【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然活性成分检测，更具体地，涉及一种仿刺参海参皂苷半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、仿刺参(apostichopus japonicus)属于棘皮动物门海参纲遁手目刺参科动物，具有较高的食用和药用价值，是一种名贵的海洋滋补品。我国是海参养殖、加工大国，国内海参加工产品主要有干海参、水发海参以及深加工海参制品。深加工海参产品附加值高，增加了科技含量，但是缺乏对原料及产品的质量控制指标。仿刺参海参皂苷作为仿刺参重要的营养成分，如何建立仿刺参海参皂苷的快速精准检测成为制约海参产业发展的限制因素。
2、有关海参皂苷的最早报道始于20世纪50年代，1952年nigrelli从阿氏辐肛参(actinopyga agassizi)体内的居维氏管中分离得到了一种海参皂苷，之后对海参皂苷的研究日渐活跃。随着质谱技术的成熟，推动了海参皂苷的测定技术迅猛的发展，迄今已阐明了100余种海参皂苷的结构。海参皂苷由苷元和寡糖链两部分组成，苷元的3位上有羟基取代，与糖通过β-o-糖苷键结合成苷。
3、目前，海参皂苷测定方法的文献报道不多，包括薄层色谱法(tlc)、高效液相色谱法(hplc)以及色谱-质谱联用法(lc-ms/ms)。tlc法主要用于海参皂苷的分离和纯化，检测灵敏度低。hplc-fld法由于基质效应的干扰，采用荧光检测在灵敏度和选择性方面存在问题。采用色谱质谱法(lc-ms/ms)检测，可提高选择性和灵敏度，但设备昂贵，对专业技术人员要求较高，免疫分析检测技术是基于抗原抗体反应的原理，
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中缺少仿刺参海参皂苷半抗原、人工抗原、抗体的缺陷和不足，提供一种仿刺参海参皂苷半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。
2、本专利技术的第一个目的在于提供一种仿刺参海参皂苷半抗原。
3、本专利技术的第二个目的在于提供所述仿刺参海参皂苷半抗原的制备方法。
4、本专利技术的第三个目的在于提供一种仿刺参海参皂苷人工抗原。。
5、本专利技术的第四个目的在于提供所述仿刺参海参皂苷人工抗原的制备方法。
6、本专利技术的第五个目在于提供一种仿刺参海参皂苷抗体。
7、本专利技术的第六个目在于提供一种检测仿刺参海参皂苷的试剂盒。
8、本专利技术的第七个目在于提供一种检测仿刺参海参皂苷的免疫分析方法。
9、本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
10、一种仿刺参海参皂苷半抗原，所述半抗原的结构式如式(i)所示：
11、
12、本专利技术提供的式(i)所述的仿刺参海参皂苷半抗原具活性的-br基团，可与载体蛋白、抗体、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等分子上的氨基结合，制备多种检测试剂。所述仿刺参海参皂苷半抗原去除了仿刺参海参皂苷寡糖链部分，最大程度地保留了仿刺参海参皂苷的苷元分子骨架结构，有利于制备与仿刺参海参皂苷多组分的交叉反应率高的抗体，同时保留诱导高亲和力抗体的特征。
13、本专利技术还提供所述仿刺参海参皂苷半抗原的制备方法，包括如下步骤：
14、s1.将仿刺参海参皂苷holotoxin a1溶于缓冲液中，加入助溶剂，溶解后加入柚苷酶，混匀，加热反应；萃取，合并提取液，洗涤、干燥、过滤，除溶剂，干燥得淡黄色固体；所述仿刺参海参皂苷holotoxin a1结构式为(cas：85344-35-0)；
15、s2.将步骤s1所得淡黄色固体溶于无水醇溶液中，加入含溴的醇溶液，反应完毕后去除溶剂及过量的溴，得黄色膏体，再多次重结晶，干燥得黄色固体，即为式(i)所示仿刺参海参皂苷半抗原。
16、优选地，步骤s1所述缓冲液为ph 4.4的0.1m磷酸-醋酸缓冲液。
17、优选地，步骤s1所述的助溶剂为乙醇，乙醇与磷酸-醋酸缓冲液体积比为1:9。
18、优选地，步骤s1所述反应为38～42℃反应4～6d，通过tlc指示反应是否完成。再优选地，所述反应为40℃反应5d。
19、优选地，步骤s1萃取所用萃取剂为乙酸乙酯和正丁醇。
20、优选地，步骤s1所述洗涤为采用稀盐酸，所述干燥为采用无水硫酸钠干燥。
21、优选地，步骤s1所述除溶剂采用减压蒸除溶剂。
