本发明专利技术公开了一种适同时用于甲萘威和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测定试剂盒，它包括盒体、设在盒体内的酶标板／试管及设在盒体内的试剂。在酶标板的每孔内，由包被液包被能与抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体特异性合反应的通用包被抗原，并用明胶进行封闭，盒内试剂包含洗涤液、底物稀释液、甲萘威和甲基对硫磷标准溶液、抗甲萘威和甲基对硫磷抗体、酶标抗甲萘威和甲基对硫磷抗体、底物、显色物质和反应终止液。本发明专利技术能用于水、土壤、蔬菜等食品中及中毒样品中甲萘威和甲基对硫磷残留的同时快速检测，样品的前处理过程简单，能同时检测批量的样品，样品检测成本低于传统的检测方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种同时适用于针对残留甲萘威和甲基对硫磷进行分析的酶联 免疫吸附测定试剂盒，该试剂盒主要适用于快速测定批量的水样、土壤等环境 样品和中毒样品及蔬菜等食品样品中的甲萘威和甲基对硫磷残留。属于残留农 药检测领域。(二)
技术介绍
农药及其代谢物传统的残留分析方法主要是依靠气相色谱(GC)、高效液相 色谱(HPLC)、质谱(MS)等物理化学分析手段，但由于农药使用规模不断扩大， 农药残留造成环境影响和人类健康的慢性和长期效应日益受到人们关注和担 忧，对农药残留的限制也越来越严格，对分析测定对象、种类、数量、范围、 指标等诸方面都提出了新的要求和更高的标准，但传统的理化分析方法通常繁 瑣复杂，工作量大，仪器昂贵，并要有熟练的技术人员及较长的分析周期。因 此人们迫切希望有一种简单、快速、灵敏及廉价的检测技术能在野外和实验室 内进行大批量的检测应用。免疫分析法正具备这些优点，所以尽管将免疫分析 用于农药残留分析的时间很短，仍然很快用于环境样品和食品样品中农药残留 的分析。甲萘威(Carbaryl)，自1953年由美国联合碳化物公司开发推广后即作为一种 广谱性高效杀虫剂，在世界范围内广泛应用于粮食、棉花等经济作物的害虫防 治。但是由于甲萘威对人畜的毒性相当高，且有内吸性，近年来，因甲萘威中 毒的报道，仍然屡见不鲜。尤其是在作物和蔬菜上的大量使用，对人体健康造 成极大的危害，这已引起人们的关注。甲基对硫磷(Parathion-methyl)由1944 年德国希拉台尔(G.Schmder)化学家首先合成，1949年拜尔公司首先建厂生产， 嗣后世界各地大量有多家公司相继投产，上世纪60年代之后我国产、用量都很 大。甲基对硫磷作为一种广谱性高效杀虫剂，在世界范围内广泛应用于粮食、 棉花等经济作物的害虫防治。但是由于甲基对硫磷对人畜剧毒，因甲基对硫磷 中毒的报道，屡见不鲜，目前我国虽然已经禁止生产和使用甲基对硫磷。开发 一种简单快速、同时适用于甲萘威和甲基对硫磷农药残留现场监控的痕量分析 方法具有重要的现实意义。检测甲萘威和甲基对硫磷残留量常规方法为高效液相色谱法等。然而该方 法的灵敏度受样品的净化、浓缩等步骤的影响很大，且该方法需要昂贵的仪器， 且过程繁瑣，不适合大批量样品的检测与分析。免疫分析为甲萘威和甲基对硫 磷的残留检测提供了一个新的分析检测途径。要将免疫分析方法运用到实际中，则需要将其制备成试剂盒。现有技术公开了多种试剂盒，其中包括了检测甲基 对硫磷、甲萘威等残留物的试剂盒及其制备方法。而现有技术中没有关于方便 同时检测甲萘威和甲基对硫磷的技术。本专利技术正是针对这一空白，经过专利技术人长时间的实验和测试，得到了一种 适用于同时针对甲萘威和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测定试剂盒。
技术实现思路
要解决的问题本专利技术的目的是提供一种同时检测甲萘威和甲基对硫磷残留的酶联免疫吸 附测定试剂盒。本专利技术的另一目的是提供一种具有高特异性、高灵敏度，操作方法简单快 速，并能用于大批量样品同时快速检测残留甲萘威和甲基对硫磷的试剂盒。技术方案J本专利技术涉及一种同时用于甲萘威和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测 定试剂盒，它基于免疫反应和酶促反应，包括盒体、设在盒体内的酶标板和/或 试管和设在盒体内的试剂，其特征在于，在酶标板的每个孔内含有抗甲萘威和 甲基对硫磷通用包被抗原，盒内试剂包含抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体、甲 萘威和甲基对硫磷标准溶液、酶标记抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体。盒内试 剂还包含洗涤液、底物稀释液、底物溶液和反应终止液。在具体的实施方案中，本专利技术试剂盒包括盒体、设在盒体内的96孔/40孔 酶标板/试管和设在盒体内的试剂。在所述酶标板的每个孔内，吸附着由包被液 包被能与抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体特异性结合反应的通用包被抗原，并 用5%明胶进行封闭，盒内试剂包含洗涤液(稀释液)、底物稀释液、抗甲萘威和 甲基对硫磷共同抗体(间接ELISA)、甲萘威和甲基对硫磷标准溶液、酶标甲萘威 和甲基对硫磷共同抗体例如辣根过氧化物酶标记羊抗兔共同抗体(适用于间接竟 争ELISA法)或辣根过氧化物酶标记抗甲萘威和甲基对硫磷兔共同抗体(适用于 直接竟争ELISA法)、底物溶液和反应终止液。