本发明专利技术涉及脱细胞生物活性支架技术领域，尤其是涉及源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料及其制备与应用。本发明专利技术将根尖周病损组织置于SDS溶液中进行脱细胞处理，然后依次进行去离子水处理和酶处理，最后后处理得到脱细胞外基质材料。本发明专利技术中脱细胞外基质材料的方法简单、使用便利、成本较低，制备得到的脱细胞外基质材料可保留原组织的活性成分；脱细胞外基质材料对间充质干细胞的增殖、迁移有促进作用，对间充质干细胞分化也有正向作用，可为牙髓再生支架提供新的技术方向，且原位获取的根尖周病损组织经脱细胞处理后原位移植也满足安全需要。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及脱细胞生物活性支架，尤其是涉及源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料及其制备与应用。
技术介绍
1、龋病及牙髓根尖周病是口腔临床的常见病和多发病，微生物感染是其主要致病因素，严重感染导致的并发症也会加重或诱发其他疾病，危害人体健康，影响患者生活质量，增加医疗负担。人群的恒牙患龋率大于89％，龋源性牙髓及根尖周病发病率也居高不下，常规治疗方法为根管治疗，但治疗后牙齿存在变色、脆性增加等问题，如何实现牙髓组织再生是目前的牙体牙髓领域的前沿问题。随着再生医学与组织工程的发展，利用干细胞、生长因子及生物材料共同作用为牙髓组织再生提供宽广前景。
2、其中脱细胞外基质材料是再生医学中理想的生物材料，它是指使用物理、化学、酶促等方法清除组织中细胞残留物，保留细胞外基质成分及生化微环境的生物材料，1948年科学家首次提出使用低温冻融法获得脱细胞的肌肉匀浆，随后对脱细胞材料的研究逐步深入，已有脱细胞肝脏、肌腱、心脏等支架见诸报道，也有一些脱细胞基质材料经fda批准被应用于临床，如应用于皮肤缺损修复的alloderm。也有研究者成功制备脱细胞牙髓支架，并证明其有良好的促牙髓再生能力，经过专利检索发现目前有脱细胞牙髓衍生水凝胶及脱细胞牙髓干细胞膜片的专利授权，然而人牙髓组织来源极为有限，通常可在拔出的健康正畸牙和阻生齿中获取少量，难以达到牙髓再生中生物支架的需求量，捐赠者的牙髓或者动物来源的牙髓存在伦理问题，在未来临床应用中存在较多限制，因此目前需要研发来源不受限制、可在牙髓再生中用作支架的脱细胞生物材料。
<
p>技术实现思路1、为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料及其制备与应用；本专利技术将根尖手术中获得的根尖病损组织进行脱细胞处理以去除其细胞成分，保留细胞外基质成分，获得自体来源的脱细胞外基质材料，并将其用作自体牙髓再生的生物活性支架。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术的第一个目的是提供源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，包括下述步骤：
4、将根尖周病损组织置于sds溶液中进行脱细胞处理，然后依次进行去离子水处理和酶处理，最后后处理得到脱细胞外基质材料。
5、在本专利技术的一个实施方式中，所述sds溶液为低浓度(质量分数为0.2％-1.0％)的sds溶液；
6、根尖周病损组织与sds溶液的体积比为1：20以上，sds溶液可更多。
7、在本专利技术的一个实施方式中，脱细胞处理过程中，温度为4℃，时间至少为24小时，同时需放置于转速为15次/分钟的平摆摇床上。
8、在本专利技术的一个实施方式中，去离子水处理过程中，温度为4℃，时间为1h。
9、在本专利技术的一个实施方式中，所述酶为dna酶和rna酶的混合物；
10、dna酶浓度为40-60u/ml，rna酶浓度为20-30u/ml。
11、在本专利技术的一个实施方式中，酶处理过程中，温度为37℃，时间为1-2h。
12、在本专利技术的一个实施方式中，所述后处理为利用去离子水进行若干次洗涤处理；
13、进一步的，洗涤处理过程重复4次，每次处理1h。
14、本专利技术中，采用低浓度表面活性剂溶液溶解破坏细胞膜结构，4℃条件下放置于平摆摇床上，使溶液不断冲洗样本，将样本的细胞内容物冲走，经过24小时的处理获得基本去除细胞成分；然后通过去离子水冲洗以去除样本中残留的表面活性剂，采用dna酶和rna酶处理去除样本中残留的dna与rna。
15、本专利技术的第二个目的是提供一种通过上述方法制备得到的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料。
