本发明专利技术涉及一种制备容器中的溶液的方法，所述溶液用于活化血小板和/或从容器中的血小板中提取生长因子以用于再生医学治疗，所述方法包括加入第一抗凝剂，所述第一抗凝剂为柠檬酸钠溶液并加入重组胶原蛋白制剂并加入第二抗凝剂；以及加入氯化钠溶液。本发明专利技术还涉及一种活化血小板和/或从血液中的血小板中提取生长因子的方法，其中所述方法包括引入装有本发明专利技术的第一方面所述的溶液的容器，向所述容器中加入血液，对所述容器进行离心，以及最后提取经处理的血液或经处理的血液的部分。
本专利技术涉及一种制备用于管的溶液的方法。具体地，本专利技术涉及一种制备用于管的溶液的方法，所述溶液用于促进血小板的分离和从血小板中提取生长因子以及在提取发生后稳定生长因子。本专利技术还涉及所述提取产物作为再生医学治疗的用途，特别是用于“富含生长因子”或“富含细胞因子”的再生医学治疗。
1、血小板，也称为凝血细胞，是细胞的微小碎片，对于正常凝血和其他必要的生长愈合功能是必不可少的。它们由骨髓中称为巨核细胞的非常大的细胞形成，并被释放到血液中进行循环。正是这些血小板的活化在哺乳动物体内的自然愈合过程中起着关键作用。通过从血液中分离血小板，可以激活血小板，从而使血小板释放生长因子，刺激和增加哺乳动物体内产生的修复细胞的数量。
2、存在许多已知用于管的溶液，其用于促进从血液样品中的血液中分离血小板以活化血小板从而用作再生医学治疗。然而，这些已知的溶液并不能在单个管内以单一方法活化血小板或从血小板中提取生长因子，因为常规体系只能在管外以单独的第二步骤或方法实现血小板的活化。
>5、加入氯化钠溶液。6、在一个实施方案中，所述柠檬酸钠溶液可用经过滤的氮气进行通气。
7、在另一个实施方案中，可对所述柠檬酸钠溶液的ph进行调节。
8、在再一个实施方案中，可对所述柠檬酸钠溶液进行过滤。
9、在又一个实施方案中，可对所述柠檬酸钠溶液进行灭菌。
10、此外，所述重组胶原蛋白可以是重组胶原蛋白的冻干制剂，以形成柠檬酸钠胶原蛋白溶液。
11、在一个实施方案中，所述第二抗凝剂可以是预涂覆的层状的抗凝酸性柠檬酸葡萄糖(acd-a)溶液。
12、更进一步地，可以用经过滤的氮气对所述柠檬酸钠溶液进行10分钟至25分钟的通气，优选地，进行18分钟的通气。
13、再进一步地，所述柠檬酸钠溶液的体积可具有0.5ml至1.2ml的体积，优选地，具有1ml的体积。
14、在一个理想的实施方案中，所述容器可以是以符合国际药典标准的管的形式，其中所述管是在其内壁上具有硅化涂层的玻璃管，并且其中硅化涂层的程度和/或量是受控的，以控制所述管的内壁表面的粗糙度，从而使所述管的内壁的粗糙度变平滑或降低到，其程度达到在离心过程中仍能轻微活化，同时防止过度活化，从而能够最佳地裂解血小板。
15、更进一步地，对所述容器施加密封装置和真空，并且其中所述真空的抽吸体积为1ml至7ml。理想地，其中所述真空的抽吸体积为3ml。
16、在再一个实施方案中，其中可施加γ辐射作为制备所述溶液的最后步骤。
17、在又一个实施方案中，可通过添加氢氧化钠溶液来调节所述柠檬酸钠溶液的ph，其中所述氢氧化钠溶液可具有10％氢氧化钠对90％水的比例，并且所述柠檬酸钠溶液的ph可为7.0至8.0。理想地，其中所述ph可为7.2。
18、在一个实施方案中，用于过滤所述柠檬酸钠溶液的过滤器可以是0.2μm过滤器的形式，其中所述过滤器还可以包括层流罩和uv光装置以便于过滤所述柠檬酸钠溶液。
19、进一步地，可以对所述柠檬酸钠溶液的电导率进行测量，其中所述电导率可小于1.1μs。
20、此外，可以对所述柠檬酸钠溶液的比密度进行测量，其中比密度可为至少1g/cm3。
21、更进一步地，在引入重组胶原蛋白制剂之前，可使用蒸汽对所述柠檬酸钠溶液进行10分钟至25分钟的灭菌。理想地，其中可进行18分钟的灭菌，其中所述蒸汽的温度可为120℃到130℃。理想地，其中所述蒸汽可为125℃。
22、在一个实施方案中，所述重组胶原蛋白的冻干制剂的体积可具有100μl至200μl的体积。理想地，其中所述体积为200μl。
23、所述重组胶原蛋白可以是生物合成重组胶原蛋白的形式，其中所述生物合成重组胶原蛋白可具有单链结构，且固定分子量为10kda至100kda。理想地，固定分子量为55kda，其中所述单链结构是不含免疫原性端的经修饰的g-x-y特征序列的形式。
24、进一步地，可将所述管中的溶液涡旋3分钟至5分钟，其中可将所述溶液涡旋3分钟。
25、更进一步地，其中可将所述容器中的溶液放置在振荡器中8小时至10小时。
26、再进一步地，其中可将所述容器中的所述体积的柠檬酸钠胶原蛋白溶液可以于室温放置在振荡器中8小时，直至获得均质混合物。
27、在另一个实施方案中，其中可将装有所述体积的溶液的容器放置在温度为55℃至65℃的烘箱中，其中可将装有所述体积的柠檬酸钠胶原蛋白溶液的容器放置在温度为65℃的烘箱中。
28、在一个实施方案中，其中可将所述容器放置在所述烘箱中8小时至12小时，其中理想地，可将所述容器放置在所述烘箱中12小时。
29、在另一个实施方案中，其中可加入0.2ml至1.0ml的浓度范围为0.5％至30％的氯化钠溶液。
30、更进一步地，其中所述氯化钠溶液可以是0.5ml的氯化钠溶液，所述氯化钠溶液的浓度可以为0.9％。
31、在理想的实施方案中，其中所述方法可以是在单个容器内的单一连续方法。
32、根据本专利技术的第二方面，一种活化血小板和/或从血液中的血小板中提取生长因子的方法，所述方法可以包括：
33、引入装有本专利技术第一方面所述溶液的容器；
