一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法技术

技术编号：42669761 阅读：4 留言：0更新日期：2024-09-10 12:24

本发明专利技术提供了一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，包括以下步骤，步骤一，将待检测未纯化的抗体样本与PCT抗原工作液加入到羊抗小鼠IgG磁微粒工作液中；步骤二，在37℃下振荡混匀反应15分钟；步骤三，反应结束后进行磁分离，并使用洗涤液洗涤；步骤四，加入化学发光物质标记的PCT兔单克隆抗体，再次振荡混匀反应15分钟；步骤五，反应结束后进行磁分离，并使用洗涤液洗涤；步骤六，加入发光底物液，在室温下振荡混匀反应1‑5分钟；步骤七，检测化学发光强度，反映出待检测未纯化的抗体样本的性能。本发明专利技术提供了一种快速筛选单克隆抗体的新思路，避免了传统方法中昂贵的纯化步骤，大幅节约了时间和成本，对医药和生物技术领域具有重要意义。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，特别涉及一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法。

技术介绍

1、单克隆抗体是由单一b细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。目前，单克隆抗体的筛选通常需要经历纯化步骤，然后将单克隆抗体进行两两组合，以寻找具有特定功能和特性的单克隆抗体。这种传统方法存在几个问题：高成本：纯化步骤需要消耗大量的时间、劳动力和资源，导致生产成本高昂。低效率：两两组合的方式可能需要大量的试验才能找到理想的单克隆抗体，筛选效率低下，耗时长。时间周期长：由于纯化步骤和大量的试验，整个筛选过程时间周期较长，不能满足迅速获得需要的单克隆抗体的需求。

2、因此，传统的单克隆抗体筛选方法存在成本高、效率低、时间周期长等问题，迫切需要一种新的方法来解决这些挑战。传统的单克隆抗体筛选方法已经被广泛应用并认为是可靠和有效的，许多研究和生产实践仍然依赖于这些方法，而且可能对采用新方法存在一定的保守态度。此外，新方法的采用可能存在一定的风险和不确定性，人们担心可能导致不可预见的结果或影响最终产品的质量和安全性。同时，缺乏对新兴技术和方法的了解或认识也可能阻碍了本方法的采用。另外，在医药领域，新方法的采用需要满足严格的监管要求和认证标准，需要额外的时间和成本来确保新方法的合规性和可靠性。因而，传统筛选方法的惯性、新方法的风险和不确定性、知识和意识的缺乏、医药领域的监管要求和认证，多个因素导致在筛选单克隆抗体时人们会默认为必须要纯化步骤，不会去考虑去除或避免纯化步骤的可能性，阻碍了人们对新方法的研究和开发。

<p>技术实现思路

1、本专利技术的目的是提供一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，具体应用于单克隆抗体的筛选和生产过程中。其主要应用范围包括但不限于医药领域，用于疾病诊断、治疗和预防；生物
，用于生物制药和生物治疗；以及科研领域，用于基础研究和新药开发等。该方法可以在快速、高效地筛选未纯化的pct单克隆抗体，节约时间和成本，提高抗体的生产效率和质量。

2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，包括以下步骤，

3、步骤一，将待检测未纯化的抗体样本与pct抗原工作液加入到羊抗小鼠igg磁微粒工作液中；

4、步骤二，振荡混匀反应；

5、步骤三，反应结束后进行磁分离，并使用洗涤液洗涤；

6、步骤四，加入化学发光物质标记的pct兔单克隆抗体，再次振荡混匀反应；

7、步骤五，反应结束后进行磁分离，并使用洗涤液洗涤；

8、步骤六，加入发光底物液，在室温下振荡混匀反应1-5分钟；

9、步骤七，检测化学发光强度，反映出待检测未纯化的抗体样本的性能。

10、通过采用上述技术方案，pct兔单克隆抗体为优势抗体。

11、本专利技术的进一步设置为：步骤一中，待检测未纯化的抗体样本浓度需达到1μg/ml及以上。

12、本专利技术的进一步设置为：步骤一中，所述pct抗原工作液中pct抗原的浓度为0.25～1μg/ml。

13、本专利技术的进一步设置为：步骤一中，所述羊抗小鼠igg磁微粒工作液中羊抗小鼠igg磁微粒的浓度为0.1～0.3mg/ml，羊抗小鼠igg磁微粒的粒径为1～2μm；步骤四中，所述化学发光物质标记的pct兔单克隆抗体中pct兔单克隆抗体的浓度为1～4μg/ml，所述化学发光物质选自吖啶酯或吖啶酯衍生物。

14、本专利技术的进一步设置为：包括酶标稀释液，所述酶标稀释液的组分组成为：137mmnacl，2.7mm kcl，20.4mm na2hpo4，1.5mm kh2po4，0.05％20，20％fbs，0.2％proclin300，余量为水，ph为7.4。

15、本专利技术的进一步设置为：所述羊抗小鼠igg磁微粒工作液，是用含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液稀释羊抗小鼠igg磁微粒溶液配制而成的r1试剂；所述含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液为酶标稀释液。

16、本专利技术的进一步设置为：所述pct抗原工作液，是用含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液稀释pct抗原溶液配制而成的r2试剂，所述含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液为酶标稀释液。

17、本专利技术的进一步设置为：所述化学发光物质标记的pct兔单克隆抗体是通过以下方法制备得到的：将pct兔单克隆抗体加入到吖啶酯溶液中，混匀，37℃标记1～3h；标记反应结束后，加入封闭缓冲液，37℃封闭0.5～2h；封闭后进行透析，得中间品2；中间品2用酶标稀释液进行稀释，配制r3试剂，所述封闭缓冲液的组分组成为：137mmnacl，2.7mm kcl，20.4mm na2hpo4，1.5mm kh2po4，2.5％甘氨酸，余量为水。

