【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，特别是涉及一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，属于乳酸菌筛选。
技术介绍
1、霉菌在食品腐败中扮演着重要的角色，全球5％到10％的食品生产由于霉菌污染而损失；此外，某些霉菌产生的霉菌毒素，具有致癌、诱变、致畸、神经毒性、肾毒性、免疫抑制和雌激素效应等毒性；随着人们对食品安全及健康问题的日益关注，高效、健康和安全无污染的天然微生物防腐剂逐渐替代传统的化学防腐剂，是食品工业的发展趋势；乳酸菌和丙酸杆菌作为最具代表性的益生菌种，在食品发酵、饮品等行业也被广泛、长期使用；它们能产生多种抗霉菌化合物，包括有机酸，如乙酸，乳酸，苯乙酸，丙酸和脂肪酸，以及环状二肽或蛋白质等化合物；乳酸菌和丙酸杆菌的不同菌种或同种不同菌株产生的抑霉菌活性产物存在差别，这些活性物质有可能存在协同抗霉菌作用，其中乳酸菌和丙酸杆菌在使用时需要对其进行筛选处理，目前对抑霉菌活性菌的研究多以单菌株为主，不能够对具有协同抑霉菌效果的组合菌株进行筛选。
2、因此，亟需对协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法进行改进，以解决上述存在的问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，通过精心设计的筛选流程，能够系统地评估丙酸杆菌与乳酸菌的协同抑霉菌活性，确保筛选出具有高效协同作用的菌种组合，其次，通过多孔板培养和观察霉菌生长情况，能够快速、直观地比较不同菌种组合的抑霉菌效果，最后，结合其他筛选条件，如p
2、为了达到上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，包括如下步骤：
3、s1：种子液的制备：乳酸菌种子液制备：1.从已有的乳酸菌菌种中选择适合的菌株；2.取一定量的菌种，将菌种转移到适合乳酸菌生长的培养基中；3.将接种后的培养基置于恒温培养箱中，在适宜的温度和氧气条件下培养；
4、丙酸杆菌种子液制备：1.从已有的丙酸杆菌种中选择适合的菌株；2.取一定量的菌种，将菌种转移到适合丙酸杆菌种生长的培养基中；3.将接种后的培养基置于恒温培养箱中，在适宜的温度和氧气条件下培养；
5、s2：霉菌孢子悬液的制备：用无菌蛋白胨水(0.1％w/v)或其他适宜溶液将霉菌孢子稀释至适当浓度；
6、s3：菌液添加与培养：1.选取合适的多孔板，在每孔中加入100μl的乳酸菌和丙酸杆菌的单一或混合菌液，并设立不加菌悬液的孔作为对照；2.向每孔中加入1ml的wfh(0.7％琼脂)或其他适宜的培养基，等待培养基凝固；3.待培养基凝固后，向每孔正中央垂直加入1μl的霉菌孢子悬液；
7、s4：培养与观察：将多孔板置于恒温培养箱中，采用适宜的温度下培养，定期观察霉菌的生长情况，记录菌丝生长的速度、密度等关键指标；
8、s5：筛选与判断：比较加有混合菌株孔板与单一菌株孔板中霉菌的生长情况，当加有混合菌株孔板中霉菌生长弱于单一菌株时，认为该组合菌株具有协同抗霉菌活性，进一步通过比较不同组合的生长情况，判断最优的菌种组合。
9、优选的，所述s1中的乳酸菌种以及丙酸杆菌种子液接种时保持无菌操作，所述培养基采用mrs培养基，菌种接种方法采用无菌环以及习惯接种法。
10、优选的，所述s2中霉菌孢子稀释浓度为1×105个/ml。
11、优选的，所述s3中费氏丙酸杆菌和乳酸菌的单一或者混合菌液浓度为1×107cfu/ml，1μl霉菌孢子悬液浓度为1×105个/ml。
12、优选的，所述s1中的乳酸菌培养基包括水2～8g、牛肉膏3～10g、蛋白胨4～12g、酵母膏3～11g、番茄汁4～15g、葡萄糖1～7g、吐温2～8g、碳酸钙6～8g、溴甲酚绿3～7g和琼脂3～9g。
13、优选的，所述乳酸菌培养基的配制方法：
14、s6：按所需量取适量水加热；
15、s7：然后依次加入药品，待药品沸腾后倒入加了琼脂的锥形瓶中；
16、s8：最后进行121℃灭菌20分钟。
17、优选的，所述s7中加入的药品部包括琼脂。
18、优选的，所述s1中的乳酸菌种子液制备时的培养温度为30～37℃，所述丙酸杆菌种子液制备时的培养温度为35～40℃，所述乳酸菌种子液制备时的氧气浓度为21％，所述丙酸杆菌种子液制备时的氧气浓度为30％。
19、优选的，所述s1中乳酸菌种子液制备以及丙酸杆菌种子液制备时的时间为2h-2.5h，所述s3中的培养基凝固时间为1h。
20、优选的，将通过所述s1-s7筛选出的菌株在在实际食品体系中验证最优组合的抑霉菌效果，通过挑战性实验和耐久性实验，评估其在延长食品保质期、减缓霉菌蔓延速度等方面的应用情况。
