【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米医药，具体涉及一种载mtor激动剂的仿生纳米囊泡及其制备方法和在制备缓解肾脏缺血再灌注损伤的药物中的应用。
技术介绍
1、肾脏缺血再灌注损伤是一种常见的肾脏损伤，是由于肾脏的血流短暂减少，随后出现血液再灌注。肾脏缺血再灌注损伤常见于肾脏手术、心脏手术和肾移植。对于肾脏和心脏手术，肾脏缺血再灌注损伤可能导致急性肾损伤、慢性肾脏病和肾纤维化。对于肾移植，肾脏缺血再灌注损伤是不可避免的，并与排斥反应、移植肾功能延迟恢复和移植肾功能衰竭相关。近年来，越来越多的研究表明缺血和再灌注均可通过多种机制引起肾损伤，如活性氧的产生、肾脏炎症反应和诱导肾细胞死亡等。缺血再灌注诱导的肾损伤涉及多种细胞类型的多种死亡方式，其中肾小管细胞的凋亡和铁死亡占主导地位。因此，抑制肾小管细胞的炎症、凋亡和铁死亡是肾脏缺血再灌注治疗的潜在靶点。
2、在缺血再灌注条件下激活mtor可下调自噬减少铁死亡和凋亡，从而减轻缺血再灌注损伤。mtor蛋白复合体1(mtorc1)是由激活的mtor形成的功能复合体之一，mtorc1在调节细胞代谢、线粒体生物发生和自噬中发挥重要作用。然而，mtorc1可以被缺氧和能量应激抑制，这两者在缺血再灌注条件下经常被观察到。已知在这种条件下，受到抑制的mtorc1可激活自噬、凋亡和铁死亡，同时抑制蛋白质生物合成、细胞生长和细胞周期进程。4,6-二吗啉-n-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2-胺(mhy1485)是一种mtor激动剂，可减轻下调mtorc1引起的病理生理变化，对缺血再灌注造成的肾损伤起到保护和
3、然而mhy1485自身靶向性有限，直接注射至体内可能难以达到有效量。虽然间充质干细胞外泌体可以作为mhy1485的载体，携载mhy1485到达肾脏损伤处并提高mhy1485的药物利用率，但是间充质干细胞外泌体难以进行大规模制备，且产率低可控性差，因此需要选择更合适的药物载体。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种载雷帕霉素靶蛋白(mtor)激动剂的仿生纳米囊泡及其制备方法和在制备缓解肾脏缺血再灌注损伤的药物中的应用，本专利技术采用间充质干细胞来源细胞外囊泡作为mhy1485的载体，能够提高mhy1485治疗肾缺血再灌注损伤的疗效。
2、本专利技术提供了间充质干细胞来源细胞外囊泡在作为mtor激动剂的载体或者制备mtor激动剂的载体中的应用；所述mtor激动剂优选的包括mhy1485。
3、本专利技术还提供了一种载mtor激动剂的仿生纳米囊泡，所述仿生纳米囊泡包括间充质干细胞来源细胞外囊泡和包裹在间充质干细胞来源细胞外囊泡内腔中的mhy1485。
4、优选的，所述mhy1485在所述仿生纳米囊泡中的包封率为11.516％～12.02％；所述仿生纳米囊泡的粒径为252.61～290.85nm。
5、本专利技术还提供了上述方案所述的仿生纳米囊泡的制备方法，包括以下步骤：
6、将间充质干细胞接种于含有mhy1485的细胞培养基进行共培养，得到共培养后的间充质干细胞；
7、对所述共培养后的间充质干细胞进行消化，得到消化产物；
8、对所述消化产物进行离心，收集沉淀，将所述沉淀重悬于含有mhy1485的pbs缓冲液中，得到细胞重悬液；
9、采用梯度挤出法对所述细胞重悬液进行挤压处理，得到所述仿生纳米囊泡。
10、优选的，所述细胞培养基和pbs缓冲液中mhy1485的浓度分别为0.2～200μg/ml；所述细胞培养基和pbs缓冲液中mhy1485的浓度相同。
11、优选的，所述pbs缓冲液中还含有质量浓度为1％～5％的海藻糖。
12、优选的，所述挤压处理包括：将所述细胞重悬液反复挤压依次通过孔径为1.2μm、0.45μm和0.22μm的滤膜；所述反复挤压的次数为1～10次。
13、优选的，在所述挤压处理后，还包括对挤压处理后的产物依次进行离心和洗涤；所述离心的转速为(1～15)×104g；所述离心的时间为15～80min。
14、本专利技术还提供了上述方案所述的仿生纳米囊泡或所述制备方法制备得到的仿生纳米囊泡在制备治疗肾脏缺血再灌注损伤的药物中的应用；
15、所以治疗肾脏缺血再灌注损伤优选的包括1)～6)所述方面中的一种或几种：
16、1)改善经历肾脏缺血再灌注损伤后的肾功能；
17、2)缓解肾脏在缺血再灌注中造成的损伤；
18、3)抑制肾脏缺血再灌注诱导的促炎细胞因子的产生；
19、4)减轻肾脏缺血再灌注诱导的肾小管细胞铁死亡；
20、5)抑制肾小管凋亡；
21、6)改善肾小管形态。
