一种龙胆小肽及其制备方法和应用技术

技术编号：42752626 阅读：0 留言：0更新日期：2024-09-18 13:42

本发明专利技术涉及一种龙胆小肽及其制备方法和应用，涉及一种龙胆小肽及其制备方法和应用。该龙胆小肽选自基础小肽，或包含基础小肽的先导小肽，先导小肽可在动物体内消化酶的作用下酶解得到基础小肽。该龙胆小肽具有肝保护作用，能够用于治疗肝损伤，可用于制备保肝产品。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及天活性产物，特别是涉及一种龙胆小肽及其制备方法和应用。

技术介绍

1、龙胆是龙胆科龙胆属多年生草本植物。主要分布在中国内蒙古、黑龙江、贵州、安徽、福建、广东等地。龙胆喜光、耐寒、耐半阴，以富含腐殖质的壤土或沙质壤土为好；生于向阳山坡疏林下及旱地。龙胆味苦，性寒；归肝、胆经；具有清热燥湿、泻肝胆火的功效，还具有抗真菌、抗细菌、抗疟原虫、抗炎、保肝、镇静等作用。

2、肝脏作为代谢器官，参与人体各项生命活动及能量代谢，因此肝脏极易受到各类内源或外源物质的侵害而造成损伤。肝损伤已成为世界范围内一个日益严重的健康问题，全球每年约有200万人死于肝脏疾病。虽然我们对于肝脏的发育、新陈代谢和保护研究已有不错的进展，但是肝脏疾病在全球范围内依然有着很高的发病率和死亡率。肝损伤是各种肝脏疾病发生初期共有的一种病理状态，持续的肝损伤可能会引起肝硬化、肝纤维化、肝炎，甚至是肝癌。因此龙胆多肽的肝保护作用研究对龙胆的进一步开发具有重要意义。

技术实现思路

1、针对上述问题，本专利技术提供一种龙胆小肽，该龙胆小肽具有肝保护作用，能够用于治疗肝损伤，可用于制备保肝产品。

2、为了达到上述目的，本专利技术提供了一种龙胆小肽，选自如seq id no.1所示序列的基础小肽，或包含所述基础小肽的先导小肽，所述先导小肽可在动物体内消化酶的作用下酶解得到所述基础小肽。

3、本专利技术人通过动物实验，验证了上述龙胆小肽具有肝保护作用，可用于治疗肝损伤，特别是化学肝损伤。</p>

4、本专利技术还提供了所述龙胆小肽的制备方法，包括以下步骤：

5、预处理：将龙胆脱脂，得到脱脂龙胆；

6、提取：将脱脂龙胆加入水中，加热，得到提取液，通过硫酸铵沉淀法得到蛋白质沉淀，离心，复溶，透析除盐，冻干，得到龙胆蛋白；

7、酶解：将龙胆蛋白酶解，得到龙胆粗多肽；

8、洗脱：将龙胆粗多肽进行洗脱，分离纯化，得到龙胆小肽。

9、在其中一个实施例中，所述预处理步骤中，所述脱脂的脱脂剂包括石油醚。

10、在其中一个实施例中，所述提取步骤中，将脱脂龙胆置于水中，在90-100℃，料液比为1:20-30的条件下提取2-4h，重复提取2-4次，合并提取液；在提取液中加入硫酸铵，使硫酸铵质量浓度为饱和硫酸铵的80％，3.0×103-5.0×103r/min离心5-15min，将沉淀用蒸馏水复溶，使用3500±500da透析袋透析除盐，冻干得到龙胆蛋白粉末。

