【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物应用，特别是涉及一株贝莱斯芽孢杆菌cb6和所产的抗菌蛋白及应用。
技术介绍
1、随着多药耐药菌的不断出现及广泛传播，特别是泛耐药病原菌可转移耐药基因的发现及扩散。多重耐药大肠杆菌b2(escherichia coli,e.coli b2)作为引起人和动物肠道感染或尿道等多种局部器官感染的主要病原菌，其对多种抗生素均产生耐药性，如对多粘菌素和碳青霉烯类等药物耐药，属于革兰氏阴性菌中最常见的病原体之一。在大肠杆菌的系统发育类群中，e.coli b2类群同时含有肠外致病性大肠杆菌(expc)和肠致病性大肠杆菌(epec)菌株。目前，e.coli b2已成为危害人和动物健康的重要病原菌。随着该菌对临床常用抗生素的耐药性不断增强，已给人类和动物养殖业造成了严重的经济损失，同时也给临床抗感染治疗带来了巨大的挑战。
2、芽孢杆菌(bacillus)是一类常见的细菌，在其生长过程中可以产生多种具有抗菌活性的物质，如抗生素、细菌素以及抗菌蛋白等，可以对其他细菌产生杀灭或抑制作用，有助于芽孢杆菌在竞争中取得生长优势，并保护其生存环境免受其他细菌的侵害。抗菌蛋白是一类存在于多种生物体内的天然防御分子，对微生物(如细菌、真菌以及病毒等)具有抗菌活性良好、抗菌谱广和安全稳定的优点，对人类疾病具有治疗潜力，被认为是研发新型抗菌药物的重要资源。目前微生物代谢产生的抗菌蛋白，虽然可以对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌在内的多种病原菌产生广谱的抵抗作用，但针对当前临床中革兰氏阴性病原菌危害严重，且高度耐药性问题，尚未有针对革兰氏阴性菌，
3、基于此，探索具有针对耐多粘菌素和耐碳青霉烯类药物的大肠杆菌等耐药型革兰氏阴性菌的抗菌蛋白，对临床抗感染治疗以及丰富当前抗菌药库等具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一株贝莱斯芽孢杆菌cb6和所产的抗菌蛋白及应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术自行分离出一株对多重耐药大肠杆菌等革兰氏阴性菌具有较好拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌cb6，以该菌发酵制备的抗菌蛋白cb6-e对多种革兰氏阴性菌显示出良好的抗菌活性，且对多种动物具有较好的安全性，有望丰富当前已有的抗菌药物库，为治疗多药耐药革兰氏阴性菌的感染提供新希望。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一株产细菌素的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)cb6，其于2024年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.30515。
4、本专利技术还提供一种抑制革兰氏阴性菌的抗菌蛋白cb6-e，所述抗菌蛋白cb6-e由所述的贝莱斯芽孢杆菌cb6发酵获得，氨基酸序列如seq id no.1所示。
5、本专利技术还提供一种所述的抗菌蛋白cb6-e的制备方法，包括以所述的贝莱斯芽孢杆菌cb6进行接菌发酵，分别以硫酸铵沉降、透析截留和层析纯化对发酵产物进行提取和纯化，获得所述细菌素cb6-e的步骤。
6、进一步地，所述发酵的温度为28℃，发酵时间为48h；发酵初始ph为7.5。
7、进一步地，所述发酵是对所述贝莱斯芽孢杆菌cb6进行揺菌发酵，转速为180rpm。
8、进一步地，所述硫酸铵的饱和度为90％。
9、本专利技术还提供所述的贝莱斯芽孢杆菌cb6或所述的抗菌蛋白cb6-e在制备抑制革兰氏阴性细菌的药物中的应用。
10、进一步地，所述革兰氏阴性细菌为多重耐药的革兰氏阴性细菌。
11、进一步地，所述多重耐药的革兰氏阴性细菌为耐多粘菌素和耐碳青霉烯类药物的大肠杆菌。
12、本专利技术还提供一种抑制革兰氏阴性细菌的药物，有效成分为所述的抗菌蛋白cb6-e。
13、本专利技术公开了以下技术效果：
14、本专利技术自行分离出一株对多重耐药大肠杆菌等革兰氏阴性菌具有较好拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌cb6，经过“硫酸铵沉降—500da透析袋截留—葡聚糖琼脂糖交联凝胶层析柱纯化—deae-sephdex离子柱进一步纯化”得到了抗菌蛋白cb6-e，该抗菌蛋白cb6-e对多种革兰氏阴性菌均具有广谱抗菌活性，特别是对耐药型e.coli b2、沙门氏菌和铜绿假单胞菌的杀菌活性最强，mic为32μg/ml。
