【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于检测细胞或分子分析物的方法，该方法利用两种类型的工程化噬菌体：“捕获”噬菌体(诱饵噬菌体)和“信号”噬菌体(报告噬菌体)。通过该方法，可以选择性地结合目标分析物，从而识别所述目标分析物。
技术介绍
1、通常，在实验室诊断系统领域，例如临床和分子诊断系统，人们总是对开发创新系统抱有浓厚的兴趣。
2、目前用于不同性质的分析物(如病毒、分子标记、毒素、蛋白质、核酸等)的检测细胞系统(微生物和真核细胞)的主要分析方法主要是基于间接检测系统，这些系统虽然灵敏度高(例如pcr、elisa、其他抗体测试等)，但需要由合格的操作员进行操作，获得检测结果的等段时间较长，且需要集中进行分析。
3、另一个值得关注的方面是所谓的poct(即时检验技术)技术，用于开发与创新生物技术相结合的生物工程系统。特别地，这样的系统可以在非实验室环境下执行快速分析测试，由非合格人员或者甚至由患者他/她本人进行。尤其是，poct领域的研究受到越来越多的关注，这在很大程度上是由现代社会的两个明显趋势所推动的：(i)降低高昂医疗成本的普遍需要，以及(ii)对早期诊断和个性化治疗的更好的分析解决方案的需求。除此之外，由于大流行的爆发，对大规模筛查的需求也变得非常重要，而这种筛查又同时要求高度准确、灵敏且廉价。这些方面对于有效地管理患者、及时诊断以及迅速发现传染病爆发至关重要，从而能够有效地应对大流行或流行病事件。
4、因此，人们仍在寻找灵敏度高、选择性强、价格低廉且能直接读出的分析系统，从而能够直接检测分子和/或细胞
技术实现思路
1、因此，本专利技术要解决的问题是提供一种用于检测分析物的方法，所述分析物例如是细胞系统(例如细菌、寄生虫、真核细胞)、病毒、分子标记物(例如毒素、蛋白质、核酸)，优选具有生物临床意义的分析物，该方法应具有高灵敏度和高特异性的特点，是直接的，也可以用于快速且经济有效的系统。
2、本专利技术的方法解决了这一技术问题，如所附权利要求中所限定的，其中包含的定义是本专利技术的组成部分。
3、申请人已经找到一种用于检测细胞或分子分析物的方法，该方法使用两种类型的工程化噬菌体：诱饵噬菌体和报告噬菌体。具体地，所述噬菌体包括至少一种暴露在主要衣壳体(主要外壳蛋白)pviii上并能够选择性地结合目标分析物的融合肽。随后，报告噬菌体，即在噬菌体末端暴露在次要衣壳体(次要外壳蛋白)piii上的至少一种识别肽，以及在主要衣壳体上的用于信号转导的至少一种标记物的报告噬菌体，从而结合由诱饵噬菌体捕获的分析物。这种基于两种工程化噬菌体的检测系统可被定义为“分子三明治”。
4、因此，在第一方面，本专利技术涉及一种方法，其包括以下步骤：
5、a)使含有分析物的样品与结合到合适的支持物中并包含至少一种用于特异性识别分析物的肽或多肽或融合蛋白的第一噬菌体m13(诱饵噬菌体)相接触，其中，所述肽或多肽或融合蛋白暴露在蛋白质pviii上，从而形成包含与分析物结合的第一噬菌体m13的第一复合物(“诱饵噬菌体-分析物”复合物)；
6、b)将第一噬菌体m13与在前述步骤a)中未与第一噬菌体m13结合的样品部分分离；
7、c)向第一噬菌体m13中加入第二噬菌体m13(报告噬菌体)，其中，所述第二噬菌体m13包括至少一种用于特异性识别融合在蛋白质piii上的分析物的肽或多肽或蛋白质以及与所述第二噬菌体m13的衣壳缀合的至少一种标记物，所述标记物选自荧光团、发色团、电化学活性物质或电化学发光活性物质，从而形成包括以三明治的方式结合到分析物的第一噬菌体m13和第二噬菌体m13的第二复合物(“诱饵噬菌体-分析物-报告噬菌体”复合物)；
8、d)洗涤以去除未与分析物结合的第二噬菌体ml3；
9、e)确定由所述第二复合物的第二噬菌体m13的标记物产生的衍生信号。
10、有利的是，本专利技术的方法能够以选择性地、高灵敏度且直接的方式检测目标分析物。具体地，所述方法可用于直接检测传染性微生物(例如细菌、寄生虫和病毒，例如sars-cov-2)。其它有利的示例还包括直接检测人类真核细胞，如由于肿瘤病理学等病理学而引起的变异，以及不同分子性质的分析物(例如，蛋白质、分子标记、毒素、核酸等)。有利的是，本专利技术的方法提供了通过多重检测以同时对多种分析物进行综合分析的可能性。此外，另一个有利方面是这种检测方式成本低廉。最后，本专利技术的方法还可以用于poct。
11、通过以专利技术本身的代表性示例提供的本专利技术的示例性实施方式的描述，本专利技术的方法的更多特点和优势将变得显而易见。
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1.一种用于检测样品中的分析物的方法，其中，所述分析物选自：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析物为细菌。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述分析物为革兰氏阴性细菌。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述分析物为革兰氏阴性细菌铜绿假单胞菌。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤a)中所述的至少一种肽或多肽或融合蛋白具有序列SEQ.ID NO:1(QRKLAAKLT)。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤c)中所述的至少一种肽或多肽或噬菌体识别蛋白具有序列SEQ.ID NO:2(KLAKLAKKLAKLAK)。
7.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其特征在于：所述标记物为荧光团。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述荧光团为CF594(Biotium)。
9.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其特征在于：所述支持物包括磁性微球(MNP)，所述磁性微球以所述第一噬菌体M13官能化。
10.根据权利要
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述支持物为电极、聚合物或硅基表面。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：所述第一噬菌体M13与未与所述第一噬菌体M13结合的样品部分的分离步骤通过洗涤来进行。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于检测样品中的分析物的方法，其中，所述分析物选自：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析物为细菌。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述分析物为革兰氏阴性细菌。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述分析物为革兰氏阴性细菌铜绿假单胞菌。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤a)中所述的至少一种肽或多肽或融合蛋白具有序列seq.id no:1(qrklaaklt)。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤c)中所述的至少一种肽或多肽或噬菌体识别蛋白具有序列seq.id no:2(klaklakklaklak)。
7.根据前述权利要求中任意一项所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：萨布丽娜·科诺奇，萨尔瓦托·古列尔米诺，马迪奥·卡尔瓦雷西，阿尔贝托·达尼埃利，卢卡·普罗迪，恩扎·法兹奥，安纳波拉·彼得罗西诺，马特奥·迪·吉奥西亚，
申请(专利权)人：墨西拿大学，
类型：发明
国别省市：
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