【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及奈莫利珠单抗的抗体变体，例如，与奈莫利珠单抗相比具有低生物学活性的抗体变体。本专利技术还涉及具有低含量此类抗体变体的药物组合物。本专利技术还涉及用于检测此类抗体变体的方法和用于分析此类抗体变体的方法。
技术介绍
1、抗体因其在血浆中的高稳定性和较少的副作用而作为药物引起人们的关注。特别是，市场上有许多igg型抗体药物，目前也有大量抗体药物正在开发中。通常，抗体药物除了含有作为活性成分的所需物质(抗体)外，还含有包括源自所需物质的产物变体(抗体变体)的各种成分。此类产品变体分为具有与所需物质相当的功效和安全性的产品相关物质和不具有与所需物质相当的功效和安全性的产品相关杂质。一些变体是根据生产原料药过程的条件以不同的速率产生。由于抗体药物中存在这种异质性，因此针对每种成分，需要为原料药和药物产品设定释放规格和保质期规格，并控制抗体药物的质量。
2、近年来，发现了与白细胞介素31(il-31)受体a(il-31ra)结合并具有抑制il-31与il-31a结合功能的单克隆抗体(专利文献(ptl)1-3)。其中，抗il-31ra抗体奈莫利珠单抗(cim331)充当il-31拮抗剂，并抑制il-31的功能，il-31被认为是诱导瘙痒的细胞因子。因此，它接受了针对特应性皮炎患者的临床试验，其结果最近已有报道(非专利文献(npl)1)。然而，与奈莫利珠单抗抗体相比，生物学活性降低的抗体变体是否在奈莫利珠单抗的原料药和药物产品的生产过程中产生，以及它们所包含的此类变体的百分比，目前尚未见报道。
3、引文列表<...
【技术保护点】
1.具有包含氨基酸序列DGYDDGPYTLET(SEQ ID NO:3)的可变区的抗体的变体，其中
2.权利要求1所述的抗体变体，其中所述序列是CDR序列。
3.权利要求1所述的抗体变体，其中所述序列为重链中包含的序列。
4.权利要求1所述的抗体变体，其中具有包含氨基酸序列DGYDDGPYTLET(SEQ ID NO:3)的可变区的所述抗体为：
5.权利要求1-4中任一项所述的抗体变体，其中具有包含氨基酸序列DGYDDGPYTLET(SEQ ID NO：3)的可变区的所述抗体是奈莫利珠单抗。
6.权利要求1-5中任一项所述的抗体变体，当使用阴离子交换色谱分离时，其保留时间比具有包含氨基酸序列DGYDDGPYTLET(SEQ ID NO:3)的可变区的所述抗体短。
7.权利要求1-6中任一项所述的抗体变体，其生物学活性低于具有包含氨基酸序列DGYDDGPYTLET(SEQ ID NO：3)的可变区的所述抗体。
8.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物。
9.包含权利要求1
10.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物，其中当使用阴离子交换色谱分离药物组合物时，包含含有异天冬氨酸残基的抗体变体的峰面积与总峰面积的比率为40.3％或更小。
11.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物，其中所述药物组合物中含有琥珀酰亚胺残基的抗体变体与未修饰抗体的比率为36％或更低，和/或，在酶消化后，源自抗体变体的含有琥珀酰亚胺残基的肽与含有琥珀酰亚胺残基的肽和相应的未修饰肽之和的比率为20％或更低。
12.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物，其中当使用阴离子交换色谱分离药物组合物时，包含含有异天冬氨酸残基的抗体变体的峰面积与总峰面积的比率为29.1％或更小。
13.权利要求8-12中任一项所述的药物组合物，其包含奈莫利珠单抗。
14.检测权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的方法，其包括通过亲和色谱、离子交换色谱、正相色谱、反相色谱、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、基于电荷的分离、尺寸排阻色谱(SEC)、凝胶渗透色谱(GPC)或其组合分离样品的步骤，所述样品包含具有含有氨基酸序列DGYDDGPYTLET(SEQ ID NO：3)的可变区的抗体或经酶处理过的该抗体。
15.权利要求14所述的方法，其中所述离子交换色谱为阴离子交换色谱。
16.权利要求15所述的方法，其中所述阴离子交换色谱使用内径为4.6-7.5mm，长度为35-150mm，粒径为2.5-10μm的柱，柱温为25-50℃，并用pH6.0-10.0的流动相进行洗脱。
17.权利要求14-16中任一项所述的方法，其在分离包含经酶处理过的该抗体的样品的步骤之后，包括通过质谱和/或UV吸收测量来定量肽的步骤。
18.生产包含奈莫利珠单抗的组合物的方法，其包括执行权利要求14-17中任一项所述方法的步骤。
