【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化学应用，具体涉及一种甘油糖脂类化合物pf60的制备方法及应用。
技术介绍
1、恶性肿瘤已经成为严重威胁人类生命安全的疾病之一。在肿瘤治疗过程中肿瘤细胞产生耐药性是导致化疗失败的主要原因之一。肿瘤细胞可以通过如耐药相关蛋白、dna损伤和修复功能障碍；细胞自噬；减少药物积累和增加药物输出；代谢解毒；药物靶标和信号转导分子的改变等多种机制产生耐药性。其中p-gp蛋白是肿瘤细胞产生耐药主要途径之一。p-gp是由mdr-1基因编码表达的，是一个atp驱动的药物外排泵，能结合广泛的药物包括紫杉醇(paclitaxel,ptx,taxol)、阿霉素(adriamycin,adr)和长春碱等许多常用的抗肿瘤药物。因此，开发p-gp蛋白抑制剂与肿瘤药物结合使用可以增加肿瘤药物对肿瘤细胞的敏感性，从而逆转耐药肿瘤细胞活性，可将p-gp抑制剂与化疗药物共同给药作为克服mdr的有效策略。目前，已经开发了几代p-gp抑制剂，第一代逆转剂包括他莫昔芬、环孢素a等，其中以维拉帕米和环胞菌素为典型代表。但是此类药物通常缺乏p-糖蛋白的特异性，会产生严重的副作用，第一代逆转剂也在临床上受到很大程度的限制(sato w.et al.1991)。第二代逆转剂孢菌素类似物伐司朴达(valspodar，psc833)、右旋维拉帕米(dexverapamil)等，其中以地塞米松为代表，然而，第二代逆转剂的开发由于高毒性和药物相互作用而产生一系列副作用而受到限制(rowinsky e.k.et al.1998；hyafil f.et al.1993；ke
2、微生物来源天然产物一直为新药研发提供优质的源头分子。但随着微生物药物的研发从普通环境中发现活性新天然产物的概率降低，重复发现已知天然产物的概率提高。因此，人们把目光转向特殊生境来源的微生物，特殊生境来源的微生物由于要适应极端的环境，容易产生新的生物合成途径，从而更容易产生结构新颖的天然产物。目前有发现从微生物来源的天然产物中开发p-gp抑制剂的具体报道，但是并未明确具体是何种物质。
3、为此，申请人做出了大量的研究，前期发现了一系列如cn113773216a、cn114014898a、cn114057811a公开的长链脂肪酸甘油醇新化合物，并发现其在逆转耐药肿瘤细胞活性上有应用，申请人继续对该菌进行研究，以期发现更多具有逆转耐药肿瘤细胞活性的应用的化合物。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，提供一种生物来源的甘油糖脂类化合物pf60的制备方法及应用。
2、本专利技术的目的之一是提供一种甘油糖脂类化合物pf60在制备肿瘤耐药逆转剂或肿瘤药物增敏剂中的应用，甘油糖脂类化合物pf60(4e,8e)-n-d-2′-hydroxyoctadecanoyl-1-o-β-d-glycopyranosyl-9-methyl-4,8-sphingadienine(后续简称甘油糖脂类化合物pf60)的结构如下式所示：
3、
4、进一步的，耐药物或肿瘤药物为阿霉素。
5、进一步的，所述的肿瘤为乳腺癌。
6、进一步的，所述肿瘤耐药逆转剂为转运泵抑制剂，所述转运泵抑制剂对耐药蛋白p-糖蛋白和多药耐药蛋白中一种或几种具有抑制作用。
7、本专利技术的目的之二是提供甘油糖脂类化合物pf60及药用载体在制备抗肿瘤细胞药剂中的应用，所述的肿瘤细胞为耐阿霉素乳腺癌细胞；甘油糖脂类化合物pf60的结构如下式所示：
8、
9、本专利技术的目的之三是提供一种甘油糖脂类化合物pf60的制备方法，甘油糖脂类化合物pf60的结构如下式所示：
10、所述化合物由红棕毛筒腔菌发酵提取后获得，所述红棕毛筒腔菌命名为红棕毛筒腔菌tubeufia rubrapf02-2，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：m 2019957。
11、本专利技术所述的红棕毛筒腔菌tubeufia rubra pf02-2，是由贵州大学生化工程中心分离获得，保藏单位：中国典型培养物保藏中心保藏，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日：2019.11.20，保藏登记号为cctcc no：m 2019957。
12、红棕毛筒腔菌tubeufia rubra pf02-2的来源如下：
13、采样时间：2016年5月14日；
14、采样地点：广西壮族自治区防城港市屏峰雨林自然保护区；
15、采样方式：采集位于广西壮族自治区防城港市屏峰雨林自然保护区的腐木，塑料密封袋带回实验室.