21、本专利技术至少具备以下有益效果：
22、1、该方法通过精心设计的筛选流程，能够系统地评估丙酸杆菌与乳酸菌的协同抑霉菌活性，确保筛选出具有高效协同作用的菌种组合，首先，通过制备乳酸菌和丙酸杆菌的种子液，以及霉菌孢子悬液，为实验提供了标准化的起始材料；其次，通过多孔板培养和观察霉菌生长情况，能够快速、直观地比较不同菌种组合的抑霉菌效果；最后，结合其他筛选条件，如ph值、温度等，能够进一步筛选出适应不同环境和条件的菌种组合；这一方法不仅提高了筛选的效率和准确性，而且为相关领域的研究和应用提供了有力支持，有助于开发出更高效、更稳定的生物抑菌剂。
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1.一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述S1中的乳酸菌种以及丙酸杆菌种子液接种时保持无菌操作，所述培养基采用MRS培养基，菌种接种方法采用无菌环以及习惯接种法。
3.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述S2中霉菌孢子稀释浓度为1×105个/mL。
4.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述S3中费氏丙酸杆菌和乳酸菌的单一或者混合菌液浓度为1×107CFU/mL，1μL霉菌孢子悬液浓度为1×105个/mL。
5.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述S1中的乳酸菌培养基包括水2～8g、牛肉膏3～10g、蛋白胨4～12g、酵母膏3～11g、番茄汁4～15g、葡萄糖1～7g、吐温2～8g、碳酸钙6～8g、溴甲酚绿3～7g和琼脂3～9g。
6.根据权利要求5所述的一种协同抑霉
7.根据权利要求6所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述S7中加入的药品部包括琼脂。
8.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述S1中的乳酸菌种子液制备时的培养温度为30～37°C，所述丙酸杆菌种子液制备时的培养温度为35～40℃，所述乳酸菌种子液制备时的氧气浓度为21％，所述丙酸杆菌种子液制备时的氧气浓度为30％。
9.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述S1中乳酸菌种子液制备以及丙酸杆菌种子液制备时的时间为2h-2.5h，所述S3中的培养基凝固时间为1h。
10.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：将通过所述S1-S7筛选出的菌株在在实际食品体系中验证最优组合的抑霉菌效果，通过挑战性实验和耐久性实验，评估其在延长食品保质期、减缓霉菌蔓延速度等方面的应用情况。
...【技术特征摘要】
1.一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述s1中的乳酸菌种以及丙酸杆菌种子液接种时保持无菌操作，所述培养基采用mrs培养基，菌种接种方法采用无菌环以及习惯接种法。
3.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述s2中霉菌孢子稀释浓度为1×105个/ml。
4.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述s3中费氏丙酸杆菌和乳酸菌的单一或者混合菌液浓度为1×107cfu/ml，1μl霉菌孢子悬液浓度为1×105个/ml。
5.根据权利要求1所述的一种协同抑霉菌活性丙酸杆菌与乳酸菌的筛选方法，其特征在于：所述s1中的乳酸菌培养基包括水2～8g、牛肉膏3～10g、蛋白胨4～12g、酵母膏3～11g、番茄汁4～15g、葡萄糖1～7g、吐温2～8g、碳酸钙6～8g、溴甲酚绿3～7g和琼脂3～9g。
6.根据权利要求5...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘建泽，翁谦，王俊峰，郑柏根，张鹏鹏，尤玉虎，
申请(专利权)人：宿迁兆泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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