15、本专利技术获得的抗菌蛋白cb6-e对多种革兰氏阴性菌显示出良好的抗菌活性，且对多种动物具有较好的安全性，对感染多重耐药大肠杆菌的小鼠和大蜡螟均具有良好的治疗效果，其中20mg/kg的抗菌蛋白cb6-e可使感染多药耐药大肠杆菌的大蜡螟幼虫和小鼠存活率分别提高60％和80％，其具有成为新型抗革兰氏阴性菌药物的潜力。
16、本专利技术以一株对多粘菌素和碳青霉烯类药物耐药的大肠杆菌b2作为指示菌筛选新型抗革兰氏阴性菌的广谱抗菌药物。大肠杆菌b2为多重耐药(耐多粘菌素和耐碳青霉烯类药物)标准菌株，较其它耐药菌具有更强的耐药性，以该菌株作为指示菌筛选出的贝莱斯芽孢杆菌cb6，其产生的抗菌蛋白针对耐药性革兰氏阴性细菌的抑菌作用更强，效果更好。
17、本专利技术中贝莱斯芽孢杆菌cb6发酵制备的抗菌蛋白cb6-e有望丰富当前已有的抗菌药物库，为治疗多药耐药革兰氏阴性菌的感染提供新希望。
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1.一株产细菌素的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CB6，其特征在于，其于2024年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.30515。
2.一种抑制革兰氏阴性菌的抗菌蛋白CB6-E，其特征在于，所述抗菌蛋白CB6-E由权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌CB6发酵获得，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种如权利要求2所述的抗菌蛋白CB6-E的制备方法，其特征在于，包括以权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌CB6进行接菌发酵，分别以硫酸铵沉降、透析截留和层析纯化对发酵产物进行提取和纯化，获得所述细菌素CB6-E的步骤。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为28℃，发酵时间为48h；发酵初始pH为7.5。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述发酵是对所述贝莱斯芽孢杆菌CB6进行揺菌发酵，转速为180rpm。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述硫酸铵的饱和度为90％。
7.权利要求1所述的贝
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性细菌为多重耐药的革兰氏阴性细菌。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述多重耐药的革兰氏阴性细菌为多重耐药大肠杆菌。
10.一种抑制革兰氏阴性细菌的药物，其特征在于，有效成分为权利要求2所述的抗菌蛋白CB6-E。
...【技术特征摘要】
1.一株产细菌素的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)cb6，其特征在于，其于2024年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.30515。
2.一种抑制革兰氏阴性菌的抗菌蛋白cb6-e，其特征在于，所述抗菌蛋白cb6-e由权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌cb6发酵获得，氨基酸序列如seq id no.1所示。
3.一种如权利要求2所述的抗菌蛋白cb6-e的制备方法，其特征在于，包括以权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌cb6进行接菌发酵，分别以硫酸铵沉降、透析截留和层析纯化对发酵产物进行提取和纯化，获得所述细菌素cb6-e的步骤。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为28℃，发...
【专利技术属性】
技术研发人员：张海朋，王塔锦，马红霞，孔令聪，刘晓宇，官丽莉，贺承光，陈敬蕊，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：
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