16、本专利技术的红棕毛筒腔菌tubeufia rubra pf02-2菌株具有下述性质：
17、菌落形态特征：在自然腐木基质上，菌落平展，呈网状、点状，量大时连接成片状，新鲜经分离得到的pf02-2纯菌落上呈无色透明到白色，经分离得到的pf02-2纯菌落自然干燥后呈红棕色。部分菌丝体埋生于基质之下，但多为表生，菌丝体由有隔膜带分枝的菌丝组成，无色至深棕色。分生孢子梗圆柱状，单生，弯曲生长，有隔膜，50-150微米长，4.5-6微米宽，顶端逐渐变细，底部深棕色，顶部透明到浅棕色，表面光滑。产孢细胞单生或多生，圆柱状，具柱状小齿突，合轴生长于分子孢子梗中部到顶部，10-19微米长，3-4微米宽，无色透明状到浅棕色，表面光滑。分子孢子卷旋型，单生，顶侧生，透明，顶端圆形，紧密卷旋时卷曲2-3.5次，直径35-50微米，分生孢子丝3-5微米厚(平均直径45微米，厚度4.5微米)，在水中逐渐松散开，具不清晰的多隔膜，无色到浅棕色，表面光滑。分生孢子在水-琼脂培养基中12h后开始萌发生长。菌落在pda培养基中置于25-28℃生长2周可达16mm，棕色，呈圆形，表面粗糙，有明显的突出物，呈脉状皱褶，菌落边缘完整。
18、进一步的，制备方法包括以下步骤：将红棕毛筒腔菌tubeufia rubra pf02-2进行液体或固体发酵培养，得到发酵物；将发酵物萃取，所得萃取物经分离纯化，得到甘油糖脂类化合物pf60。
19、具体包括以下步骤：
20、s1、菌株活化：取出保存的菌种，接种在基础培养基平板上，静置培养传代至第三代后放大培养；
21、s2、发酵培养：取步骤s1活化后的菌种接种在固体培养基中，在26～30℃下静置发酵培养一段时间；
22、s3、萃取：取菌体连同培养基，加入乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩后得到发酵产物；
23、s4、发酵产物预处理：用氯:甲＝1:1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种甘油糖脂类化合物PF60在制备肿瘤耐药逆转剂或肿瘤药物增敏剂中的应用，甘油糖脂类化合物PF60的结构如下式所示：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：耐药物或肿瘤药物为阿霉素。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤为乳腺癌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述肿瘤耐药逆转剂为转运泵抑制剂，所述转运泵抑制剂对耐药蛋白P-糖蛋白和多药耐药蛋白中一种或几种具有抑制作用。
5.甘油糖脂类化合物PF60及药用载体在制备抗肿瘤细胞药剂中的应用，其特征在于：所述的肿瘤细胞为耐阿霉素乳腺癌细胞；甘油糖脂类化合物PF60的结构如下式所示：
6.一种甘油糖脂类化合物PF60的制备方法，其特征在于：甘油糖脂类化合物PF60的结构如下式所示：
7.根据权利要求6所述化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将红棕毛筒腔菌Tubeufia rubra PF02-2进行液体或固体发酵培养，得到发酵物；将发酵物萃取，所得萃取物经分离纯化，得到甘油糖脂类化合物PF60。
8.根据权利要
...【技术特征摘要】
1.一种甘油糖脂类化合物pf60在制备肿瘤耐药逆转剂或肿瘤药物增敏剂中的应用，甘油糖脂类化合物pf60的结构如下式所示：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：耐药物或肿瘤药物为阿霉素。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤为乳腺癌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述肿瘤耐药逆转剂为转运泵抑制剂，所述转运泵抑制剂对耐药蛋白p-糖蛋白和多药耐药蛋白中一种或几种具有抑制作用。
5.甘油糖脂类化合物pf60及药用载体在制备抗肿瘤细胞药剂中的应用，...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱声艳，宋长伟，陈彬，刘建国，王倩，
申请(专利权)人：遵义医科大学，
类型：发明
国别省市：
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