34、向所述容器中加入血液；
35、对所述容器进行离心；和
36、提取经处理的血液或经处理的血液的部分。
37、在一个实施方案中，其中提取所述经处理的血液或所述经处理的血液的部分可以是提取生长因子。
38、根据本专利技术的第三方面，可以从本专利技术第二方面所述的方法获得经处理的血液，用于再生医学治疗之用途，并且其中理想地，所述经处理的血液可以用于富含生长因子或细胞因子的再生医学治疗之用途。
39、根据本专利技术第二方面所述的血液，其中所述血液可以是人类血液。
40、根据本专利技术第二方面所述的血液，其中所述血液可以是动物血液。
41、根据本专利技术第二方面所述的血液，其中所述血液可以是其他脊椎动物血液。
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【技术保护点】
1.一种制备容器中的溶液的方法，所述溶液用于活化所述容器中的血小板和/或从所述血小板中提取生长因子以用于再生医学治疗，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述柠檬酸钠溶液用经过滤的氮气进行通气。
3.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液的pH进行调节。
4.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液进行过滤。
5.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液进行灭菌。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组胶原蛋白是重组胶原蛋白的冻干制剂，以形成柠檬酸钠胶原蛋白溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二抗凝剂是预涂覆的层状的抗凝酸性柠檬酸葡萄糖(ACD-A)溶液。
8.根据权利要求2所述的方法，其中用经过滤的氮气对所述柠檬酸钠溶液进行10分钟至25分钟的通气，优选地，进行18分钟的通气。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述柠檬酸钠溶液具有0.5ml至1.2ml的体积，优选地，具有1ml的体积。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述容器是符合国际药典标准的管的形式。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述管是在其内壁上具有硅化涂层的玻璃管。
12.根据权利要求11所述的方法，其中硅化涂层的程度和/或量是受控的，以控制所述管的内壁表面的粗糙度，从而使所述管的内壁的粗糙度变平滑或降低，其程度达到在离心过程中仍能轻微活化，同时防止过度活化，从而能够最佳地裂解所述血小板。
13.根据权利要求1所述的方法，其中对所述容器施加密封装置和真空。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述真空的抽吸体积为1ml至7ml。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述真空的抽吸体积为3ml。
16.根据权利要求13所述的方法，其中施加γ辐射作为最后步骤。
17.根据权利要求3所述的方法，其中通过添加氢氧化钠溶液来调节所述柠檬酸钠溶液的pH。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述氢氧化钠溶液具有10％氢氧化钠对90％水的比例。
19.根据权利要求3所述的方法，其中所述柠檬酸钠溶液的pH为7.0至8.0。
20.根据权利要求3所述的方法，其中所述pH为7.2。
21.根据权利要求4所述的方法，其中用于过滤所述柠檬酸钠溶液的过滤器是0.2μm过滤器的形式。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述过滤器还包括层流罩和UV光装置以便于过滤所述柠檬酸钠溶液。
23.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液的电导率进行测量。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述电导率小于1.1μs。
25.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液的比密度进行测量。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述比密度为至少1g/cm3。
27.根据权利要求5所述的方法，其中在引入所述重组胶原蛋白制剂之前，使用蒸汽对所述柠檬酸钠溶液进行10分钟至25分钟的灭菌。
28.根据权利要求27所述的方法，其中进行18分钟的灭菌。
29.根据权利要求27所述的方法，其中所述蒸汽的温度为120℃至130℃。
30.根据权利要求27所述的方法，其中所述蒸汽为125℃。
31.根据权利要求6所述的方法，其中所述重组胶原蛋白的冻干制剂具有100μl至200μl的体积。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述体积为200μl。
