【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗领域，尤其涉及一种p24病毒样颗粒的佐剂与抗原共价偶联的制备方法以及通过该方法制备的p24病毒样颗粒的佐剂抗原偶联物。
技术介绍
1、据《全球癌症报告》显示，肿瘤复发和转移时导致死亡的主要原因。近年来，肿瘤免疫治疗在癌症治疗领域取得重大突破，成为癌症精准治疗的新一线治疗方法。研究报道，免疫检查点抑制剂能够显著延长患者生存期。然而多次使用后疗效降低甚至出现耐药的现象，仍然导致肿瘤复发和转移。因此寻找新的肿瘤精准治疗策略仍然任重道远。肿瘤驱动基因突变产生的新抗原肽可将正常细胞和肿瘤细胞区别开来，作为新抗原被t细胞识别，是癌症精准治疗的最理想靶标。新抗原疫苗是将从癌症患者中筛选出来的新抗原表位，制备成个体化疫苗，激发和提高机体特异性的免疫系统的攻击能力，达到抑制和清除肿瘤的资料策略。临床研究显示，ny-eso-1特异性的新抗原疫苗治疗晚期卵巢癌伴远处转移的临床反应率高大62%；neo-pv-01新抗原疫苗治疗晚期黑色素伴远处转移的反应率为59%。因此，靶向新抗原的癌症疫苗有望防控肿瘤转移和复发甚至消除肿瘤，提高患者生活质量和肿瘤治愈率。开展基于新抗原的癌症疫苗研究具有重大意义。
2、近年来，随着免疫学研究的不断深入及基因工程技术的迅速发展，癌症疫苗类型主要分为长肽疫苗、dc（树突状细胞，dendritic cells）疫苗，mrna疫苗，病毒载体疫苗等。由于高通量技术的发展和生物技术信息学技术的进步，新抗原的筛选已经取得了长足的进步。将筛选到的多种新抗原制备成新抗原癌症疫苗，其特异性和靶向性强、安全性高，
3、佐剂是提高疫苗抗原免疫应答的重要策略。早在90年前，人们已经认识到佐剂对疫苗的重要性。由于高度安全性和效用性的标准以及对佐剂下游机制的有限认识，截至目前fda（美国食品和药物管理局，food and drug administration）通过的佐剂有8种，大部分是近10多年以来新获批的佐剂。根据种类可分为alum佐剂，是目前应用作为广泛的佐剂，已被批准用于多种人类疫苗；水包油乳类佐剂如mf59、as03，应用于疟疾、流感病毒疫苗；脂质体佐剂zirosome，应用于甲型肝炎病毒和流感病毒疫苗；tlr受体激动剂如as04、rc-529、alhydroxiquim-ⅱ和cpg odn，应用于人乳头瘤病毒、乙型肝炎病毒和covid-19疫苗。现有佐剂主要应用于感染性疾病防治，以诱导b细胞免疫应答产生中和性抗体为主，绝大部分佐剂具有无法诱导强烈ctl反应的局限性，难以应用于癌症疫苗。同时，现有的蛋白佐剂和传统的铝盐等佐剂仍然主要依靠等电点的物理吸附来结合抗原，以实现佐剂和疫苗的混合。由于抗原的多样性以及佐剂和抗原在等电点、粒径和分子量上的差异，因此佐剂对抗原的吸附和释放存在着较大的难度和不确定性。因此，建立突破物理混合、更高效的佐剂-抗原“一体化”策略可能将更有利于发挥佐剂的作用。
4、疫苗的效应原理基于免疫系统的工作原理，通过模拟感染性病原体或特定抗原的方式来诱导机体产生免疫应答，从而达到预防和控制传染病的目的。其主要原理包括：模拟感染；疫苗通常包含微生物的部分或全体、减活、死亡或重组蛋白、核酸等，模拟感染性病原体进入机体，但不引起实际感染。激活免疫系统：疫苗中的抗原成分能够被机体的免疫系统识别，激活和引导免疫细胞的活性。免疫记忆：免疫通过激活记忆性免疫细胞
5、（如记忆b细胞和记忆t细胞）的产生，使得机体在第一次接触到病原体时能够更快地产生针对性的免疫应答，从而迅速清除病原体，避免疾病发作。形成抗体：疫苗激活b细胞，促使其分化为浆细胞，产生特异性抗体。这些抗体可以与病原体结合并中和其毒性，或标记其以便被其他免疫细胞清除。激活细胞免疫应答：疫苗可以激活cd4+辅助t细胞和cd8+t细胞介导的细胞毒性t细胞（ctl），从而诱导机体产生针对性的细胞免疫应答，直接杀伤感染细胞或异常细胞。建立免疫屏障：疫苗激活机体的免疫系统，使其形成一种“免疫屏障”，阻止病原体进入体内、感染细胞或繁殖扩散，从而防止疾病的发生。总的来说，疫苗的效应原理是通过模拟感染、激活免疫系统、诱导免疫记忆和抗体产生，以及激活细胞免疫应答等方式来提高机体对特定病原体的抵抗能力，从而实现预防传染病的目的。