16、本专利技术的第三个目的是提供一种源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料在制备脱细胞外基质支架中的应用。
17、本专利技术的第四个目的是提供一种脱细胞外基质支架，包括脱细胞外基质材料和间充质干细胞。
18、在本专利技术的一个实施方式中，脱细胞外基质支架包括50mg脱细胞外基质材料和10^6个以上的间充质干细胞。
19、本专利技术的第五个目的是提供一种脱细胞外基质支架在制备牙髓再生药物中的应用。
20、作为常见的牙体牙髓疾病，慢性根尖周炎被纳入考虑范围，它是牙髓炎进展至根尖周组织的情况，个体患病率约为52％，牙齿患病率约为5％。急性期以炎性浸润和根尖周骨破坏为主，慢性期则在免疫细胞、干细胞、血管内皮细胞等的协助下开始缓慢修复。慢性根尖周炎根尖病损组织可看作机体处于动态调控的微环境，兼具有利于和不利于组织再生的细胞组分。经过完善根管治疗的患者根尖病损组织趋于修复状态，测序及免疫染色显示根尖周病损组织中有vegf、vegfr、tgf-β、fgf2、opn等表达，且根尖周炎环境下间充质干细胞的成骨分化能力上调。本专利技术通过对慢性根尖周病损组织进行脱细胞处理将其变废为宝，去除细胞内容物，保留细胞外基质成分，期待脱细胞处理后能够保留一部分活性因子以更好地发挥组织再生支架的作用。
21、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
22、本专利技术为了解决牙髓再生缺乏合适支架材料的临床问题，现有技术虽然已有脱细胞牙髓尝试用于牙髓再生的研究报道，但是自体来源的牙髓组织非常稀少、异体来源的牙髓组织存在伦理风险及免疫排异问题，与之相比，慢性根尖周病损组织来源较多，可以实现自取自用、变废为宝，并且处于修复状态的根尖周病损组织富含多种活性因子，sds溶液处理根尖周病损组织的方法以去除细胞内容物、获得脱细胞外基质材料。
23、本专利技术中脱细胞外基质材料的方法简单、使用便利、成本较低，制备得到的脱细胞外基质材料可保留原组织的活性成分；脱细胞外基质材料对间充质干细胞的增殖、迁移有促进作用，对间充质干细胞分化也有正向作用，可为牙髓再生支架提供新的技术方向，且原位获取的根尖周病损组织经脱细胞处理后原位移植也满足安全需要。
本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，所述SDS溶液为质量浓度为0.2％-1.0％的SDS溶液；
3.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，脱细胞处理过程中，温度为4℃，时间为24小时以上。
4.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，酶为DNA酶和RNA酶的混合物；
5.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，酶处理过程中，温度为37℃，时间为1-2h。
6.一种通过权利要求1～5任一所述方法制备得到的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料。
7.一种如权利要求6所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料在制备脱细胞外基质支架中的应用。
8.一种脱细胞外基质支架，其特征在于，包括权利要求6所述的脱细胞外基质材料和间充质干细胞。
9.根据权利要求8所述的一种脱细胞外基质支架，其特征在于，脱细胞外基质支架包括50mg脱细胞外基质材料和10^6个以上的间充质干细胞。
10.一种如权利要求8～9任一所述的脱细胞外基质支架在制备牙髓再生药物中的应用。
...
【技术特征摘要】
1.源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，所述sds溶液为质量浓度为0.2％-1.0％的sds溶液；
3.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，脱细胞处理过程中，温度为4℃，时间为24小时以上。
4.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征在于，酶为dna酶和rna酶的混合物；
5.根据权利要求1所述的源自根尖周病损组织的脱细胞外基质材料的制备方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾申生，文晋，胡楠，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。