11、在其中一个实施例中，所述酶解步骤中，依次采用胃蛋白酶、胰蛋白酶对龙胆蛋白进行酶解；

12、所述洗脱步骤包括：采用离子交换层析柱和凝胶层析柱对龙胆粗多肽进行洗脱，采用琼脂糖凝胶柱进行分离纯化，得到龙胆小肽。

13、在其中一个实施例中，所述酶解步骤中，胃蛋白酶酶解条件为：底物浓度为3-5％，温度为36-38℃，ph值为1.8-2.2，酶用量为5000-7000u/g；

14、胰蛋白酶酶解条件为：底物浓度为3-5％，温度为36-38℃，ph值为7.5-8.5，酶用量为5000-7000u/g。

15、在其中一个实施例中，所述离子交换层析柱的洗脱包括：以浓度为0.1m、0.3m、0.5m的nacl溶液进行梯度洗脱；所述凝胶层析柱的洗脱包括：以水为洗脱液进行洗脱；

16、所述琼脂糖凝胶柱的分离纯化包括：以nacl溶液为洗脱液进行洗脱。

17、在其中一个实施例中，所述离子交换层析柱为deae-32纤维素离子交换层析柱，所述凝胶层析柱为sephadex g-50葡聚糖凝胶柱，所述琼脂糖凝胶柱为sepharose 6b琼脂糖凝胶柱。

18、在其中一个实施例中，所述琼脂糖凝胶柱的分离纯化中，nacl溶液的浓度为0.15m。

19、本专利技术还提供了所述的龙胆小肽在制备用于肝保护产品中的应用。

20、在其中一个实施例中，所述龙胆小肽的用量为每天每公斤体重40-4000μg。

21、在其中一个实施例中，所述龙胆小肽的用量为每天每公斤体重4000μg。

22、本专利技术还提供了一种用于肝保护的产品，包括所述龙胆小肽和辅料，所述辅料为药品或保健食品可接受的辅料。

23、在其中一个实施例中，所述龙胆小肽通过降低alt、ast活力，降低mda含量，提高sod含量保护肝。

24、在其中一个实施例中，所述龙胆小肽通过降低tnf-α、il-6、il-1β表达水平保护肝。

25、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：

26、本专利技术的一种龙胆小肽及其制备方法和应用，该龙胆小肽具有肝保护作用，能够用于治疗肝损伤，可用于制备保肝产品。

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【技术保护点】

1.一种龙胆小肽，其特征在于，选自如SEQ ID NO.1所示序列的基础小肽，或包含所述基础小肽的先导小肽，所述先导小肽可在动物体内消化酶的作用下酶解得到所述基础小肽。

2.权利要求1所述的龙胆小肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述预处理步骤中，所述脱脂的脱脂剂包括石油醚。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述酶解步骤中，依次采用胃蛋白酶、胰蛋白酶对龙胆蛋白进行酶解；

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述离子交换层析柱的洗脱包括：以浓度为0.1M、0.3M、0.5M的NaCl溶液进行梯度洗脱；所述凝胶层析柱的洗脱包括：以水为洗脱液进行洗脱；

6.权利要求1所述的龙胆小肽在制备用于肝保护产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述龙胆小肽的用量为每天每公斤体重40-4000μg。

8.一种用于肝保护的产品，其特征在于，包括权利要求1所述的龙胆小肽和辅料，所述辅料为药品或保健食品可接受的辅料。

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【技术特征摘要】

1.一种龙胆小肽，其特征在于，选自如seq id no.1所示序列的基础小肽，或包含所述基础小肽的先导小肽，所述先导小肽可在动物体内消化酶的作用下酶解得到所述基础小肽。

2.权利要求1所述的龙胆小肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述预处理步骤中，所述脱脂的脱脂剂包括石油醚。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述酶解步骤中，依次采用胃蛋白酶、胰蛋白酶对龙胆蛋白进行酶解；

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述离子交换层析柱的洗脱包括：以浓度为0.1m、0.3m、0.5m的nacl溶液进行梯度洗脱；所述凝...

【专利技术属性】
技术研发人员：苑广信，付天娇，董研，唐洋，孙晴，周雪，
申请(专利权)人：北华大学，
类型：发明
国别省市：

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