【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学及作物遗传育种，涉及豇豆荚长主效qtlqpl-8.1紧密连锁的分子标记及其育种应用。
技术介绍
1、豇豆(vigna unguiculata(l.)walp.)(2n＝2x＝22)隶属豆科(fabaceae)菜豆族(trib.phasoleae dc.)豇豆属(vigna savi)，是重要的一年生豆类植物。豇豆为自花授粉二倍体，基因组大小约620mb。原产非洲，主要分布在热带和亚热带地区，有长豇豆(v.unguiculata ssp.sesquipedialis)和普通豇豆(v.unguiculata ssp.unguiculata)两个栽培亚种。首先野生豇豆在西非或东非被驯化成普通豇豆，随后向东传播，在东南亚或南亚地区进一步驯化出长豇豆。中国是豇豆的次生起源中心之一，早在明代《本草纲目》中就有记载，说明在明代豇豆就在我国被广泛栽培。而豇豆作为我国六大食用豆类作物之一，在我国种植面积超过800万亩，栽培面积和产量约占世界的五分之一。
2、长豇豆是我国重要的豆类蔬菜作物之一，全国除高寒地区外均有种植。嫩荚是长豇豆最主要的商品食用器官，荚长是其最重要的农艺性状之一。豇豆不同品种之间荚长变异范围非常大(10-120cm)，培育长荚豇豆优良品种是育种上至关重要的目标，但目前世界范围内对豇豆荚长的遗传基础了解不多，严重制约了豇豆荚长的分子育种。传统育种依据表型来进行荚长的选育，但荚长性状属于数量性状，受环境因素影响较大，因此单纯的依靠表型进行选择不仅准确率较低，且耗时费力，育种效率低。分子标记辅助育种
3、随着分子标记技术的发展，分子标记辅助育种为传统育种提供了快速、准确筛选复杂性状目标基因的新方法。在当前使用的分子标记中，snp在基因组上分布广泛，因此数量多、多态性丰富而逐步成为遗传育种中较理想的标记类型。snp标记可以通过重测序、芯片等方法获取基因型，其中竞争性等位基因特异性pcr分型法(kompetitive allelespecific pcr，kasp)，由于其分型快速、准确、高通量等优点越来越成为snp基因分型的重要方法。目前，kasp标记在水稻、玉米、菜豆等作物上已经广泛用于遗传多样性分析、基因定位和分子标记辅助选择。找到不同的、精准的snp并开发与之紧密连锁的分子标记可以鉴定筛选具有长荚豇豆品种，对解析长荚豇豆形成的遗传机制及高产长荚豇豆品种的培育具有重要的理论意义和应用价值。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供与豇豆荚长主效qtl qpl-8.1紧密连锁的分子标记及其kasp引物，并提供利用该标记的kasp引物进行对长荚豇豆辅助育种的方法。该方法首先对长荚豇豆和短荚豇豆两个亲本进行重测序序列鉴定snp，将在两个亲本之间有多态的snp标记转化为kasp标记，根据基因组位置随机均匀挑选标记合成引物，鉴定双亲f2群体的基因型，结合f2群体荚长表型进行qtl扫描，在8号染色体上鉴定出一个控制荚长的主效qtl qpl-8.1。利用荚长相关qtl qpl-8.1边界标记扩增需要鉴定的材料，根据其基因型判断样本荚长的有利等位变异，从而为豇豆荚长性状的遗传改良和快速育种提供新的技术支撑。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1、一种豇豆荚长主效qtl qpl-8.1紧密连锁的分子标记，所述分子标记包括2_21040和2_13150；
4、2_21040核苷酸序列如seq id no：1所示：
5、gcatccatgaggagtggtgtccctctgaaggacatgaagggatgtgaagaaggctt agca[a/g]tgtcatgattggaagagggttccatgttgattaaatatataaggagcgttata tagtggg；突变位置为序列中第61位，其具有a/g多态性；
6、2_13150核苷酸序列如seq id no：2所示：
7、gctcgagaatttgtggtgtatagtagagcacaccatttataccagagaactgcaat gttc[a/g]cagagtagttagatcacagtcagcatagctttttaacggtacaattggttaa gatgatca；突变位置为序列中第61位，其具有a/g多态性。
8、2、检测豇豆荚长主效qtl qpl-8.1紧密连锁的分子标记的kasp引物，所述kasp引物包括为2_21040kasp引物组和2_13150kasp引物组：
9、2_21040kasp引物组包括：
10、2_21040primer1：
11、5’-gaaggtgaccaagttcatgctaagggatgtgaagaaggcttagcaa-3’；seq id no：3；
12、2_21040primer2：
