【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医疗美容，具体涉及一种注射用再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白凝胶及其制备方法。
技术介绍
1、随着医疗美容行业的快速发展，注射填充类材料越来越受到广泛关注。作为最常使用的注射填充类材料透明质酸钠凝胶虽然具有较好的即刻填充和塑形效果，但是由于透明质酸钠在组织环境中降解速度较快，同时，透明质酸钠本身又不具备刺激组织自身细胞生长和胶原蛋白产生的组织再生功能，导致患者通常每6个月左右就需要进行重复注射，大大增加了患者的治疗费用和不良感受。近年来，再生医美填充材料逐渐兴起，随着胶原蛋白填充剂、聚左旋乳酸面部填充剂、聚己内酯填充剂相继获批，医美填充材料也从传统的物理填充材料向组织再生填充材料方向发展。
2、胶原蛋白是人体组织器官的主要结构蛋白，约占人体蛋白质总量的30～40％，胶原蛋白是人体细胞外基质最主要的成分，主要存在于皮肤、软骨、骨、肌腱、韧带、角膜、器官被膜、硬脑膜等部位的结缔组织。人类目前已发现28种型别的胶原蛋白，其中最常见的类型是：i型(真皮、骨骼、肌腱、韧带等，含量最多，约占胶原总量的80％～90％)、ii型(软骨、玻璃体等)、iii型(皮肤、血管、肠等)、iv型(基底膜等)、v型(骨、真皮、角膜、胎盘等)。从来源上看，可分为天然胶原蛋白和人工合成胶原蛋白；从是否能成纤维看，可分为成纤维胶原和非成纤维胶原两大类。动物源胶原蛋白：从牛皮、猪皮、鱼皮等胶原含量高的动物组织中提取纯化而来，具有生物活性和完整三螺旋结构，主要用于止血海绵、凝胶剂、生物敷料、人工骨及护肤品等产品，是当前的主要制备技术。重组胶原
3、根据重组胶原蛋白的来源，将其细分为三种类型：重组人胶原蛋白、重组人源化胶原蛋白、重组类胶原蛋白三个类别。“重组人胶原蛋白”是指由dna重组技术制备的人胶原蛋白特定型别基因编码的全长氨基酸序列、且具有三螺旋结构的重组胶原蛋白材料。如重组胶原蛋白材料是由dna重组技术制备的人胶原蛋白特定型别基因编码的全长氨基酸序列、但不具有三螺旋结构，也不属于“重组人胶原蛋白”。“重组人源化胶原蛋白”由dna重组技术制备的人胶原蛋白特定型别基因编码的全长或部分氨基酸序列片段，或是含人胶原蛋白功能片段的组合。“重组类胶原蛋白”由dna重组技术制备的经设计、修饰后的特定基因编码的氨基酸序列或其片段，或是这类功能性氨基酸序列片段的组合。其基因编码序列或氨基酸序列与人胶原蛋白的基因编码序列或氨基酸序列同源性低。
4、普通的胶原蛋白，如动物胶原蛋白，重组胶原蛋白较于传统动物胶原蛋白，具有无病毒性隐患、优异的生物学相容性和功效性、低免疫原性的特点，有效规避了传统动物源胶原蛋白的病毒隐患、排异反应，并克服了传统动物胶原蛋白因动物年龄差异、种属差异导致的终端产品临床疗效不确切、质量不稳定的弊端。
5、丝素蛋白至1993年被美国食品和药物管理局(fda)批准为生物材料以来，由于其出色的机械性能，良好的生物相容性，生物降解性以及结构调整的多功能性而被广泛应用于生物医药和组织工程领域。丝素蛋白可以被加工成溶液、丝膜、微球/微粒、水凝胶、支架和电纺膜等具有不同结构的材料，应用于创伤修复、药物载体、组织填充和人造器官等领域。近年来，已上市的丝素蛋白产品包括艾尔健公司开发的seri外科支架，用于腹壁重建和整形外科。美国sofregen公司开发了一种silkvoice天然蚕丝蛋白注射剂，用于治疗声带介质化和声带功能不全。苏州苏豪生物材料公司开发了一种丝素蛋白的创面敷料，用于烫伤及烧伤创面的愈合修复。目前，将丝素蛋白制备成用于面部整形填充产品尚属空白。根据相关研究，作为一种具有优良生物相容性的材料，丝素蛋白可以促进皮肤成纤维细胞的生长、分化和增值，同时，丝素蛋白在体内降解后所释放的多种氨基酸又可加速细胞新陈代谢，促进胶原蛋白合成，增强皮肤张力和弹性及色素分解。相比常用的胶原蛋白凝胶，丝素蛋白水凝胶在支持原代人真皮成纤维细胞的增殖和角质形成细胞的迁移方面表现出优越性。因此，如果将丝素蛋白和胶原蛋白制备成一种可注射的软组织填充材料用于面部整形，将具有极大的应用潜力。丝素蛋白在作为可注射软组织填充材料应用于面部整形使用时，需要将其制备成可通过注射器注射的水凝胶，进而将其注入到皮肤组织，实现美容填充的功效。
6、丝素蛋白是由桑蚕后部丝腺合成分泌的纤维状蚕丝蛋白。桑蚕丝纤维中的核心蛋白质由理论分子量约为391kda的重链(h-chain)、25kda的轻链(l-chain)和30kda或27kda纤维六聚体/p25组成，h链蛋白、l链蛋白和p25蛋白的物质的量比是6：6：1。重链和轻链通过单个二硫键连接，p25为含有asn寡糖链的糖蛋白，p25与二硫键连接的重链和轻链通过非共价的疏水相互作用连接。再生丝蛋白，是蚕丝核心纤维(丝素蛋白纤维)溶解除盐后的蛋白质混合物，其基本的氨基酸基序(motif)与丝素蛋白相同。再生丝蛋白在脱胶和溶解过程导致其分子链无序降解，分子量下降至不低于10kda分子量，且分子链的构效关系与丝素蛋白纤维中的构效关系存在较大差别，通常以微黄色半透明的水溶液的形式存在。按成型和干燥方法的不同，也可制成水溶性(聚集态结构主要为silk i)和水不溶性(聚集态结构主要为silk ii)的白色粉末。
