【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及醛氧化酶aox1基因敲除动物模型的构建方法及应用。
技术介绍
1、增加体能已被证明在预防和改善一系列疾病方面具有积极的作用，如阿尔茨海默氏病、癌症、糖尿病和心血管疾病。有氧运动被广泛认为对健康和健身有积极作用，如跑步、游泳、骑自行车。经常参加有氧运动可以改善心血管功能、增强耐力、控制体重、降低慢性疾病和年龄相关综合征的风险。线粒体功能在有氧运动表现中起着关键作用，因为它负责产生运动过程中所需的大部分atp能量。线粒体功能受到多种因素的影响，尤其是电子传递链（etc），它是位于线粒体内膜上的一系列蛋白质复合体。许多研究报告表明，增加线粒体复合物的含量可以增强有氧运动能力，如琥珀酸脱氢酶。此外，某些关键信号通路的激活也可以提高有氧运动的表现，如ampk-过氧化物酶体增殖体激活受体-δ通路；这些信号通路参与调节线粒体的生物发生和功能，从而增加线粒体的数量和活性。
2、骨骼肌是人体中最丰富、适应性最强的组织，在调节运动能力方面起着至关重要的作用。它由i型纤维、ii型纤维两种类型的肌纤维组成，每一种都有不同的特征和功能。i型纤维也被称为慢肌纤维或红色纤维，富含线粒体，具有高氧化能力；这些纤维非常适合耐力活动和持续收缩，因为它们能够通过有氧代谢产生atp。另一方面，ii型纤维也被称为快肌纤维或白色纤维，线粒体密度较低，主要依靠无氧糖酵解来产生atp。这些纤维更适合于高强度收缩和爆炸性运动。骨骼肌中i型和ii型纤维的比例可以根据遗传和训练等因素而变化。i型纤维比例较高的人往往有更强的有氧耐力，而ii
3、醛氧化酶1（aox1）是钼黄素酶家族的一员，它可以催化杂环的羟基化，并将醛氧化成相应的羧酸。它在人和其他哺乳动物组织中广泛表达，主要在脂肪组织、肝脏和肾上腺中表达。该酶具有广泛的底物，可以催化杂环的羟基化和醛的氧化，将它们转化为相应的羧酸。目前对aox1的研究相对有限。有研究表明aox1可以促进前列腺癌细胞的增殖，这引起了人们的关注。此外，研究发现aox1通过上调cd133的表达促进结直肠癌细胞的增殖发育。近期研究也表明，抑制aox1可能有助于缓解肝纤维化症状。鉴于aox1的底物范围广泛，在各种组织器官中广泛表达，扩大我们对aox1功能的认识具有重要的生理意义。然而目前并没有有关醛氧化酶1（aox1）在运动方面的研究。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种醛氧化酶aox1基因敲除动物模型的构建方法及应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术第一方面提供醛氧化酶aox1基因敲除动物模型的构建方法，包括如下步骤：
4、步骤（1），设计并合成两个sgrna序列，分别为sgrna-1和sgrna-2；序列如下：
5、sgrna-1：5′-caggacaaagccaactctag-3′；
6、sgrna-2：5′-agattacccctgatcgacag-3′；
7、步骤（2），将合成的两个sgrna和cas9 mrna一同注射进入小鼠的受精卵中，再将注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠的子宫中，获得f0代小鼠；
8、步骤（3），f0代小鼠与异性野生型小鼠交配，后代基因型鉴定获得f1代杂合型基因敲除小鼠；f1代杂合小鼠雌雄近交，后代基因型鉴定获得f2代纯合型基因敲除小鼠，即为醛氧化酶aox1基因敲除动物模型。
9、进一步，优选的是，步骤（2）中，cas9mrna注射浓度为50ng/μl，sgrna-1注射浓度为20ng/μl，sgrna-2注射浓度为20ng/μl。
10、本专利技术第二方面提供上述醛氧化酶aox1基因敲除动物模型的构建方法构建得到的醛氧化酶aox1基因敲除动物模型。
11、本专利技术第三方面提供上述的醛氧化酶aox1基因敲除动物模型在制备或筛选增强运动能力或抗疲劳药物中的应用。
12、本专利技术第四方面提供醛氧化酶aox1基因敲除试剂盒，包括：sgrna-1、sgrna-2和cas9 mrna；其中，sgrna-1、sgrna-2序列如下：
13、sgrna-1：5′-caggacaaagccaactctag-3′；
14、sgrna-2：5′-agattacccctgatcgacag-3′。
