【技术实现步骤摘要】
本专利技术总体上涉及独特地标记或条形编码细胞核、多个细胞核、细胞、多个细胞和/或组织内的分子的方法。本专利技术还涉及用于独特地标记细胞核、多个细胞核、细胞、多个细胞和/或组织内的分子的试剂盒。特别地，所述方法和试剂盒可以涉及rna和/或cdna的标记。
技术介绍
0、背景
1、新一代测序(ngs)可以用于识别和/或定量来自细胞样品的单一转录物。然而，这样的技术可能太复杂而无法在大样本中的单一细胞上进行。在这样的方法中，通常从裂解的细胞(即已破碎的细胞)纯化rna转录物，然后使用逆转录将rna转录物转化为互补dna(cdna)。然后可以使用ngs对cdna序列测序。在这样的过程中，所有cdna序列在测序前混合在一起，使得测量整个样品的rna表达，并且单一序列不能回溯到单一细胞。
2、用于独特地标记或条形编码来自单一细胞的转录物的方法可以涉及将单一细胞手动分离到单独的反应容器中，并且可能需要专门的设备。一种供选择的对细胞中单一转录物测序的方法是使用显微术识别单一荧光碱基。然而，该技术可能难以实施，并且限于对少量细胞测序。
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种独特地标记多个细胞内的RNA分子的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中在步骤(k)之前，所述方法还包括将所述合并的至少两个次级等分试样分成至少两个最后的等分试样，所述至少两个最后的等分试样包括第一最后的等分试样和第二最后的等分试样。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述蛋白酶抑制剂包含苯甲基磺酰氟(PMSF)或4-(2-氨基乙基)苯磺酰氟盐酸盐(AEBSF)。
4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其还包括：
5.权利要求4所述的方法，其中通过模板转换将共用衔接子序列添加到所述释放的cDNA分子的3’端。
6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述步骤(b)的逆转录引物还包含第一特异性条形码；所述方法还包括：
7.权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述逆转录引物还包含5’突出端，所述5’突出端包含5’突出端序列，并且其中所述核酸标签中的每一个包含：
8.权利要求7所述的方法，其还包括：
9.权利要求8所述的方法，其中所述连接在所述第一多个细胞内进行。<...
【技术特征摘要】
1.一种独特地标记多个细胞内的rna分子的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中在步骤(k)之前，所述方法还包括将所述合并的至少两个次级等分试样分成至少两个最后的等分试样，所述至少两个最后的等分试样包括第一最后的等分试样和第二最后的等分试样。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述蛋白酶抑制剂包含苯甲基磺酰氟(pmsf)或4-(2-氨基乙基)苯磺酰氟盐酸盐(aebsf)。
4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其还包括：
5.权利要求4所述的方法，其中通过模板转换将共用衔接子序列添加到所述释放的cdna分子的...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·希莉格，A·B·罗森伯格，C·若克，
申请(专利权)人：华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：
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