【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开总体上涉及非天然存在的冠状病毒(cov)刺突(s)多肽以及包含所述多肽的纳米颗粒和疫苗，其可用于刺激免疫应答。所述纳米颗粒提供了任选地与洗涤剂核心缔合的抗原(例如，糖蛋白抗原)，并且通常使用重组方法产生。所述纳米颗粒具有改善的稳定性和增强的表位呈递。本公开还提供了含有所述纳米颗粒的组合物、用于产生它们的方法以及刺激免疫应答的方法。
技术介绍
1、传染性疾病仍然是遍及全世界的问题。尽管在开发针对一些病原体的疫苗方面已取得进展，但许多病原体仍对人类健康构成威胁。突发急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)的爆发已导致全球650万人死亡。sars-cov-2冠状病毒与在过去17年中已导致数百人死亡的严重急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)和中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)属于同一病毒家族。sars-cov-2导致疾病covid-19。
2、期望开发预防威胁生命的传染性疾病(像sars-cov-2冠状病毒)或降低其严重程度的疫苗。然而，由于病原体的逃避机制非常复杂并且难以稳定疫苗，因此人类疫苗的开发仍然具有挑战性。最佳地，疫苗必须同时诱导阻断或中和感染原的抗体，并且在各种环境(包括不能制冷的环境)中保持稳定。
技术实现思路
1、本公开提供了适于诱导针对sars-cov-2的免疫应答的非天然存在的cov s多肽。本公开还提供了含有所述糖蛋白的纳米颗粒以及刺激免疫应答的方法。
2、本公开还提供了适于诱导针对多种冠状病毒的免疫应答的cov s
3、本文提供了cov s多肽，其包含：
4、(i)具有灭活的弗林蛋白酶(furin)切割位点的s1亚基，其中所述s1亚基包含n末端结构域(ntd)、受体结合结构域(rbd)、亚结构域1和亚结构域2(sd1/2)，其中所述灭活的弗林蛋白酶切割位点具有qqaq(seq id no:7)的氨基酸序列；其中所述ntd任选地包含选自由以下组成的组的一个或多个修饰：
5、(a)选自由氨基酸11-14、56、57、130、131、132、144、145、198、199、228、229、230、231、234、235、236、237、238、239、240和其组合组成的组的一个或多个氨基酸的缺失；以及
6、(b)选自由氨基酸5、6、7、11、12、13、14、51、53、54、56、57、62、63、67、70、82、125、129、131、132、133、134、139、143、144、145、170、177、197、198、199、200、201、202、209、229、233、239、240、244、245和其组合组成的组的一个或多个氨基酸的突变；以及
7、(c)具有epe的氨基酸序列的三肽在氨基酸214与215之间的插入；
8、其中所述rbd任选地包含选自由氨基酸326、333、355、358、360、362、363、392、395、404、419、426、427、431、432、433、439、440、447、464、465、471、473、477、480、481、483、485、488、492和其组合组成的组的一个或多个氨基酸的突变；并且
9、其中所述sd1/2结构域任选地包含选自由534、557、591、600、601、626、642、645、664、666、668和其组合组成的组的一个或多个氨基酸的突变；以及
10、(ii)s2亚基，其中氨基酸973和974是脯氨酸，其中所述s2亚基任选地包含选自由以下组成的组的一个或多个修饰：
11、(a)从676-685、676-702、702-711、775-793、806-815和其组合中一个或多个氨基酸的缺失；以及
12、(b)选自由688、691、703、751、783、843、846、875、937、941、956、968、969、1014、1058、1105、1163、1186和其组合组成的组的一个或多个氨基酸的突变；以及
13、(c)从tmct中一个或多个氨基酸的缺失；以及(i)(a)-(c)和(ii)(a)-(c)中的修饰中的任一个的组合；
14、其中所述cov s糖蛋白的氨基酸相对于具有seq id no:2的序列的多肽进行编号。
