【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物防控，具体涉及一株分离于猪鼻腔黏膜且能够分泌抗病毒物质的枯草芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
1、1、传染性病原通过猪鼻腔感染的研究现状
2、鼻腔黏膜是许多病毒入侵机体的重要入口，如伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,phev)和口蹄疫(foot and mouth disease,fmd)等。prv是一种具有囊膜的双链dna病毒，属于疱疹病毒科，它可以感染猪、绵羊等多种哺乳动物。猪感染prv后能够引起腹泻、呕吐、神经系统症状等多种症状，哺乳仔猪感染prv具有较高的死亡率，育肥猪主要表现为呼吸困难和生长缓慢，种猪主要表现为生殖障碍。prrsv是一种囊膜包裹的单股正链rna病毒，它可以通过鼻腔和口腔黏膜感染猪，可导致母猪繁殖障碍、断奶仔猪数量减少、生长育肥猪生长缓慢以及增加继发感染等症状，给养猪业带来巨大的经济损失。这些病原微生物能通过飞沫和空气传播，在猪群中易形成爆发性疫情，给防控带来巨大挑战，严重阻碍我国养猪业的发展。
3、2、猪鼻腔菌群影响病毒入侵
4、鼻腔黏膜屏障多种成分组成，包括黏液屏障、上皮屏障和免疫屏障。黏液屏障中存在大量共生菌，其在防止病毒入侵、调节机体免疫等方面发挥着重要作用。猪鼻腔微生物主要由变形菌门(48.3％)、拟杆菌门(21.7％)、厚壁菌门(16.2％)和蓝细菌(5.2％)等组成，猪在感染h3n2后第0d和3d时鼻腔厚壁菌门的瘤胃菌科显
5、3、枯草芽孢杆菌作为益生菌的研究现状及应用
6、枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性需氧细菌，属于芽孢杆菌科，芽孢杆菌属，细菌形态为杆状结构，大小为0.7-0.8×2-3μm，能够产生荚膜，周生鞭毛，具有运动性。枯草芽孢杆菌因其抗逆性强，生长迅速，广泛的应用于动物养殖中。先天性免疫是机体最早形成的免疫防线，能够快速识别和消灭入侵病原体。
7、枯草芽孢杆菌的基因组中有4％-5％用于天然产物的合成，包括非挥发性化合物和挥发性化合物。非挥发性化合物主要是脂肽、聚酮类和非核糖体肽。挥发性代谢物包括碳氢化合物、酮、醇、醛、酯、酸、芳烃、含硫和含氮化合物。枯草芽孢杆菌代谢物可以激活巨噬细胞、自然杀伤细胞和树突状细胞等免疫细胞，促进它们的活化和分泌免疫因子，从而增强先天性免疫的功能。
8、因此亟需能够分离获得具备高抗病毒活性而且能够定殖于动物体内获得抗病毒能力的枯草芽孢杆菌。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了从山地放养猪鼻腔中分离兼有定殖能力和抗病毒活性的枯草芽孢杆菌。
2、本专利技术还要解决的技术问题是提供了含有所述的枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)bs12的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂。
3、本专利技术还要解决的技术问题是提供了所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12、所述的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂在制备治疗和/或预防猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。
4、本专利技术还要解决的技术问题是提供了一种表面活性素或其粗提物及其制备方法。
5、本专利技术最后要解决的技术问题是提供了白皮杉醇在制备抗猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。
6、技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)bs12，所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12于2020年1月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：cgmccno.19406。
7、本
技术实现思路
还包括含有所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂。
8、其中，所述制剂为喷剂或粉剂中的一种。
9、本
技术实现思路
还包括所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12、所述的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂在制备治疗和/或预防猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。
10、其中，所述的枯草芽孢杆菌bs12通过粘附猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒阻止病毒入侵鼻腔上皮细胞。
11、其中，所述枯草芽孢杆菌bs12在增强猪鼻腔黏膜免疫能力。
12、本
技术实现思路
还包括一种表面活性素或其粗提物，所述表面活性素或其粗提物由所述的枯草芽孢杆菌bs12(bacillus subtilis)分泌或提取得到，又命名为ns12，分泌或提取得到。
13、本
技术实现思路
还包括所述的表面活性素或其粗提物的制备方法，包括以下步骤：利用酸沉淀的方法提取并纯化枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12分泌或提取得到。
14、本
技术实现思路
还包括白皮杉醇在制备抗猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。
15、其中，所述白皮杉醇的浓度为0～100μm。
16、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下的特色和优点：本专利技术首次提供了一株具有鼻腔定殖能力的枯草芽孢杆菌bs12。该枯草芽孢杆菌bs12能发挥光谱抗病毒活性，阻止病毒入侵宿主细胞，特别能够抑制pedv、prv和prrsv经鼻腔引起仔猪感染。此外，该枯草芽孢杆菌bs12能通过分泌表面活性素和白皮杉醇发挥抗病毒活性，具有良好的抗病毒潜力。因此，枯草芽孢杆菌菌株其有望成为一株新型的抗病毒益生菌，为防控病毒性传染病提供一种新的策略。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS12，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS12于2020年1月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.19406。
2.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS12的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂。
3.根据权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述制剂为喷剂或粉剂中的一种。
4.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS12、权利要求2所述的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂在制备治疗和/或预防猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。
5.一种表面活性素或其粗提物，其特征在于，所述表面活性素由权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS12分泌或提取得到。
6.根据权利要求5所述的表面活性素或其粗提物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：利用酸沉淀的方法提取
7.根据权利要求6所述的表面活性素粗提物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将枯草芽孢杆菌BS12的培养液接种到LB培养基中振荡培养，离心，弃取沉淀保留上清液，加入浓HCL调节上清的pH，静置过夜，离心弃取上清保留沉淀，在沉淀中加入少量色谱级甲醇溶解沉淀，并用NaOH调至pH，离心，收集上清，再次用甲醇溶解沉淀并用NaOH调节pH离心，收集上清，将两次甲醇抽提液合并得到表面活性素粗提物。
8.白皮杉醇在制备抗猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述白皮杉醇的浓度为0～100μM。
...【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12于2020年1月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：cgmcc no.19406。
2.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂。
3.根据权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述制剂为喷剂或粉剂中的一种。
4.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)bs12、权利要求2所述的发酵液、菌悬液、上清液、分泌物或其制剂在制备治疗和/或预防猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。
5.一种表面活性素或其粗提物，其特征在于，所述表面活性素由权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(bacillus s...
【专利技术属性】
技术研发人员：李昱辰，杨倩，杨诚洁，齐佳欣，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：
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