22、本专利技术还提供了一种治疗肾脏缺血再灌注损伤的药物，所述药物的有效成分包括上述方案所述的仿生纳米囊泡或所述制备方法制备得到的仿生纳米囊泡。
23、本专利技术提供了间充质干细胞来源细胞外囊泡在作为mtor激动剂的载体或者制备mtor激动剂的载体中的应用。在本专利技术中，所述间充质干细胞来源细胞外囊泡中含有胎盘间充质干细胞中的遗传物质以及细胞因子，可通过刺激组织再生、抑制免疫反应和阻断活性氧产生来减轻肾脏缺血再灌注造成的炎症和肾脏损伤，并且，间充质干细胞来源细胞外囊泡中具有分化为多种间充质组织谱系的潜能，从而具有修复肾脏损伤的作用。此外，mtor是能量和代谢状态的传感器，在以自噬依赖的机制调节细胞凋亡中起着不可或缺的作用。在肾脏缺血再灌注的条件下，mtor被强烈抑制后激活自噬-铁死亡和凋亡通路。mtor激动剂可激活mtor下游通路，逆转肾脏缺血再灌注诱导的mtor活性下调，从而抑制自噬，减轻肾小管细胞发生铁死亡和凋亡。本专利技术以间充质干细胞来源细胞外囊泡作为mtor激动剂的载体，能够将mtor激动剂递送到缺血再灌注后的肾脏，不仅可以保持间充质干细胞来源细胞外囊泡对肾脏缺血再灌注的治疗效果，还可以提高损伤肾脏对mtor激动剂的利用率，并且囊泡对小分子药物的包裹作用减少了mtor激动剂在体内的泄露，由此减少mtor激动剂的副作用，协同减轻肾脏缺血再灌注损伤，从而提高mtor激动剂治疗肾缺血再灌注损伤的疗效。
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1.间充质干细胞来源细胞外囊泡在作为mTOR激动剂的载体或者制备mTOR激动剂的载体中的应用；所述mTOR激动剂优选的包括MHY1485。
2.一种载mTOR激动剂的仿生纳米囊泡，其特征在于，所述仿生纳米囊泡包括间充质干细胞来源细胞外囊泡和包裹在间充质干细胞来源细胞外囊泡内腔中的MHY1485。
3.根据权利要求2所述的仿生纳米囊泡，其特征在于，所述MHY1485在所述仿生纳米囊泡中的包封率为11.516％～12.02％；所述仿生纳米囊泡的粒径为252.61～290.85nm。
4.权利要求1或2所述的仿生纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述细胞培养基和PBS缓冲液中MHY1485的浓度分别为0.2～200μg/mL；所述细胞培养基和PBS缓冲液中MHY1485的浓度相同。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述PBS缓冲液中还含有质量浓度为1％～5％的海藻糖。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述挤压处理包括：将所述细胞
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在所述挤压处理后，还包括对挤压处理后的产物依次进行离心和洗涤；所述离心的转速为(1～15)×104g；所述离心的时间为15～80min。
9.权利要求2或3所述的仿生纳米囊泡或权利要求4～8任一项所述制备方法制备得到的仿生纳米囊泡在制备治疗肾脏缺血再灌注损伤的药物中的应用；
10.一种治疗肾脏缺血再灌注损伤的药物，其特征在于，所述药物的有效成分包括权利要求2或3所述的仿生纳米囊泡或权利要求4～8任一项所述制备方法制备得到的仿生纳米囊泡。
...【技术特征摘要】
1.间充质干细胞来源细胞外囊泡在作为mtor激动剂的载体或者制备mtor激动剂的载体中的应用；所述mtor激动剂优选的包括mhy1485。
2.一种载mtor激动剂的仿生纳米囊泡，其特征在于，所述仿生纳米囊泡包括间充质干细胞来源细胞外囊泡和包裹在间充质干细胞来源细胞外囊泡内腔中的mhy1485。
3.根据权利要求2所述的仿生纳米囊泡，其特征在于，所述mhy1485在所述仿生纳米囊泡中的包封率为11.516％～12.02％；所述仿生纳米囊泡的粒径为252.61～290.85nm。
4.权利要求1或2所述的仿生纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述细胞培养基和pbs缓冲液中mhy1485的浓度分别为0.2～200μg/ml；所述细胞培养基和pbs缓冲液中mhy1485的浓度相同。
6.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：台宗光，张馨月，钱之彧，丁炜宏，吴玲，赵颖超，
申请(专利权)人：上海市皮肤病医院，
类型：发明
国别省市：
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