15、在实施方案中，所述一个或多个修饰选自：(i)选自由6、14、54、70、82、129、133、134、139、143、144、170、197、199、200、239、244、326、333、355、358、360、362、363、392、395、404、427、431、432、433、439、447、464、465、471、473、477、480、483、485、488、492、534、591、601、626、642、645、666、668、691、751、783、843、941、956、968和1186组成的组的一个或多个氨基酸的突变；(ii)选自由11、12、13、56、57、130、131、132、144、145和198组成的组的一个或多个氨基酸的缺失；(iii)具有epe的氨基酸序列的三肽在氨基酸214与215之间的插入；以及(i)-(iii)中的修饰的组合，其中所述cov s糖蛋白的氨基酸相对于具有seq id no:2的序列的多肽进行编号。在实施方案中，所述一个或多个修饰选自：t6i、t6r、a14s、a54v、v70a、t82i、g129d、h133q、k134e、w139r、e143g、f144l、q170e、i197v、l199i、v200e、v200g、g239v、g244s、g326d、g326h、r333t、l355i、s358f、s358l、s360p、s362f、t363a、d392n、r395s、k404n、n427k、k431t、v432p、g433s、l439r、l439q、n447k、s464n、t465k、e471a、f473v、f473s、f477s、q480r、g483s、q485r、n488y、y492h、t534k、t591i、d601g、g626v、h642y、n645s、n666k、p668h、s691l、n751k、d783y、n843k、q941h、n956k、l968f、d1186n、氨基酸11的缺失、氨基酸12的缺失、氨基酸13的缺失、氨基酸56的缺失、氨基酸57的缺失、氨基酸130的缺失、氨基酸131的缺失、氨基酸132的缺失、氨基酸144的缺失、氨基酸145的缺失、氨基酸198的缺失和具有epe的氨基酸序列的三肽在氨基酸214与215之间的插入，以及其组合；其中所述cov s糖蛋白的氨基酸相对于具有seq id no:2的序列的多肽进行编号。
16、在实施方案中，本文提供了包含选自由以下组成的组的修饰的组合的cov本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种冠状病毒(CoV)刺突(S)糖蛋白，其包含
2.根据权利要求1所述的CoV S糖蛋白，其包含选自以下的一个或多个修饰：
3.根据权利要求1或2所述的CoV S糖蛋白，其包含选自以下的一个或多个修饰：T6I、T6R、A14S、A54V、V70A、T82I、G129D、H133Q、K134E、W139R、E143G、F144L、Q170E、I197V、L199I、V200E、V200G、G239V、G244S、G326D、G326H、R333T、L355I、S358F、S358L、S360P、S362F、T363A、D392N、R395S、K404N、N427K、K431T、V432P、G433S、L439R、L439Q、N447K、S464N、T465K、E471A、F473V、F473S、F477S、Q480R、G483S、Q485R、N488Y、Y492H、T534K、T591I、D601G、G626V、H642Y、N645S、N666K、P668H、S691L、N751K、D783Y、N843K、Q941H、N956K、L968F、D1186N
4.根据权利要求1-3中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述CoV S糖蛋白包含选自由以下组成的组的修饰的组合：
5.根据权利要求1-4中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述CoV S糖蛋白与SEQ IDNO:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述CoV S糖蛋白的所述NTD与SEQ ID NO:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的NTD至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述CoV S糖蛋白的所述RBD与SEQ ID NO:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的RBD至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述CoV S糖蛋白的所述S1亚基与SEQ ID NO:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的S1亚基至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述CoV S糖蛋白的所述S2亚基与SEQ ID NO:174、175、186、188、190、195、217-228和233-236以及243中的任一个的S2亚基至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述CoV S糖蛋白的所述SD1/2与SEQ ID NO:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的SD1/2至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的CoV S糖蛋白，其中所述NTD、RBD、S1亚基、S2亚基和SD1/2中的每一种与SEQ ID NO:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的相应NTD、RBD、S1亚基、S2亚基和SD1/2至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种冠状病毒(cov)刺突(s)糖蛋白，其包含
