【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤分子生物学，具体涉及一种多发性骨髓瘤耐药相关的eccdna分子及其应用。
技术介绍
1、多发性骨髓瘤(mm)是一组克隆性浆细胞恶性增殖性疾病，是血液系统的第二大常见肿瘤。尽管近年来多发性骨髓瘤的治疗取得了显著进展，但10年生存率仍仅为17％。在过去的二十年里，虽然蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂的问世将多发性骨髓瘤的总生存期延长了3-6年，然而，随着治疗时间延长，多发性骨髓瘤在各种治疗压力下终会出现克隆演变，最终导致疾病进展、复发。当多发性骨髓瘤进展到复发阶段时，治疗效果往往令人沮丧。阐明复发mm的发病机制，寻求新的有效治疗方法是多发性骨髓瘤治疗领域的当务之急。
2、染色体外环状dna(eccdna)是一组存在于细胞核内的，大小和序列不同的，环状双链或单链dna分子，来源于又独立于染色体dna。eccdna于1965年首次被证实存，直到2015随着circle-seq技术的发展，关于eccdna的研究逐渐增加。eccdna广泛分布于真核生物中，包括植物、纤毛虫、酵母、爪蟾、果蝇、哺乳动物和鸽子。一系列研究证实，eccdna在许多生理和病理过程中发挥着重要作用，包括基因扩增、端粒长度修复、基因组可塑性、分子海绵。尽管eccdna产生的机制仍然不太清楚，但有四种被广泛接受的假说模型：断裂-融合桥(bfb)循环、染色体碎裂、游离小体和易位-缺失-扩增模型。总之，eccdna是基因组高度不稳定的产物。根据大小和序列，eccdna可分为五种类型：小多分散dna(spcdna)、microdna、tcircle/cc
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的是提供一种多发性骨髓瘤耐药相关的eccdna分子。具体是利用circle-seq测序鉴定出一种在复发耐药mm中异常表达的新型eccdna分子eccdnachr7:2101675-2102072，再通过反向pcr(quantitative polymerase chain reaction，pcr)+sanger测序验证其成环属性，最后扩大样本验证该eccdna是复发耐药mm中的广泛存在的分子，并在细胞株中证实其一定程度上介导了硼替佐米耐药。
2、所述的多发性骨髓瘤耐药相关的eccdna分子序列为：
3、agaacaaagacgcttcttccctcaacttaccaaagtgagcagcctctatgctgccacccaccagactaccggctccatgctcaccaaagtgaacagcttctatgctgctcacccactagactgttggctccgtgcacacagggccacagctgtctcagtcaccatcacagcccaagctggcccacgcctgacacatgctggataaacacataccaggcaggagaaggaggagtgcagtccagtgcacacagggggctctgcagctgggaagaccctgactggaggtctgaatctgccatgggtgggagtgggcagatcacacagcctcgctgaccttggaccctcctgtctgactcaggactgagtctccccagcagaagaggctgagagcacagga。
4、本专利技术的第二个目的是提供检测所述的eccdna分子试剂在制备多发性骨髓瘤患者诊断和/或预后制剂中的应用。
5、本专利技术的第三个目的是提供检测所述的eccdna分子试剂在制备多发性骨髓瘤复发患者诊断、预后或耐药检测制剂中的应用。
6、所述的检测eccdna分子试剂包括pcr检测试剂或者原位杂交检测试剂。
7、进一步地，
8、pcr检测试剂包括引物：
9、f：accaggcaggagaaggaggag
10、r：ggtaagttgagggaagaagcg。
11、本专利技术的第四个目的是提供过表达所述的eccdna分子的试剂在制备增强多发性骨髓瘤细胞侵袭性制剂中的应用。
12、本专利技术的第五个目的是提供抑制所述的eccdna分子表达的试剂在制备降低多发性骨髓瘤细胞侵袭性制剂中的应用。
13、多发性骨髓瘤是一组异质性极大的浆细胞系统恶性肿瘤，生存期可跨越数月到10余年不等。多年来，随着蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂等的使用，多发性骨髓瘤的生存期得到了明显的改善，然而该病仍然是不可治愈的疾病，且随着时间的延长，疾病终将复发耐药，一旦复发耐药往往治疗效果不佳，预后较差。寻找mm复发的机制有助于进一步寻找复发耐药mm患者的方向。
14、本专利技术的研究通过对缓解mm病人及规律治疗中复发mm患者进行circle-seq测序在每个样本中均检测出大量eccdna分子，选择了两个样本中高表达的8个分子进行反向pcr及sanger测序验证，其中t1标本中的eccdnachr7:2101675-2102072被成功鉴定环状属性。扩大临床样本发现其在复发mm中高阳性率，而在缓解mm中均为阴性。并通过转染该分子计算ic50、凋亡细胞比例、transwell迁移实验进一步提示该分子与mm复发硼替佐米耐药有一定相关性。
15、总之，本专利技术在复发mm病人中检测到了特殊的eccdnachr7:2101675-2102072分子，该分子对mm患者复发和耐药的机制及治疗提供了新方向。
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1.一种多发性骨髓瘤耐药相关的EccDNA分子，所述的EccDNA分子的序列为：
2.检测权利要求1所述的EccDNA分子试剂在制备多发性骨髓瘤复发患者诊断、预后或耐药检测制剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测权利要求1所述的EccDNA分子试剂包括PCR检测试剂或者原位杂交检测试剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，PCR检测试剂包括引物：
5.检测权利要求1所述的EccDNA分子试剂在制备多发性骨髓瘤患者诊断和/或预后制剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的检测权利要求1所述的EccDNA分子试剂包括PCR检测试剂或者原位杂交检测试剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，PCR检测试剂包括引物：
8.过表达权利要求1所述的EccDNA分子的试剂在制备增强多发性骨髓瘤细胞侵袭性制剂中的应用。
9.抑制权利要求1所述的EccDNA分子表达的试剂在制备降低多发性骨髓瘤细胞侵袭性制剂中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种多发性骨髓瘤耐药相关的eccdna分子，所述的eccdna分子的序列为：
2.检测权利要求1所述的eccdna分子试剂在制备多发性骨髓瘤复发患者诊断、预后或耐药检测制剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测权利要求1所述的eccdna分子试剂包括pcr检测试剂或者原位杂交检测试剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，pcr检测试剂包括引物：
5.检测权利要求1所述的eccdna分子试剂在制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：傅云峰，李方方，高萌，马金旗，唐浩，龙心怡，唐思诗，
申请(专利权)人：中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：
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