22、优选地，所述仿刺参海参皂苷与柚苷酶的质量比为0.5～10:1。
23、进一步优选地，所述仿刺参海参皂苷与柚苷酶的质量比为2～4:1；再优选地，所述仿刺参海参皂苷与柚苷酶的质量比为3:1。
24、优选地，步骤s2所述反应为4℃恒温反应3h，通过tlc指示反应是否完成。
25、优选地，步骤s2所述去除溶剂采用旋转蒸发法。
26、优选地，所述重结晶采用体积比为1:1的甲醇和正己烷混合溶剂。
27、优选地，所述仿刺参海参皂苷与溴的摩尔比为1:3～17。
28、进一步优选地，所述仿刺参海参皂苷与溴的摩尔比为1:5～15；再优选地，仿刺参海参皂苷与溴的摩尔比为1::10～11。
29、本专利技术还提供所述仿刺参海参皂苷半抗原在制备仿刺参海参皂苷人工抗原中的应用。
30、一种仿刺参海参皂苷人工抗原，所述仿刺参海参皂苷人工抗原的结构式如式(ii)所示：
31、
32、优选地，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白(bsa)或鸡卵清蛋白(ova)。
33、本专利技术还提供所述仿刺参海参皂苷人工抗原的制备方法，是将式(i)所述仿刺参海参皂苷半抗原溶于溶剂后，滴加到含有载体蛋白的缓冲液中反应，调ph至9.6～10，4～6℃反应，再加入甘氨酸封闭，透析纯化，即得式(ii)所示仿刺参海参皂苷人工抗原。
34、优选地，所述仿刺参海参皂苷半抗原与载体蛋白的投料摩尔比为5～100:1。
35、进一步优选地，所述仿刺参海参皂苷半抗原与载体蛋白的投料摩尔比为30～60:1；再优选地，所述仿刺参海参皂苷半抗原与载体蛋白的摩尔比为40～50:1。
36、优选地，所述仿刺参海参皂苷半抗原与甘氨酸的摩尔比为1:10～60。
37、进一步优选地，所述仿刺参本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种仿刺参海参皂苷半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构式如式(I)所示：
2.权利要求1所述仿刺参海参皂苷半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.权利要求1所述仿刺参海参皂苷半抗原在制备仿刺参海参皂苷人工抗原中的应用。
4.一种仿刺参海参皂苷人工抗原，其特征在于，所述仿刺参海参皂苷人工抗原的结构式如式(II)所示：
5.根据权利要求4所述仿刺参海参皂苷人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白或鸡卵清蛋白。
6.权利要求4或5所述仿刺参海参皂苷人工抗原的制备方法，，其特征在于，将权利要求1所述仿刺参海参皂苷半抗原溶于溶剂后，滴加到含有载体蛋白的缓冲液中反应，调pH至9.6～10，4～6℃反应，封闭，透析纯化，即得式(II)所示海参皂苷人工抗原。
7.权利要求4或5所述仿刺参海参皂苷人工抗原在制备仿刺参海参皂苷抗体中的应用。
8.一种仿刺参海参皂苷抗体，其特征在于，是以权利要求4或5所述仿刺参海参皂苷人工抗原为免疫原免疫动物制备得到。
9.一种检测仿刺参海参皂苷的试
10.一种非疾病诊断目的检测仿刺参海参皂苷的免疫分析方法，其特征在于，以权利要求4或5所述仿刺参海参皂苷人工抗原为包被原，以权利要求8所述仿刺参海参皂苷抗体为检测抗体进行检测。
...【技术特征摘要】
1.一种仿刺参海参皂苷半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构式如式(i)所示：
2.权利要求1所述仿刺参海参皂苷半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.权利要求1所述仿刺参海参皂苷半抗原在制备仿刺参海参皂苷人工抗原中的应用。
4.一种仿刺参海参皂苷人工抗原，其特征在于，所述仿刺参海参皂苷人工抗原的结构式如式(ii)所示：
5.根据权利要求4所述仿刺参海参皂苷人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白或鸡卵清蛋白。
6.权利要求4或5所述仿刺参海参皂苷人工抗原的制备方法，，其特征在于，将权利要求1所述仿刺参海参皂苷半抗原溶于溶剂后，滴加到含有载体蛋白的缓冲液中反...
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