2.根据权利要求1所述的cov s糖蛋白，其包含选自以下的一个或多个修饰：
3.根据权利要求1或2所述的cov s糖蛋白，其包含选自以下的一个或多个修饰：t6i、t6r、a14s、a54v、v70a、t82i、g129d、h133q、k134e、w139r、e143g、f144l、q170e、i197v、l199i、v200e、v200g、g239v、g244s、g326d、g326h、r333t、l355i、s358f、s358l、s360p、s362f、t363a、d392n、r395s、k404n、n427k、k431t、v432p、g433s、l439r、l439q、n447k、s464n、t465k、e471a、f473v、f473s、f477s、q480r、g483s、q485r、n488y、y492h、t534k、t591i、d601g、g626v、h642y、n645s、n666k、p668h、s691l、n751k、d783y、n843k、q941h、n956k、l968f、d1186n、氨基酸11的缺失、氨基酸12的缺失、氨基酸13的缺失、氨基酸56的缺失、氨基酸57的缺失、氨基酸130的缺失、氨基酸131的缺失、氨基酸132的缺失、氨基酸144的缺失、氨基酸145的缺失、氨基酸198的缺失和具有epe的氨基酸序列的三肽在氨基酸214与215之间的插入；
4.根据权利要求1-3中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述cov s糖蛋白包含选自由以下组成的组的修饰的组合：
5.根据权利要求1-4中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述cov s糖蛋白与seq idno:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述cov s糖蛋白的所述ntd与seq id no:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的ntd至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述cov s糖蛋白的所述rbd与seq id no:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的rbd至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述cov s糖蛋白的所述s1亚基与seq id no:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的s1亚基至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述cov s糖蛋白的所述s2亚基与seq id no:174、175、186、188、190、195、217-228和233-236以及243中的任一个的s2亚基至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述cov s糖蛋白的所述sd1/2与seq id no:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的sd1/2至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述ntd、rbd、s1亚基、s2亚基和sd1/2中的每一种与seq id no:174、175、186、188、190、195、217-228、233-236和243中的任一个的相应ntd、rbd、s1亚基、s2亚基和sd1/2至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的cov s糖蛋白，其包含蛋白标签。
13.根据权利要求12所述的cov s糖蛋白，其中所述蛋白标签在所述糖蛋白的n末端。
14.根据权利要求12所述的cov s糖蛋白，其中所述蛋白标签在所述糖蛋白的c末端。
15.根据权利要求12-14中任一项所述的cov s糖蛋白，其中所述蛋白标签选自聚谷氨酸盐标签、flag标签、ha标签、聚his标签(具有约5-10个组氨酸)(seq id no:101)、六组氨酸标签(seq id no:100)、8x-his标签(具八个组氨酸)(seq id no:102)、myc标签、谷胱甘肽-s-转移酶标签、绿色荧光蛋白标签、麦芽糖结合蛋白标签、硫氧还蛋白标签、fc标签或其组合。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的cov s糖蛋白，其包含n末端信号肽。