15、本专利技术第五方面提供醛氧化酶aox1的抑制剂在制备增强运动能力或抗疲劳药物中的应用；其中，醛氧化酶aox1的抑制剂为去甲哈尔满或小干扰rna；
16、所述的小干扰rna 为sirna-aox1-450引物组或者sirna-aox1-793引物组；
17、其中，sirna-aox1-450引物组序列如下：
18、sirna-aox1-450正向序列：5′-cucuagaucaguuaacugatt-3′；
19、sirna-aox1-450反向序列：5′-ucaguuaacugaucuagagtt-3′；
20、sirna-aox1-793引物组序列如下：
21、sirna-aox1-793正向序列：5′-ggaacuuguggaagcuaaatt-3′；
22、sirna-aox1-793反向序列：5′-uuuagcuuccacaaguucctt-3′。
23、本专利技术第六方面提供一种增强运动能力或抗疲劳药物，包括药学上可接受的载体和醛氧化酶aox1的抑制剂；
24、所述的醛氧化酶aox1的抑制剂为去甲哈尔满或小干扰rna；
25、所述的小干扰rna 为sirna-aox1-450引物组或者sirna-aox1-793引物组；
26、其中，sirna-aox1-450引物组序列如下：
27、sirna-aox1-450正向序列：5′-cucuagaucaguuaacugatt-3′；
28、sirna-aox1-450反向序列：5′-ucaguuaacugaucuagagtt-3′；
29、sirna-aox1-793引物组序列如下：
30、sirna-aox1-793正向序列：5′-ggaacuuguggaagcuaaatt-3′；
31、sirna-aox1-793反向序列：5′-uuuagcuuccacaaguucctt-3′。
32、本专利技术第七方面提供一种非治疗性增强运动能力的方法，采用醛氧化酶aox1的抑制剂对醛氧化酶aox1进行抑制；所述的醛氧化酶aox1的抑制剂为去甲哈尔满或小干扰rna；
33、所述的小干扰rna为sirna-aox1-450引物组或者sirna-aox1-793引物组；
34、其中，sirna-aox1-450引物组序列如下：
35、sirna-aox本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.醛氧化酶Aox1基因敲除动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的醛氧化酶Aox1基因敲除动物模型的构建方法，其特征在于，步骤（2）中，Cas9mRNA注射浓度为50ng/μL，sgRNA-1注射浓度为20ng/μL，sgRNA-2注射浓度为20ng/μL。
3.权利要求1或2所述的醛氧化酶Aox1基因敲除动物模型的构建方法构建得到的醛氧化酶Aox1基因敲除动物模型。
4.权利要求3所述的醛氧化酶Aox1基因敲除动物模型在制备或筛选增强运动能力或抗疲劳药物中的应用。
5.醛氧化酶Aox1基因敲除试剂盒，其特征在于，包括：sgRNA-1、sgRNA-2和Cas9 mRNA；其中，sgRNA-1、sgRNA-2序列如下：
6.醛氧化酶Aox1的抑制剂在制备增强运动能力或抗疲劳药物中的应用，其特征在于：所述的醛氧化酶Aox1的抑制剂为去甲哈尔满或小干扰RNA；
7.一种增强运动能力或抗疲劳药物，其特征在于，包括药学上可接受的载体和醛氧化酶Aox1的抑制剂；
8.一种非治
...【技术特征摘要】
1.醛氧化酶aox1基因敲除动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的醛氧化酶aox1基因敲除动物模型的构建方法，其特征在于，步骤（2）中，cas9mrna注射浓度为50ng/μl，sgrna-1注射浓度为20ng/μl，sgrna-2注射浓度为20ng/μl。
3.权利要求1或2所述的醛氧化酶aox1基因敲除动物模型的构建方法构建得到的醛氧化酶aox1基因敲除动物模型。
4.权利要求3所述的醛氧化酶aox1基因敲除动物模型在制备或筛选增强运动能力或抗疲劳药物中的应用。
5.醛氧化酶aox...
【专利技术属性】
技术研发人员：向阳，王齐权，刘彦，田小利，兰新强，汪本辉，黄天鹅，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：
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