【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黄曲霉毒素b1检测，具体为一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法。
技术介绍
1、黄曲霉毒素b1(af l atoxi n b1，简称afb1)是一种由黄曲霉(aspergi l l us fl avus)和寄生曲霉(aspergi l l us paras it i cus)等霉菌产生的剧毒次级代谢产物。黄曲霉毒素具有极高的毒性和致癌性，其毒性强度远高于氰化钾和砒霜，被世界卫生组织(who)列为i类致癌物。afb1广泛存在于受污染的粮食、油料作物及其制品中，包括玉米、花生、大米、小麦、大豆等。一旦食品被黄曲霉毒素污染，毒素很难被去除或分解，直接危害人类和动物的健康。因此，黄曲霉毒素的检测和控制成为食品安全领域的重要研究课题。
2、1.黄曲霉毒素的危害及其检测现状
3、黄曲霉毒素b1对人类和动物的健康构成严重威胁，其主要危害包括肝脏毒性、致癌性、致畸性和免疫抑制作用。长期摄入低剂量的afb1可引起慢性肝病，进而发展为肝硬化和肝癌。对于动物，黄曲霉毒素的暴露会导致生长迟缓、免疫功能低下、繁殖障碍等不良反应。由于其严重的健康危害，许多国家和地区对食品中黄曲霉毒素的含量制定了严格的限量标准。中国国家标准规定，粮食及其制品中的afb1含量不得超过20μg/kg，乳制品中不得超过0.5μg/kg。
4、当前，黄曲霉毒素b1的检测方法主要包括仪器分析法和免疫分析法。仪器分析法如高效液相色谱(hplc)、气相色谱(gc)和液质联用(lc-ms)等方法具有高灵敏度和高准确性，但这些方法设备昂贵、
5、2.时间分辨荧光免疫分析技术
6、时间分辨荧光免疫分析技术(time-reso l ved f l uorescence immunoassay，trfia)是一种新兴的免疫分析技术，近年来在食品安全检测领域得到了广泛关注和应用。trf ia利用稀土元素(如铕eu3+、铽tb3+等)作为荧光标记物，这些稀土元素具有长寿命荧光特性，可以有效地避免样品基质的自发荧光干扰，从而显著提高检测的灵敏度和特异性。trfia的检测过程包括样品处理、免疫反应、荧光标记、信号测定和数据分析等步骤。
7、与传统的荧光分析技术相比，trfia具有以下优点：
8、高灵敏度：稀土元素的长寿命荧光信号可以显著提高检测的灵敏度，检测限可达到pg级别。
9、高特异性：trf ia能够有效避免样品基质的自发荧光干扰，提高了检测的特异性和准确性。
10、快速简便：trf ia操作简便，检测速度快，适合大规模样品的快速筛查。
11、高稳定性：稀土元素荧光标记物具有良好的化学稳定性，不易受环境因素影响。
12、3.黄酒中的黄曲霉毒素b1检测需求
13、黄酒是我国传统的发酵酒，具有悠久的历史和独特的风味，广受消费者喜爱。黄酒的酿造过程复杂，涉及多种微生物的参与，且大部分工艺是在开放环境中进行，这为霉菌的滋生提供了条件。黄曲霉毒素b1是黄酒中潜在的安全隐患，对其进行有效检测对于保障消费者的健康具有重要意义。
14、目前，黄酒中黄曲霉毒素b1的检测方法主要是高效液相色谱(hplc)和酶联免疫吸附法(el isa)。然而，hplc方法设备昂贵、操作复杂，难以满足企业日常检测的需求；elisa方法虽然快速简便，但容易出现假阳性，检测结果的可靠性有待提高。因此，开发一种高灵敏度、高特异性、快速简便的黄酒中黄曲霉毒素b1检测方法迫在眉睫。
15、4.本专利技术的目的与意义
16、本专利技术提供了一种基于时间分辨荧光免疫层析技术的黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，旨在解决现有检测方法灵敏度不高、特异性不强、操作复杂等问题。通过优化样品前处理、免疫反应条件和荧光标记物，本专利技术实现了黄曲霉毒素b1的高灵敏度和高特异性检测。该方法操作简便、检测速度快，适用于大规模样品的快速筛查和定量分析。
17、5.技术方案的创新点
18、本专利技术的创新点主要包括以下几个方面：
19、样品前处理优化：通过研究不同振荡时间、反应温度和层析时间对检测结果的影响，优化了样品前处理条件，提高了检测的灵敏度和准确性。
20、免疫反应优化：采用稀土元素作为荧光标记物，结合时间分辨荧光免疫层析技术，显著提高了检测的特异性和灵敏度。
21、标准曲线的建立：通过标准曲线的建立，实现了样品中黄曲霉毒素b1的定量分析，检测限达到0.3μg/kg，线性范围为0.8-12.0μg/kg。
22、方法学验证：通过批内和批间的准确度和精密度试验，验证了该方法的可靠性和重复性；与高效液相色谱法比对，结果具有良好的一致性。
23、6.应用前景
24、本专利技术的检测方法特别适用于黄酒中的黄曲霉毒素b1检测，也可推广应用于其他食品和饲料中的黄曲霉毒素检测。该方法不仅可以用于企业的日常检测和质量控制，也可用于监管部门的监督抽查和风险评估。通过该方法的应用，可以有效保障食品安全，减少黄曲霉毒素对公众健康的威胁，提高食品行业的质量管理水平。
