【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术中的抗体制备领域，特别是涉及一种抗猫igg单克隆抗体或其抗原结合片段及其应用。
技术介绍
1、在人和动物的防御系统中，特异性免疫起到了关键的作用，体液免疫在特异性免疫中占据一定的地位，体液免疫中发挥重要作用的抗体分子主要是免疫球蛋白，免疫应答早期免疫抗体分子主要是igm，其后逐渐型转换为igg，这些特异性分子不仅发挥着抵抗外来病原体的作用，也成为曾经与这些病原体作用的“证据”，因此，针对不同病原体的抗体是医学和兽医学上重要的研宄内容。检测抗体需要有一定的体系和方法，但其核心是生物学材料，尤其是针对不同免疫球蛋白的标记抗体。其中，单克隆抗体因其特异型强、同质性好、可持续生产等优点，已成为此类标记抗体的常规备选材料。
2、传统间接elisa缺点是存在交叉反应的可能性，表现为背景高，容易造成假阳性误判。究其原因，在排除抗原包被及封闭过程中的问题外，主要存在于酶标二抗设计上。下面以抗猫igg二抗为例进行阐述，第一，传统的二抗大多为多抗，如兔抗猫igg等，是用纯化的猫igg免疫兔子获得，由于鼠和猫的igg序列同源性较高，不易产生针对抗猫的igg抗体，因此目前现有的技术中并没有筛选纯化出抗猫igg单克隆抗体。猫igg抗体由重链和轻链(kappa或lambda)组成，免疫兔子后都能刺激动物免疫系统产生针对猫igg抗体重链和轻链的抗体，而猫血清中igm、iga、ige等抗体的轻链与igg的轻链是相同的，即都是kappa或lambda，这样在做间接elisa检测某一种包被抗原特异性的猫igg时，由于二抗的不纯(同
3、针对上述不足，本专利所描述的是抗猫igg抗体特异性单克隆抗体的制备和应用。与之前申请的专利(cn116732045a)相比，本申请的抗体序列清晰，各种性能更为优异，与同一批制备的抗体相比，fg69非常适合作为测定猫fcv特异性igg抗体滴度的间接elisa二抗，能降低整个反应体系的背景和放大特异性结合的信号。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供了猫igg分离与纯化的方法，为制备抗猫igg单克隆抗体准备抗原，包括猫igg的分离与纯化，对传统的单克隆抗体技术的改进，制备和筛选抗猫igg单克隆杂交瘤细胞，抗猫igg单克隆抗体的制备等，克服现有技术中二抗即抗猫igg单克隆抗体的缺乏。
2、进一步的，本专利技术还提供了抗猫igg单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，以解决现有技术中缺乏抗猫igg单克隆抗体的杂交瘤细胞株的技术缺陷。
3、本专利技术的上述目的是通过以下的技术方案得以实现的：
4、抗猫igg单克隆抗体的制备方法，包括猫igg的分离与纯化、免疫balb/c小鼠、融合杂交瘤细胞、筛选杂交瘤细胞、杂交瘤细胞克隆化、制备单抗腹水、检测单抗腹水效价、单抗的制备步骤。
5、进一步的，本专利技术提供一种鼠抗猫igg的单克隆抗体fg69，所述单克隆抗体fg69特异性结合包含κ轻链恒定结构域的igg1(g1亚类的免疫球蛋白)。
6、所述单克隆抗体fg69的氨基酸结构为：
7、重链可变区的全长序列为：
8、qvqlqqsaaelarpgasvkmsckasgytfttytihwvkqrpgqglewigyinpssgytey nqkfkdkttltadkssstaymqlssltsedstvyycarslitsapwfvywgqgtlvtvsa，其中，
9、(骨架区1)ntfr1：qvqlqqsaaelarpgasvkmsckas；
10、(互补决定区1)ntcdr1：gytfttyt；
11、(骨架区2)ntfr2：ihwvkqrpgqglewigy；
12、(互补决定区2)ntcdr2：inpssgyt；
13、(骨架区3)ntfr3：eynqkfkdkttltadkssstaymqlssltsedstvyyc；
14、(互补决定区3)ntcdr3：arslitsapwfvy；
15、(骨架区4)ntfr4：wgqgtlvtvsa；
16、轻链可变区的全长序列为：
17、nivltqspaslavslgqratiscrasesvdsygnsfmhwyqqkpgqppklliylasnlesgvp arfsgsgsrtdftltidpveaddaatyycqqnyedpltfgagtklelk；
18、其中，
19、(骨架区1)ntfr1：nivltqspaslavslgqratiscras；
20、(互补决定区1)ntcdr1：esvdsygnsf；
21、(骨架区2)ntfr2：mhwyqqkpgqppklliy；
22、(互补决定区2)ntcdr2：las；
23、(骨架区3)ntfr3：nlesgvparfsgsgsrtdftltidpveaddaatyyc；
24、(互补决定区3)ntcdr3：qqnyedplt；
25、(骨架区4)ntfr4：fgagtklelk。
26、所述单克隆抗体fg69的核苷酸结构为：
27、重链可变区的核苷酸序列为：
28、caggtccagctgcagcagtctgcagctgaactggcaagacctggggcctcagtgaaga
29、tgtcctgcaaggcttctggctacacctttactacctacacgattcactgggtaaaacaga
30、ggcctggacagggtctggaatggattggatacattaatcctagcagtggatatactgaat
31、acaatcagaaattcaaggacaagaccacattgactgcagacaaatcctccagcacagc
32、ctacatgcaactgagcagcctgacatctgaggactctacggtctattactgtgcaagatc
33、tctcattacttcggctccctggtttgtttattggggccaagggactctggtcactgtctc
34、tgca
35、其中，
36、(骨架区1)ntfr1：
37、caggtccagctgcagcagtctgcagctgaactggcaagacctggggcctcagtgaagatgtcctgcaaggcttct；
38、(互补决定区1)ntcdr1：ggctacacctttactacctacac本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗猫IgG单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括由SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、或SEQ ID NO:7所示的重链互补决定区VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述轻链可变区包括由SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、或SEQ ID NO:15所示的轻链互补决定区VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
2.如权利要求1所述的一种抗猫IgG单克隆抗体或其抗原结合片段，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。
3.一种核酸分子，其编码权利要求1-2中任一项所述的一种抗猫IgG单克隆抗体或其抗原结合片段。
4.一种载体，其包含权利要求3所述的核酸分子；优选地，所述载体为质粒载体，例如pEE12、pCAGGS、pTOPO、pcDNA如pCDNA3.1、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV和pBJ中的任一种。
5.一种表达细胞，其包含权利要求3所述
6.根据权利要求1-2中任一项所述的一种抗猫IgG单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测猫IgG的试剂中的用途。
7.一种用于猫IgG的试剂盒，其包括权利要求1-2中任一项所述的抗猫IgG单克隆抗体或其抗原结合片段以及使用说明。
...【技术特征摘要】
1.一种抗猫igg单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括由seq id no:3、seq id no:5、或seq id no:7所示的重链互补决定区vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3，所述轻链可变区包括由seq id no:11、seq id no:13、或seq id no:15所示的轻链互补决定区vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3。
2.如权利要求1所述的一种抗猫igg单克隆抗体或其抗原结合片段，其重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:9所示。
3.一种核酸分子，其编码权利要求1-2中任一项所述的一种抗猫igg单克隆抗体或...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟春春，刘光清，李娜，林亮亮，王真真，李传峰，朱杰，汤傲星，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：
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