19.生产包含奈莫利珠单抗的组合物的方法，其包括通过亲和色谱、离子交换色谱、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、基于电荷的分离、尺寸排阻色谱(SEC)、凝胶渗透色谱(GPC)或其组合纯化含有奈莫利珠单抗的溶液的步骤。
20.权利要求19所述的方法，其中纯化步骤包括通过亲和色谱纯化从产生奈莫利珠单抗的细胞获得的包含奈莫利珠单抗的组合物。
21.权利要求20所述的方法，其中通过亲和色谱纯化后含有奈莫利珠单抗的溶液的存放时间为72小时或更短，并且在组合物中权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的含量低于存放时间更长时的含量。
22.降低权利要求1-7中任一项所述抗体变体的含量的方法，其包括通过亲和色谱纯化含有抗体的组合物的步骤，所述组合物是从产生具有包含氨基酸序列DGYDDGPYTLET(SEQID NO：3)的可变区的抗体的细胞中获得的。
23.权利要求22所述的方法，其中通过亲和色谱纯化后含有奈莫利珠单抗的溶液的存放时间为72小时或更短，并且在组合物中权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的含量低于存放时间更长时的含量。
24.奈莫利珠单抗的抗体变体，其具...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.具有包含氨基酸序列dgyddgpytlet(seq id no:3)的可变区的抗体的变体，其中
2.权利要求1所述的抗体变体，其中所述序列是cdr序列。
3.权利要求1所述的抗体变体，其中所述序列为重链中包含的序列。
4.权利要求1所述的抗体变体，其中具有包含氨基酸序列dgyddgpytlet(seq id no:3)的可变区的所述抗体为：
5.权利要求1-4中任一项所述的抗体变体，其中具有包含氨基酸序列dgyddgpytlet(seq id no：3)的可变区的所述抗体是奈莫利珠单抗。
6.权利要求1-5中任一项所述的抗体变体，当使用阴离子交换色谱分离时，其保留时间比具有包含氨基酸序列dgyddgpytlet(seq id no:3)的可变区的所述抗体短。
7.权利要求1-6中任一项所述的抗体变体，其生物学活性低于具有包含氨基酸序列dgyddgpytlet(seq id no：3)的可变区的所述抗体。
8.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物。
9.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物，其中所述药物组合物中含有异天冬氨酸残基的抗体变体与抗体变体和未修饰抗体之和的比率为36％或更低，和/或，在酶消化后，源自抗体变体的含有异天冬氨酸残基的肽与含有异天冬氨酸残基的肽和相应的未修饰肽之和的比率为20％或更低。
10.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物，其中当使用阴离子交换色谱分离药物组合物时，包含含有异天冬氨酸残基的抗体变体的峰面积与总峰面积的比率为40.3％或更小。
11.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物，其中所述药物组合物中含有琥珀酰亚胺残基的抗体变体与未修饰抗体的比率为36％或更低，和/或，在酶消化后，源自抗体变体的含有琥珀酰亚胺残基的肽与含有琥珀酰亚胺残基的肽和相应的未修饰肽之和的比率为20％或更低。
12.包含权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的药物组合物，其中当使用阴离子交换色谱分离药物组合物时，包含含有异天冬氨酸残基的抗体变体的峰面积与总峰面积的比率为29.1％或更小。
13.权利要求8-12中任一项所述的药物组合物，其包含奈莫利珠单抗。
14.检测权利要求1-7中任一项所述的抗体变体的方法，其包括通过亲和色谱、离子交换色谱、正相色谱、反相色谱、亲水相互作用色谱(hilic)、疏水相互作用色谱(hic)、基于电荷的分离、尺寸排阻色谱(sec)、凝胶渗透色谱(gpc)或其组合分离样品的步骤，所述样品包含具有含有氨基酸序列dgyddgpytlet(seq id no：3)的可变区的抗体或经酶处理过的该抗体。
15.权利要求14所述的方法，其中所述离子交换色谱为阴离子交换色谱。
16.权利要求15所述的方法，其中所述阴离子交换色谱使用内径为4.6-7.5mm，长度为35-150mm，粒径为2.5-10μm的柱，柱温为25-50℃，并用ph6.0-10.0的流动相进行洗脱。
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【专利技术属性】
技术研发人员：细口健作，原爱，增田宗太，高城美智，南部周介，佐藤久美，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：
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