其中固相通用包被抗原的制备及盒体内试剂组成如下将通用包被抗原用pH9.6， 0.05mol/L的碳酸盐缓冲溶液(含1 2g碳酸钠和 2 ~ 4g碳酸氢钠，双蒸水1L,即包被液)稀释成0.5 ~ 4ug/mL,点于96孔/40孔 酶标板上，100ug/孔，并用5%明胶封闭；其中通用包被抗原为甲萘威和甲基对 硫磷人工半抗原与卵清蛋白的复合物；洗涤液(稀释液)一瓶，40-80mL/瓶，组成比例为磷酸二氢钾0.1-0.3g、磷酸 氢二钠2画4g、氯化钾0.1-0.3g、吐温-20 0.5-3mL、双蒸水500ml-1000ml,为正常使用的15-30倍浓缩液；底物稀释液一瓶，30-50mL/瓶，配制如下柠檬酸3-6g，磷酸氢二钠l-3g， 双蒸水，为正常使用的5-10倍浓缩液；酶底物为30%过氧化氢，10-15mL/瓶和邻苯二胺固体粉末4-6支，10-20mg/支；抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体(IgG)4瓶，100ml/瓶，工作浓度为1: 500-1000(间接ELISA法)；所述的抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体(IgG)为通过 甲萘威和甲基对硫磷和牛血清白蛋白合成的偶联物作为免疫源注射家兔后产生 的能与甲萘威和甲基对硫磷分子、甲萘威和甲基对硫磷包被原特异性结合的免 疫球蛋白(IgG);辣根过氧化物酶标记抗甲萘威和甲基对硫磷兔共同抗体(直接ELISA法)或 者辣根过氧化物酶标记羊抗兔共同抗体(间接ELISA法)一瓶，200-400uL/瓶，为 正常使用时800-1500倍浓缩液；上述辣根过氧化物酶标抗甲萘威和甲基对硫磷 共同抗体为甲萘威和甲基对硫磷共同抗体(IgG)与辣根过氧化物酶(HRP)结合形 成的复合物；反应终止液一瓶，30-50ml/瓶，为2mol/L硫酸；甲萘威和甲基对硫磷不同浓度系列(O.l、 0.5、 2、 10、 50、 100mg/L)标准液 6瓶，l-4mL/瓶，甲醇定容，使用时用PBST稀释IO倍。本专利技术的同时适用于甲萘威和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测定试 剂盒，能够同时检测水样、土壤、中毒样品、蔬菜等食品中甲萘威和甲基对硫 磷的残留。试剂盒测定原理首先将农药分子与大分子载体(如蛋白质)偶联制得的 复合物作为通用包被抗原吸附于固相载体上，然后加入待测农药和抗甲萘威和 甲基对硫磷共同抗体(间接ELISA法)或酶标抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体(直 接ELISA法)。通用包被抗原、待测农药与抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体(或 酶标抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体)进行竞争反应，待测农药含量多，则被结 合在通用包被抗原上的共同抗体少，最终酶促反应显色浅，反之结合在通用包 被抗原的共同抗体(或酶标共同抗体)多，最终酶促反应显色深。上述通用包被抗 原、待测农药、抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体或酶标抗甲萘威和甲基对硫磷 共同抗体竞争结合反应后，再加入底物溶液出现显色反应加以测定(间接ELISA 法，加底物溶液前不需再加入酶标2抗)。当共同抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同时使用于甲萘威和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测定试剂盒，它包括盒体、设在盒体内的酶标板和／或试管和设在盒体内的试剂，其特征在于，在酶标板的每孔内含有抗甲萘威和甲基对硫磷通用包被抗原，盒内试剂包含抗甲萘威和甲基对硫磷抗体、甲萘威和甲基对硫磷标准溶液、酶标记抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体。
【技术特征摘要】
1. 一种同时使用于甲萘威和甲基对硫磷残留分析的酶联免疫吸附测定试剂盒，它包括盒体、设在盒体内的酶标板和/或试管和设在盒体内的试剂，其特征在于，在酶标板的每孔内含有抗甲萘威和甲基对硫磷通用包被抗原，盒内试剂包含抗甲萘威和甲基对硫磷抗体、甲萘威和甲基对硫磷标准溶液、酶标记抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体。2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述抗甲萘威和甲基对硫磷共同抗体为通过甲萘威和甲基对硫磷和牛血清白蛋白合成的偶联物作为免疫源...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙家隆，
申请(专利权)人：孙家隆，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]
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