13、5’-gaaggtcggagtcaacggattgggatgtgaagaaggcttagcag-3’；seq id no：4；
14、
15、其中2_21040primer1和2_21040primer2为2条特异性引物，分别连接了不同的荧光基团；
16、
17、2_21040primer_common：
18、5’-aatcaacatggaaccctcttccaatcat-3’；seq id no：5；
19、2_13150kasp引物组：
20、2_13150primer1：
21、5’-gaaggtgaccaagttcatgctgctgactgtgatctaactactctgt-3’；seq id no：6；
22、
23、2_13150primer2：
24、5’-gaaggtcggagtcaacggattctgactgtgatctaactactctgc-3’；seq id no：7；
25、
26、2_13150primer_common：
27、5’-caccatttataccagagaactgcaatgtt-3’；seq id no：8；
28、其中2_13150primer1和2_13150primer2为2条特异性引物，分别连接了不同的荧光基团。
29、进一步所述kasp引物，2_21040primer1连接了fam基团，2_21040primer2连接了hex基团；2_13150primer1连接了fam基团，2_13150primer2连接了hex基团。
30、包含检测豇豆荚长主效qtl qpl-8.1紧密连锁的分子标记的kasp引物的试剂或试剂盒也在本专利技术所保护的范围中。
31、检测豇豆荚长主效qtl qpl-8.1紧密连锁的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种豇豆荚长主效QTL Qpl-8.1紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记包括2_21040和2_13150；
2.检测权利要求1所述豇豆荚长主效QTL Qpl-8.1紧密连锁的分子标记的KASP引物，其特征在于，所述KASP引物包括为2_21040KASP引物组和2_13150KASP引物组：
3.权利要求2所述KASP引物，其特征在于，2_21040Primer1连接了FAM基团，2_21040Primer2连接了HEX基团；2_13150Primer1连接了FAM基团，2_13150Primer2连接了HEX基团。
4.含有权利要求2或3所述KASP引物的试剂或试剂盒。
5.权利要求2或3所述KASP引物、权利要求4所述的试剂或试剂盒在鉴定、筛选长荚豇豆品类、长荚豇豆分子辅助育种中的应用。
6.利用权利要求2或3所述KASP引物、权利要求4所述的试剂或试剂盒进行选育不同豇豆荚长品种的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的选育不同荚长的豇豆品种的方法，其特征在于
8.根据权利要求6所述的选育不同荚长的豇豆品种的方法，其特征在于，KASP反应检测的PCR体系为：DNA 0.8μl，2x KASP Master mix 0.75μl，Primer mix 0.05μl。
9.根据权利要求7所述的选育不同荚长的豇豆品种的方法，其特征在于，KASP反应检测的PCR反应程序为94℃预变性15分钟，94℃变性20秒，61～55℃梯度复性60秒，每个循环复性温度降低0.6℃，55℃延伸60秒，循环10次，；再94℃变性20秒，55℃复性60秒，延伸60秒，循环26次。
...【技术特征摘要】
1.一种豇豆荚长主效qtl qpl-8.1紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记包括2_21040和2_13150；
2.检测权利要求1所述豇豆荚长主效qtl qpl-8.1紧密连锁的分子标记的kasp引物，其特征在于，所述kasp引物包括为2_21040kasp引物组和2_13150kasp引物组：
3.权利要求2所述kasp引物，其特征在于，2_21040primer1连接了fam基团，2_21040primer2连接了hex基团；2_13150primer1连接了fam基团，2_13150primer2连接了hex基团。
4.含有权利要求2或3所述kasp引物的试剂或试剂盒。
5.权利要求2或3所述kasp引物、权利要求4所述的试剂或试剂盒在鉴定、筛选长荚豇豆品类、长荚豇豆分子辅助育种中的应用。
6.利用权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴新义，吴健，汪宝根，李国景，吴晓花，汪颖，王尖，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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