2-氰基乙基(cnet)保护基非期望地脱离而形成的羟基键合而发生的,变得无法参与链长伸长反应(与直接或间接负载于载体的核苷的5’或3’末端羟基的反应),其结果通过增加活化剂的用量,核苷亚磷酰胺与由于cnet保护基的脱离而形成的寡核苷酸的羟基的键合得到抑制,反应容器内所消耗的核苷亚磷酰胺量减少,实现了核苷亚磷酰胺的用量削减。另外,认为通过使溶液的温度为低温,寡核苷酸的磷酸部位的cnet保护基的脱离得到抑制,通过与由于cnet保护基的脱离而形成的寡核苷酸的羟基键合而消耗的核苷亚磷酰胺量减少,实现了核苷亚磷酰胺的用量削减。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种制造寡核苷酸的方法,其包含在活化剂的存在下,使核苷亚磷酰胺与直接或间接负载于载体的核苷的3’位或5’位的羟基、巯基或氨基键合的工序,
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述工序中使用的所述活化剂的量为所述负载的核苷的10.0~25.0倍当量。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中,所述工序中使用的所述核苷亚磷酰胺的量为所述负载的核苷的1.0~2.0倍当量。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的方法,其中,活化剂选自4,5-二氰基咪唑、5-(乙硫基)-1H-四唑、5-(苄硫基)-1H-四唑和邻磺酰苯甲酰亚胺1-甲基咪唑。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的方法,其中,所述工序中的溶液的温度为0~20℃。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种制造寡核苷酸的方法,其包含在活化剂的存在下,使核苷亚磷酰胺与直接或间接负载于载体的核苷的3’位或5’位的羟基、巯基或氨基键合的工序,
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述工序中使用的所述活化剂的量为所述负载的核苷的10.0~25.0倍当量。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中,所述工序中使用的所...
【专利技术属性】
技术研发人员:吉田敬,饭田智祥,岩本正史,前田惠里,松並淳,
申请(专利权)人:日东电工株式会社,
类型:发明
国别省市:
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