【技术实现步骤摘要】
本公开涉及生物医药领域，具体地，涉及一种雾化吸入用核酸-脂质纳米粒药物组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides，aso）是一类经过人工合成的寡核苷酸片段，长度多为15~30个核苷酸，主要通过碱基互补配对原则，干扰靶基因的转录和翻译，从而实现基因的靶向治疗。aso具有候选靶点丰富，定向合理设计，体内外作用高效和可人工大规模合成等优势，被认为是极具潜力的基因治疗药物。
2、单独的反义寡核苷酸稳定性较差，且没有特定组织靶向性，导致在体内容易被核酸酶降解，不能很好地发挥治疗作用。近几年，随着新型递送技术的发展，反义寡核苷酸药物的研发取得了突破性的进步。核酸递送载体有很多种，包括病毒载体、脂质纳米粒、脂质-聚合物杂化纳米粒、纳米结构脂质载体、阳离子聚合物、外泌体纳米囊泡，以及蛋白载体等。目前脂质纳米粒（lnp, lipid nanoparticle）是核酸药物研究应用较多的递送系统之一，lnp能够安全而有效地递送核酸，通常由四种具有相似摩尔比的脂质组成：包括阳离子脂质、磷脂、胆固醇和peg-脂质。
3、吸入式lnp与其它递送方式相比，能够最大限度地提高核酸药物在肺部的浓度，可用于治疗多种疾病，比如囊性纤维化（cf）、肺结核、慢性阻塞性肺病和肺癌等。然而，成功开发吸入式lnp面临诸多困难和挑战，这是因为无论何种雾化形式，如超声波雾化、压缩空气式雾化、振动筛网雾化、软雾吸入器雾化等，在雾化过程中，lnp都会受到剪切力的破坏作用，该剪切破坏作用
技术实现思路
1、本公开的目的在于提供一种包含核酸的lnp药物组合物，该组合物适用于以雾化吸入的方式向肺部递送靶向基因治疗的dna或治疗基因，且在雾化期间能够保持完整，使得该核酸药物在吸入后有效发挥其功能。
2、一方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物包括脂质、包封于所述脂质内的核酸和添加有水溶性赋形剂的分散体系溶液；
3、所述脂质包括40-60摩尔%的非可电离阳离子脂质、10-20摩尔%的中性脂质、1-5摩尔%的长循环脂质和30-50摩尔%的胆固醇；
4、所述非可电离阳离子脂质为（2,3-二油酰基-丙基）-三甲基铵-氯盐（dotap），所述中性脂质为二硬脂酰基卵磷脂（dspc），所述长循环脂质为二肉豆蔻酰甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000（dmg-peg2k）。
5、本公开提供的药物组合物具有较高通用性，在使用不同的脂质用量和配方时，可以保证其可以耐受雾化过程中的剪切力作用，实现雾化前后粒度、分散度（pdi）和包封率（ee）的一致性。
6、可选地，所述非可电离阳离子脂质与所述核酸的用量比以n/p比表示，所述n/p比为（1：1）-（30：1），优选为（3：1）-（10：1）。
7、可选地，所述非可电离阳离子脂质是指能够永久带正电的脂质分子，还可以为选自二油酰丙基氯化三甲铵（dotma）和1,2-二油醇-3-二甲基氨基-丙烷（dodap）中的任一种；
8、可选地，所述中性脂质还可以为选自二棕榈酰磷脂酰胆碱（dppc）和二油酰磷脂酰乙醇胺（dope）中的至少一种；
9、可选地，所述核酸为选自mrna、sirna、dna、mirna、反义寡核苷酸和非编码rna组成的组中的任意一种，优选为sirna和反义寡核苷酸组成的组中的任意一种，更优选为反义寡核苷酸。
10、优选地，所述核酸为ct102，所述ct102的核苷酸序列为5’-tcctccggagccagacttca-3’。
11、可选地，所述药物组合物的粒径为50-300nm，优选为50-200nm，且所述药物组合物的多分散指数不大于0.3。
12、可选地，所述分散体系溶液为选自tris缓冲液、dpbs缓冲液、hepes缓冲液、pbs缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液中的至少一者。
13、可选地，所述水溶性赋形剂包括蔗糖、海藻糖、聚乙烯醇、吐温80、吐温20、泊洛沙姆188、triton、十二烷基磺酸钠、氯化钠、氯化钾和甘氨酸中的至少一者；优选为吐温80、泊洛沙姆188和triton中的至少一者；
14、若所述赋形剂为吐温80，所述赋形剂的使用浓度为0.01-0.5%（w/v），优选为0.05-0.15%（w/v）；
15、若所述赋形剂为泊洛沙姆188，所述赋形剂的使用浓度为0.05-1%（w/v），优选为0.3-0.7%（w/v）；
16、若所述赋形剂为triton，所述赋形剂的使用浓度为0.01-0.5%（w/v），优选为0.05-0.15%（w/v）。
17、本公开制备得到的包含非可电离阳离子的药物组合物具有较好的雾化稳定性，并且进一步地，通过在分散体系中添加赋形剂，使制备得到的药物组合物中的脂质能够耐受雾化过程中的剪切力，在雾化前后粒度、pdi和ee保持不变；将上述药物组合物在2-8℃冷藏6个月粒径增加在3 nm以内，pdi无明显变化，包封率降低3%以内，变化不显著，稳定性良好，有效解决了市场雾化吸入lnp无法耐受雾化剪切力，稳定性差的技术问题。
18、另一方面，本公开提供了上述药物组合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
19、s1、将所述脂质溶解于有机溶剂中，得到第一分散液；
20、s2、将所述核酸溶解于第一分散体系溶液中，得到第二分散液；
21、s3、使用微流控方法将所述第一分散液和所述第二分散液混合，得到脂质纳米粒中间体溶液；
22、s4、使用第二分散体系溶液对所述脂质纳米粒中间体溶液进行超滤，去除所述有机溶剂，加入所述水溶性赋形剂，混合至均匀。
23、可选地，所述有机溶剂为选自乙醇、丙酮和n, n-二甲基甲酰胺中的任一种。
24、可选地，所述第一分散体系溶液为选自柠檬酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液中的至少一种；
25、所述第二分散体系溶液为选自tris缓冲液、dpbs缓冲液和hepes缓冲液中的至少一种。