6、体液免疫和细胞免疫是两种不同但相互协调的免疫反应类型，它们共同构成了机体对抗病原微生物和异常细胞的防御系统。体液免疫：体液免疫主要由b细胞介导，其特点是通过分泌抗体来对抗外来病原微生物，如细菌、病毒等。这些抗体能够与病原微生物特定的抗原结合，形成抗原-抗体复合物，促使病原微生物被中性化。凝集、沉淀和被巨噬细胞吞噬，从而清除病原微生物。体液免疫还包括诱导和维持抗体应答的各种细胞和分子机制，如抗体类别切换、抗体亲和力成熟和记忆b细胞的形成。细胞免疫：细胞免疫主要由t细胞介导，其特点是通过识别和杀伤感染细胞、肿瘤细胞和受损细胞来清除异常细胞。t细胞通过t细胞受体（t cell receptor,tcr）识别被肽片段（抗原）呈递的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,mhc）分子，并通过细胞因子介导细胞杀伤作用，包括产生促进细胞凋亡的信号、释放细胞毒素和激活巨噬细胞杀伤等。
7、佐剂在疫苗中起到了重要的作用，如增强免疫原性：佐剂可以增强疫苗中抗原的免疫原性，使其更有效地刺激免疫系统产生免疫应答。这种增强作用可以表现为提高抗原的稳定性、延长其在机体内存在时间，增强抗原的吸收和处理能力等；调节免疫反应：佐剂可以调节免疫反应的类型和程度，有助于实现所需的免疫效应。例如，一些佐剂能够促进体液免疫应答，而另一些则能够增强细胞免疫应答，使得疫苗能够更全面地激活机体的免疫系统；提高疫苗的稳定性：佐剂可以增强疫苗的稳定，延长其保存期限，减少因疫苗变性或降解而导致的免疫原性损失；改善免疫记忆：一些佐剂可以提高免疫记忆的形成，使得机体在再次接触到相同病原体时能够更快速、更强力地产生免疫应答，从而增强病原体特异性的免疫应答。总的来说，佐剂在疫苗中起到了类似于媒介的作用，能够有效地增强疫苗的免疫原性和保护效果，是疫苗设计中不可或缺的重要组成部分。
8、目前，佐剂在疫苗研究领域发挥着关键作用，科研人员正在不断努力开发新型佐剂，以提高疫苗的免疫原性和安全性。这些佐剂可能包括纳米颗粒、生物胶体、油乳剂等，旨在改善疫苗的免疫效果和保护持久性；佐剂与抗原相互作用机制：研究人员对佐剂与抗原相互作用的机制进行深入研究，探索如何优化佐剂的配方和使用条件，以实现更有效的抗原递呈和免疫激活；佐剂对免疫应答的调节：研究人员关注佐剂对免疫应答类型的调节作用，探索不同佐剂在诱导体液免疫和细胞免疫方面的差异，以便根据具体疾病需求进行合理选择；佐剂与免疫毒理学：随着疫苗接种范围的扩大，对佐剂的免疫毒理学研究变得尤为重要。科研人员致力于评估佐剂对免疫系统和器官的潜在影响，以确保疫苗接种的安全性和本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种P24病毒样颗粒的佐剂与抗原共价偶联的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）包括：通过网站https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ gene/155030获得NC_00 01802.1的cDNA序列、信号序列、标签。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）还包括：将转染或转化后的细胞株进行37℃、5%二氧化碳的孵箱中培养；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）还包括：纯化连接产物，使用层析、电泳、过滤的方法对产物进行纯化和提纯。
5.根据权利要求1-4任一项所述方法制备的P24病毒样颗粒的佐剂抗原共价偶联物。
6.根据权利要求5所述的P24病毒样颗粒的佐剂抗原共价偶联物在制备疫苗中的用途。
7.一种疫苗，其特征在于，包含根据权利要求5所述的P24病毒样颗粒的佐剂抗原共价偶联物。
【技术特征摘要】
1.一种p24病毒样颗粒的佐剂与抗原共价偶联的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）包括：通过网站https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ gene/155030获得nc_00 01802.1的cdna序列、信号序列、标签。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）还包括：将转染或转化后的细胞株进行37℃、5%二氧化碳的孵箱中...
【专利技术属性】
技术研发人员：高凤霞，程伟，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：
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