25、综上所述，本专利技术提供了一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，具有重要的理论价值和实际应用意义。通过时间分辨荧光免疫层析技术的应用，本专利技术实现了黄曲霉毒素b1的高效检测，为食品安全检测提供了新思路和新方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，包括以下步骤：
2、(1)样品前处理：将黄酒样品加入稀释液，进行振荡、离心和过滤处理；
3、(2)层析反应：将处理后的样品加入时间分辨荧光免疫层析试纸条的样品杯中，进行层析反应；
4、(3)信号检测：使用时间分辨荧光读数仪读取试纸条上的检测信号，计算检测线t信号值与质控线c信号值的比值(t/c)；
5、(4)定量分析：根据标准曲线，通过t/c比值计算样品中黄曲霉毒素b1的含量。
6、作为本专利技术优选的技术方案，所述样品前处理步骤中的振荡时间为20min，反应温度为37℃，层析时间为6min。
7、作为本专利技术优选的技术方案，所述样品稀释液的制备包括以下步骤：
8、称取1.0g蔗糖、0.5g牛血清白蛋白和2.5g吐温20，混匀后用超纯水定容至100.0ml。
9、作为本专利技术优选的技术方案，所述标准曲线的制备包括以下步骤：
10、(1)配制黄曲霉毒素b1标准储备溶液；
11、(2)将标准储备溶液用空白基质溶液梯度稀释，配制成不同浓度的系列标准工作溶液；
12、(3)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种黄曲霉毒素B1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素B1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的振荡时间为20min，反应温度为37℃，层析时间为6min。
3.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素B1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述样品稀释液的制备包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素B1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述标准曲线的制备包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素B1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述检测限为0.3μg/kg，线性范围为0.8-12.0μg/kg，对应的标准曲线方程为y＝-0.1913x+0.5206(R2＝0.9948)。
6.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素B1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，其批内准确度和精密度的回收率在77.9％-105.7％，变异系数在4.5％-10.3％；批间准确度和精密度的回收率在75.9％-85.8％，变异系数在8.1％-13.9％。
...【技术特征摘要】
1.一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的振荡时间为20min，反应温度为37℃，层析时间为6min。
3.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述样品稀释液的制备包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述标准曲线的制备包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，所述检测限为0.3μg/kg，线性范围为0.8-12.0μg/kg，对应的标准曲线方程为y＝-0.1913x+0.5206(r2＝0.9948)。
6.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素b1高灵敏高快速检测方法，其特征在于，其批内准确度和精密度的回收率在77.9％-105.7％，变异系数...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱梦洁，王盾，王督，凌冬，董菁，王雪，
申请(专利权)人：襄阳市农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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