7、目前，制备再生丝素蛋白凝胶的方法主要包括化学交联法和物理交联法。化学交联法制备的丝素蛋白水凝胶所要用到的交联剂戊二醛、京尼平、辣根过氧化酶等大多具有较高的毒性，因此水凝胶植入组织后，由于交联剂残留造成的毒性问题难以解决。与化学交联相比较，物理交联的丝素蛋白水凝胶具有更好的生物安全性，更适合作为组织填充材料应用在医疗美容领域。目前，已报道的丝素蛋白物理凝胶的制备方法包括，水溶性有机溶剂诱导、表面活性剂诱导、ph值诱导、超声/震荡诱导和电场诱导等。但是，上述方法制备的丝素蛋白物理凝胶的共同的特点是，凝胶内部分子分布都较为松散，交联结构稳定性差，导致其在植入机体组织后，极易被组织微环境及各种蛋白酶快速分解，从而达不到长周期的组织填充效果。重组人源化胶原蛋白是具有高级结构和功能的胶原蛋白，不仅可以替代传统动物胶原，还可以解决高端注射生物材料的免疫原性，其三螺旋结构与水溶性并存的特性，胶原蛋白具有多样性，目前人类已识别并被鉴定的共有28种，每种型别分布在人体不同的部位，发挥着重要的修复再生功能。重组人源化胶原蛋白氨基酸序列与人自身胶原蛋白100％一致，具有正确稳定的三螺旋结构，无免疫原性及病毒污染，细胞粘附性高，可全方位全生命周期参与人体组织器官的修复再生，广泛应用于人体皮肤、骨、软骨、心血管系统、口腔及管腔组织等医疗健康领域。
8、特别地，制备再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶在作为面部填充剂使用时，具备重组人源化胶原蛋白的良好的生物相容性和修复特性，其中重组人源化胶原蛋白具有三螺旋结构本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，组成成分按重量份数计包括：1.01～10.21份再生丝素蛋白、1.01～10.12份重组III型人源化胶原蛋白、0～0.52份润湿剂、0.1～1.01份表面活性剂和100～1000份PBS磷酸缓冲液。
2.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述再生丝素蛋白的分子量为10-40KDa，优选为10-20KDa。
3.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述润湿剂选自丙二醇、甘油或丁二醇；优选为甘油。
4.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述表面活性剂选自油酸酸钠或十二烷基硫酸钠，优选油酸钠。
5.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述PBS磷酸缓冲液的浓度为0.01M，pH为7.2～7.4，优选pH为7.4。
6.根据权利要求5所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，0.01M pH7.
7.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，组成成分按重量份数计包括：10.21份再生丝素蛋白、10.12份重组III型人源化胶原蛋白、0.52份甘油、1.01份油酸钠和1000份PBS磷酸缓冲液。
8.权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶的制备方法，包括以下步骤：
9.权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶在制备组织再生医疗美容填充材料中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，组成成分按重量份数计包括：1.01～10.21份再生丝素蛋白、1.01～10.12份重组iii型人源化胶原蛋白、0～0.52份润湿剂、0.1～1.01份表面活性剂和100～1000份pbs磷酸缓冲液。
2.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述再生丝素蛋白的分子量为10-40kda，优选为10-20kda。
3.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述润湿剂选自丙二醇、甘油或丁二醇；优选为甘油。
4.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述表面活性剂选自油酸酸钠或十二烷基硫酸钠，优选油酸钠。
5.根据权利要求1所述的再生丝素蛋白/重组人源化胶原蛋白双网络凝胶，其特征在于，所述pbs磷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛其俊，丰祝刚，
申请(专利权)人：南京思元医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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