【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组及其应用。
技术介绍
1、小麦细菌性条斑病是小麦细菌性病害。小麦细菌性条斑病的病原菌经鉴定为半透明黄单胞菌波形致病变种。细菌通过雨、风短距离传播，带菌种子远距离运输等促进病原菌传播，对我国小麦生产造成潜在威胁。因此，在病害侵染初期及时准确检测小麦细菌性条斑病病原，对于控制病害发生、规避病害流行风险以及提高小麦产量和经济效益具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组、lamp试剂盒及其应用，能够简单、高效的检测出小麦细菌性条斑病病原，特异性好、灵敏度高。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、设计一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组，所述lamp引物组包括核苷酸序列如seq id no.1所示的外引物f3、核苷酸序列如seq id no.2所示的外引物b3、核苷酸序列如seq id no.3所示的内引物fip和核苷酸序列如seq id no.4所示的内引物bip；所述核苷酸序列如seq id no.1所示的外引物f3和核苷酸序列如seq id no.2所示的外引物b3组成一对外引物；所述核苷酸序列如seq id no.3所示的内引物fip和核苷酸序列如seq idno.4所示的内引物bip组成一对内引物。
4、外引物的核苷酸序列为：
5、f3：5’-gctcgctgctcagttgg-
6、b3：5’-agccagtcgaaatcctcttg-3’
7、内引物的核苷酸序序列为：
8、fip：5’-ggcggcgttccaggatcgaggacagcgccgcaaac-3’
9、bip：5’-cagtgtggcgaccggaacgatcgcgaaaacgcctcatcgg-3’。
10、相对于现有技术，本专利技术提供的检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组有益效果在于：本申请以半透明黄单胞菌波形致病变种特异性序列为基础，特异性设计一对外引物f3和b3，一对内引物fip和bip，使得含有小麦细菌性条斑病病原菌dna片段的待测物能够利用上述引物进行大量扩增，进而准确检测出半透明黄单胞菌波形致病变种的小麦细菌性条斑病病原，且与大麦细菌性条斑病病菌、柑橘溃疡病菌、番茄疮痂病菌、水稻白叶枯病菌、小麦叶锈病菌、小麦条锈病菌、小麦白粉病菌等均无交叉扩增反应，特异性强；且上述lamp引物组的灵敏度高，对小麦细菌性条斑病病原的最低检测限为10pg/μl，能够在病害侵染初期及时准确检测出小麦细菌性条斑病病原，同时，检测的准确度高，且无需特殊的仪器和专业的操作人员，实现了在任意场合进行快速检测小麦细菌性条斑病病原的目的，对控制麦细菌性条斑病病害发生、规避病害流行风险以及提高小麦产量和经济效益具有重要意义。
11、本专利技术还提供一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组的应用，利用所述检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组在检测小麦细菌性条斑病原半透明黄单胞菌波形致病变种中的应用。
12、本专利技术还提供一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp试剂盒，所述试剂盒包含所述检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组。
13、进一步的，所述lamp试剂盒还包括2×lamp master mix、dna polymerase和ddh2o。
14、本专利技术还提供一种检测小麦细菌性条斑病病原的方法，利用所述试剂盒检测小麦细菌性条斑病病原的方法，具体包括如下步骤：
15、1)、提取待测物的基因组dna为模板。
16、2)、用所述lamp试剂盒进行环介导等温扩增。
17、3)、环介导等温扩增结束后，向扩增产物中加入荧光染料后观察颜色变化，若是颜色发生绿色荧光显色，表示待测物中含有小麦细菌性条斑病病原半透明黄单胞菌波形致病变种dna片段；若是颜色不发生绿色荧光显色，还呈现荧光染料本身的颜色，表示待测物中不含有小麦细菌性条斑病病原半透明黄单胞菌波形致病变种dna片段，并未发生扩增反应。
18、其中，提取待测物的基因组dna的方法为常规的dna提取方法。
19、本专利技术提供的利用试剂盒检测小麦细菌性条斑病病原的应用，操作简单、反应时间短、反应结果直观准确，可用于小麦细菌性条斑病病原的快速检测。
20、进一步的，所述环介导等温扩增的反应体系包括以下试剂及用量：2×lampmaster mix 12.5μl，10μm f3、10μm b3各0.5μl、10μm fip和10μm bip各2μl，dnapolymerase 0.5μl，50ng/μl dna模板1μl，ddh2o 6μl。
21、进一步的，所述环介导等温扩增的反应温度为65℃，反应时间为50min。
22、进一步的，所述荧光染料为sybr green i核酸染料，且所述荧光染料的用量为0.5μl。
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1.一种检测小麦细菌性条斑病病原的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的外引物F3、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的外引物B3、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的内引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的内引物BIP；
2.一种检测小麦细菌性条斑病病原的LAMP引物组的应用，其特征在于，利用所述检测小麦细菌性条斑病病原的LAMP引物组在检测小麦细菌性条斑病原半透明黄单胞菌波形致病变种中的应用。
3.一种检测小麦细菌性条斑病病原的LAMP试剂盒，其特征在于，所述LAMP试剂盒包括如权利要求1所述的检测小麦细菌性条斑病病原的LAMP引物组。
4.根据权利要求3所述的一种检测小麦细菌性条斑病病原的LAMP试剂盒，其特征在于，所述LAMP试剂盒还包括2×Lamp Master Mix、DNA Polymerase和ddH2O。
5.一种检测小麦细菌性条斑病病原的方法，利用如权利要求4所述的一种检测小麦细菌性条斑病病原的LAMP试剂盒检测小麦细菌性条斑病病原的方法，
6.根据权利要求5所述一种检测小麦细菌性条斑病病原的方法，其特征在于，在步骤2中，所述环介导等温扩增的反应体系包括以下试剂及用量：2×Lamp Master Mix 12.5μL，10μM F3、10μM B3各0.5μL、10μM FIP和10μM BIP各2μL，DNA Polymerase0.5μL，50ng/μLDNA模板1μL，ddH2O 6μL。
7.根据权利要求5所述一种检测小麦细菌性条斑病病原的方法，其特征在于，在步骤2中，所述环介导等温扩增的反应温度为65℃，反应时间为50min。
8.根据权利要求5所述一种检测小麦细菌性条斑病病原的方法，其特征在于，在步骤3中，所述荧光染料为SYBR Green I核酸染料，且所述荧光染料的用量为0.5μL。
...【技术特征摘要】
1.一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组，其特征在于，所述lamp引物组包括核苷酸序列如seq id no.1所示的外引物f3、核苷酸序列如seq id no.2所示的外引物b3、核苷酸序列如seq id no.3所示的内引物fip和核苷酸序列如seq id no.4所示的内引物bip；
2.一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组的应用，其特征在于，利用所述检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组在检测小麦细菌性条斑病原半透明黄单胞菌波形致病变种中的应用。
3.一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp试剂盒，其特征在于，所述lamp试剂盒包括如权利要求1所述的检测小麦细菌性条斑病病原的lamp引物组。
4.根据权利要求3所述的一种检测小麦细菌性条斑病病原的lamp试剂盒，其特征在于，所述lamp试剂盒还包括2×lamp master mix、dna polymerase和ddh2o。
5.一种检...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘太国，郑欣悦，张昊，陈万权，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：
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