33.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组胶原蛋白是生物合成重组胶原蛋白的形式。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述生物合成重组胶原蛋白具有单链结构，且固定分子量为10KDa至100KDa。
35.根据权利要求33所述的方法，其中，固定分子量为55KDa。
36.根据权利要求34所述的方法，其中所述单链结构是不含免疫原性端的经修饰的G-X-Y特征序列的形式。
37.根据权利要求1所述的方法，其中将所述管中的溶液涡旋3分钟至5分钟。
38.根据权利要求37所述的方法，其中将所述溶液涡旋3分钟。
39.根据权利要求1所述的方法，其中将所述容器中的溶液放置在振荡器中8小时至10小时。
40.根据权利要求1所述的方法，其中将所述容器中的所述体积的柠檬酸钠胶原蛋白溶液于室温放置在振荡器中8小时，直至获得均质混合物。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种制备容器中的溶液的方法，所述溶液用于活化所述容器中的血小板和/或从所述血小板中提取生长因子以用于再生医学治疗，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述柠檬酸钠溶液用经过滤的氮气进行通气。
3.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液的ph进行调节。
4.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液进行过滤。
5.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液进行灭菌。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组胶原蛋白是重组胶原蛋白的冻干制剂，以形成柠檬酸钠胶原蛋白溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二抗凝剂是预涂覆的层状的抗凝酸性柠檬酸葡萄糖(acd-a)溶液。
8.根据权利要求2所述的方法，其中用经过滤的氮气对所述柠檬酸钠溶液进行10分钟至25分钟的通气，优选地，进行18分钟的通气。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述柠檬酸钠溶液具有0.5ml至1.2ml的体积，优选地，具有1ml的体积。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述容器是符合国际药典标准的管的形式。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述管是在其内壁上具有硅化涂层的玻璃管。
12.根据权利要求11所述的方法，其中硅化涂层的程度和/或量是受控的，以控制所述管的内壁表面的粗糙度，从而使所述管的内壁的粗糙度变平滑或降低，其程度达到在离心过程中仍能轻微活化，同时防止过度活化，从而能够最佳地裂解所述血小板。
13.根据权利要求1所述的方法，其中对所述容器施加密封装置和真空。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述真空的抽吸体积为1ml至7ml。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述真空的抽吸体积为3ml。
16.根据权利要求13所述的方法，其中施加γ辐射作为最后步骤。
17.根据权利要求3所述的方法，其中通过添加氢氧化钠溶液来调节所述柠檬酸钠溶液的ph。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述氢氧化钠溶液具有10％氢氧化钠对90％水的比例。
19.根据权利要求3所述的方法，其中所述柠檬酸钠溶液的ph为7.0至8.0。
20.根据权利要求3所述的方法，其中所述ph为7.2。
21.根据权利要求4所述的方法，其中用于过滤所述柠檬酸钠溶液的过滤器是0.2μm过滤器的形式。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述过滤器还包括层流罩和uv光装置以便于过滤所述柠檬酸钠溶液。
23.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液的电导率进行测量。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述电导率小于1.1μs。
25.根据权利要求1所述的方法，其中对所述柠檬酸钠溶液的比密度进行测量。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述比密度为至少1g/cm3。
27.根据权利要求5所述的方法，其中在引入所述重组胶原蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山德拉·格雷斯·米斯泽夫斯基，J·普雷托里乌斯，
申请(专利权)人：亚历山德拉·格雷斯·米斯泽夫斯基，
类型：发明
国别省市：
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