18、本专利技术的进一步设置为：所述标准曲线是通过以下方法生成的：使用标准品稀释液对pct单克隆抗体标准品进行倍比稀释，获得如下梯度浓度的稀释液：2000ng/ml、1000ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml、62.5ng/ml、31.25ng/ml、0ng/ml，其中0ng/ml为标准品稀释液，标准品稀释液为酶标稀释液；稀释液按照待检样本的检测方式进行检测，读取化学发光强度，绘制标准曲线。

19、本专利技术的进一步设置为：所述步骤二中，在37℃下振荡混匀反应15分钟；步骤四中，再次振荡混匀反应15分钟。

20、本专利技术的有益效果是：

21、1.本专利技术通过快速筛选未纯化的抗体样本，可以在更早的阶段识别出具有特定功能和特性的单克隆抗体候选物，从而节省了大量的时间和资源。一旦获得了具有理想特性的单克隆抗体候选物，就可以针对性地进行进一步的克隆和纯化工作，进一步提高了生产效率和抗体质量。

22、2.本专利技术的优势在于，将单克隆抗体的筛选过程从传统的纯化步骤中解放出来，使得筛选过程更为高效和经济。同时，由于筛选过程更早地介入到抗体生产流程中，可以在更短的时间内获得具有理想特性的单克隆抗体，有助于加快新药开发和生物制药领域的进展。

23、3.本专利技术不仅提高了单克隆抗体的筛选效率和质量，还有助于降低生产成本和加速产品上市的速度，对医药和生物
具有重要意义。

24、4.本专利技术提供了一种快速筛选单克隆抗体的新思路，避免了传统方法中昂贵的纯化步骤，大幅节约了时间和成本。同时，该方法操作简便，便于大规模生产和应用。

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【技术保护点】

1.一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：步骤一中，待检测未纯化的抗体样本浓度需达到1 μg/mL及以上。

3.根据权利要求1或2所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：步骤一中，所述PCT抗原工作液中PCT抗原的浓度为0.25～1 μg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：步骤一中，所述羊抗小鼠IgG磁微粒工作液中羊抗小鼠IgG磁微粒的浓度为0.1～0.3mg/mL，羊抗小鼠IgG磁微粒的粒径为1～2 μm；步骤四中，所述化学发光物质标记的PCT兔单克隆抗体中PCT兔单克隆抗体的浓度为1～4 μg/mL，所述化学发光物质选自吖啶酯或吖啶酯衍生物。

5.根据权利要求1所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：

6.根据权利要求5所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：所述羊抗小鼠Ig

7.根据权利要求5所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：所述PCT抗原工作液，是用含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液稀释PCT抗原溶液配制而成的R2试剂，所述含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液为酶标稀释液。

8.根据权利要求5所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：所述化学发光物质标记的PCT兔单克隆抗体是通过以下方法制备得到的：将PCT兔单克隆抗体加入到吖啶酯溶液中，混匀，37℃ 标记1～3h；标记反应结束后，加入封闭缓冲液，37℃封闭0.5～2h；封闭后进行透析，得中间品2；中间品2用酶标稀释液进行稀释，配制R3试剂，所述封闭缓冲液的组分组成为：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，20.4 mM Na2HPO4，1.5 mMKH2PO4，2.5 %甘氨酸，余量为水。

9.根据权利要求5所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：所述标准曲线是通过以下方法生成的：使用标准品稀释液对PCT单克隆抗体标准品进行倍比稀释，获得如下梯度浓度的稀释液：2000 ng/mL、1000 ng/mL、500 ng/mL、250 ng/mL125 ng/mL、62.5 ng/mL、31.25 ng/mL、0 ng/mL，其中0 ng/mL为标准品稀释液，标准品稀释液为酶标稀释液；稀释液按照待检样本的检测方式进行检测，读取化学发光强度，绘制标准曲线。

10.根据权利要求1所述的一种快速高效的未纯化PCT单克隆抗体筛选方法，其特征在于：所述步骤二中，在37℃下振荡混匀反应15分钟；步骤四中，再次振荡混匀反应15分钟。

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【技术特征摘要】

1.一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，其特征在于：包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，其特征在于：步骤一中，待检测未纯化的抗体样本浓度需达到1 μg/ml及以上。

3.根据权利要求1或2所述的一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，其特征在于：步骤一中，所述pct抗原工作液中pct抗原的浓度为0.25～1 μg/ml。

4.根据权利要求1所述的一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，其特征在于：步骤一中，所述羊抗小鼠igg磁微粒工作液中羊抗小鼠igg磁微粒的浓度为0.1～0.3mg/ml，羊抗小鼠igg磁微粒的粒径为1～2 μm；步骤四中，所述化学发光物质标记的pct兔单克隆抗体中pct兔单克隆抗体的浓度为1～4 μg/ml，所述化学发光物质选自吖啶酯或吖啶酯衍生物。

5.根据权利要求1所述的一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，其特征在于：

6.根据权利要求5所述的一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，其特征在于：所述羊抗小鼠igg磁微粒工作液，是用含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液稀释羊抗小鼠igg磁微粒溶液配制而成的r1试剂；所述含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液为酶标稀释液。

7.根据权利要求5所述的一种快速高效的未纯化pct单克隆抗体筛选方法，其特征在于：所述pct抗原工作液，是用含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液稀释...

【专利技术属性】
技术研发人员：严慧杰，连浪宏，陈俊雄，
申请(专利权)人：黄石市蓝图生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人