17.根据权利要求16所述的cov s糖蛋白，其中所述n末端信号肽选自seq id no:5、117、154和193中的任一个。
18.一种核酸，其包含根据权利要求1-17中任一项所述的cov s糖蛋白。
19.根据权利要求18所述的核酸，其中所述核酸与seq id no:196、197、198、199、201、202、204、206、208、210、212、214或216中的任一个的核酸至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一。
20.一种载体，其包含根据权利要求18或19所述的核酸。
21.一种纳米颗粒，其包含根据权利要求1-17中任一项所述的cov s糖蛋白和非离子型洗涤剂核心。
22.根据权利要求21所述的纳米颗粒，其中在4℃储存约一个月后，如通过差示扫描量热法所确定，所述纳米颗粒的熔解温度是至少55℃、至少56℃、至少57℃、至少58℃、至少59℃、至少60℃、至少61℃、至少62℃、至少63℃、至少64℃、至少65℃、或约55℃至约65℃。
23.根据权利要求21或22所述的纳米颗粒，其中在25℃储存约一个月后，如通过差示扫描量热法所确定，所述纳米颗粒的熔解温度是至少55℃、至少56℃、至少57℃、至少58℃、至少59℃、至少60℃、至少61℃、至少62℃、至少63℃、至少64℃、至少65℃、或约55℃至约65℃。
24.根据权利要求21-23中任一项所述的纳米颗粒，其中在37℃储存约一个月后，如通过差示扫描量热法所确定，所述纳米颗粒的熔解温度是至少55℃、至少56℃、至少57℃、至少58℃、至少59℃、至少60℃、至少61℃、至少62℃、至少63℃、至少64℃、至少65℃、或约55℃至约65℃。
25.根据权利要求21-24中任一项所述的纳米颗粒，其中在4℃储存约一个月后，如通过动态光散射所确定，所述纳米颗粒具有约30nm至约65nm或约30nm至约50nm的zavg直径。
26.根据权利要求21-25中任一项所述的纳米颗粒，其中在25℃储存约一个月后，如通过动态光散射所确定，所述纳米颗粒具有约30nm至约65nm或约30nm至约50nm的zavg直径。
27.根据权利要求21-26中任一项所述的纳米颗粒，其中在37℃储存约一个月后，如通过动态光散射所确定，所述纳米颗粒具有约30nm至约120nm、约30nm至约80nm或约30nm至约60nm的zavg直径。
28.根据权利要求21-27中任一项所述的纳米颗粒，其中在4℃储存约一个月后，如通过动态光散射所确定，所述纳米颗粒具有约0.1nm至约0.4nm、约0.15nm至约0.35nm或约0.2nm至约0.45nm的多分散性指数。
29.根据权利要求21-28中任一项所述的纳米颗粒，其中在25℃储存约一个月后，如通过动态光散射所确定，所述纳米颗粒具有约0.1nm至约0.4nm、约0.15nm至约0.35nm或约0.2nm至约0.45nm的多分散性指数。
30.根据权利要求21-29中任一项所述的纳米颗粒，其中在37℃储存约一个月后，如通过动态光散射所确定，所述纳米颗粒具有约0.1nm至约0.4nm、约0.15nm至约0.35nm或约0.2nm至约0.45nm的多分散性指数。
31.根据权利要求21-30中任一项所述的纳米颗粒，其中所述非离子型洗涤剂选自由聚山梨糖醇酯20(ps20)、聚山梨糖醇酯40(ps40)、聚山梨糖醇酯60(ps60)、聚山梨糖醇酯65(ps65)和聚山梨糖醇酯80(ps80)组成的组。
32.根据权利要求31所述的纳米颗粒，其中所述非离子型洗涤剂是ps80。
33.一种细胞，其表达根据权利要求1-17中任一项所述的cov s糖蛋白。
34.根据权利要求33所述的细胞，其中所述细胞是昆虫细胞。
35.一种免疫原性组合物，其包含至少一种根据权利要求1-17中任一项所述的cov s糖蛋白或根据权利要求21-32中任一项所述的纳米颗粒和药学上可接受的缓冲液。
36.根据权利要求35所述的免疫原性组合物，其包含两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或十种不同的cov s糖蛋白。
37.根据权利要求35或36所述的免疫原性组合物，其中至少一种cov s糖蛋白包含选自由以下组成的组的修饰的组合：
38.根据权利要求35-37中任一项所述的免疫原性组合物，其中至少一种cov s糖蛋白与seq id no:174、175、186、1...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·史密斯，M·J·马萨尔，JH·田，
申请(专利权)人：诺瓦瓦克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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