26、另一方面，本公开提供了上述药物组合物和/或上述方法制备得到的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述抗肿瘤药物的给药方法为雾化吸入；
27、本公开使用的雾化吸入装置为可商业获得的，所述雾化吸入的装置为选自压缩式雾化器、振动筛网雾化器和软雾吸入器中的任一种；优选为振动筛网雾化器或软雾吸入器。
28、本公开术语“rna疗法”是指使用基于rna的分子来治疗或预防疾病，其靶向药物主要包括靶向rna的小分子药物、反义寡核苷酸（aso）、小干扰rna（sirna）、微小rna（mirna）、rna适配体本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括脂质、包封于所述脂质内的核酸和添加有水溶性赋形剂的分散体系溶液；
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述非可电离阳离子脂质与所述核酸的用量比以N/P比表示，所述N/P比为（1：1）-（30：1）。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，所述N/P比为（3：1）-（10：1）。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述核酸为选自mRNA、siRNA、DNA、miRNA、反义寡核苷酸和非编码RNA组成的组中的任意一种。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述核酸为siRNA和反义寡核苷酸组成的组中的任意一种。
6.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述核酸为反义寡核苷酸。
7.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述反义寡核苷酸为CT102，所述CT102的核苷酸序列为：5’-TCCTCCGGAGCCAGACTTCA-3’。
8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述药物组合物的粒径为50-300nm，且所述药物组合
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，所述药物组合物的粒径为50-200nm。
10.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述分散体系溶液为选自Tris缓冲液、DPBS缓冲液、HEPES缓冲液、PBS缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液中的至少一者。
11.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述水溶性赋形剂包括蔗糖、海藻糖、聚乙烯醇、吐温80、吐温20、泊洛沙姆188、Triton、十二烷基磺酸钠、氯化钠、氯化钾和甘氨酸中的至少一者。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中，所述水溶性赋形剂为吐温80、泊洛沙姆188和Triton中的至少一者；
13.权利要求1-12中任一项所述药物组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述有机溶剂为选自乙醇、丙酮和N, N-二甲基甲酰胺中的任一种；
15.权利要求1-12中任一项所述的药物组合物和/或权利要求13-14中任一项所述的方法制备得到的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物的给药方式为雾化吸入；
...【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括脂质、包封于所述脂质内的核酸和添加有水溶性赋形剂的分散体系溶液；
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述非可电离阳离子脂质与所述核酸的用量比以n/p比表示，所述n/p比为（1：1）-（30：1）。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，所述n/p比为（3：1）-（10：1）。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述核酸为选自mrna、sirna、dna、mirna、反义寡核苷酸和非编码rna组成的组中的任意一种。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述核酸为sirna和反义寡核苷酸组成的组中的任意一种。
6.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述核酸为反义寡核苷酸。
7.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述反义寡核苷酸为ct102，所述ct102的核苷酸序列为：5’-tcctccggagccagacttca-3’。
8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述药物组合物的粒径为50-300nm，且所述药物组合物的多分散指数不大于0.3。
9.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：于飞，张凤，宋更申，孙振龙，王环宇，李玥，王帅，马海秋，穆树花，
申请(专利权)人：北京悦康科创医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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