【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，尤其涉及一种过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系及其构建方法、以及在外源重组蛋白表达中的应用。
技术介绍
1、在众多用于生产重组蛋白的哺乳动物细胞表达系统中，中国仓鼠卵巢(chinesehamsterovary,cho)细胞的应用最为广泛，但也同样存在重组蛋白表达量较低和异质性等问题，制约其在疫苗开发、临床治疗药物和基因治疗等方面的应用。因此，利用基因和细胞工程的方法进行cho细胞重组表达研究，对于提高其转基因表达水平和表达稳定性、建立高产稳产的重组蛋白cho细胞表达系统具有十分重要的意义和应用价值。
2、脂质是生物膜的主要成分，也可以作为哺乳动物细胞的能量来源和信号分子。它们是内质网和高尔基体的关键组成部分，可以负责蛋白质合成、折叠、翻译后修饰和分泌。磷脂是大多数哺乳动物细胞膜的主要成分，常与蛋白质、糖脂、胆固醇等其它分子共同构成脂双分子层，即细胞膜的结构。磷脂酸(pa)作为一种重要的信号分子，通过结合不同靶蛋白并影响相关蛋白的活性、亚细胞定位、蛋白质的相互作用或复合物的组装，从而参与各种信号途径和生理过程。外源性补充磷脂，如磷脂酸和溶血磷脂酸，已被证明可以刺激cho细胞生长。hdgkθ，是二酰甘油激酶的一种亚型，可以催化二酰甘油(diacylglycerol，dag)磷酸化为磷脂酸。但hdgkθ过表达是否能够提高cho细胞系重组蛋白的表达产量尚未见报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系，
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种人源hdgkθ基因的过表达载体，将人源hdgkθ基因片段插入tol2载体中构建得到。
4、作为优选，所述人源hdgkθ基因片段的核苷酸序列如seq id no.1所示。
5、本专利技术提供了一种过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系，将上述人源hdgkθ基因的过表达载体转染至cho细胞，使得hdgkθ基因整合到cho细胞基因座中。
6、本专利技术还提供了所述过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系的构建方法，将所述人源hdgkθ基因的过表达载体在tol2转座子作用下，通过转座酶的催化转染至cho细胞中，并依据mrna表达量筛选稳定过表达hdgkθ的cho细胞。
7、作为优选，所述筛选包括qpcr检测过程，所述qpcr检测过程中的引物组包括hdgkθ-f和hdgkθ-r。
8、作为优选，所述hdgkθ-f的序列如seq id no.2所示，所述hdgkθ-r的序列如seq idno.3所示。
9、本专利技术还提供了所述人源hdgkθ基因的过表达载体在构建重组蛋白表达体系中的应用。
10、本专利技术还提供了过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系在外源重组蛋白表达中的应用。
11、作为优选，以所述过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系作为宿主细胞，表达外源重组蛋白。
12、作为优选，所述外源重组蛋白包括阿达木单抗。
13、本专利技术还提供了一种重组蛋白表达体系，包括cho细胞系、人源hdgkθ基因的过表达载体、转座酶以及包含重组蛋白编码基因的表达载体。
14、通过采用上述技术方案，本专利技术具有如下有益效果：
15、1.本专利技术技术方案中将合成的hdgkθ的编码基因核酸序列克隆至具有转座子元件的出发载体，构建hdgkθ过表达载体，并且通过转座酶持续高效催化hdgkθ过表达载体整合到cho细胞的基因中，实现cho细胞中hdgkθ的稳定过表达。
16、2.本专利技术创造性的将hdgkθ过表达载体应用于构建重组蛋白表达系统，将hdgkθ过表达载体转染至cho细胞构建过表达hdgkθ的cho细胞系，该cho细胞系能够显著提高hdgkθ的mrna和蛋白表达水平，同时该cho细胞系作为重组蛋白表达用宿主细胞，相比野生型cho细胞系，提升重组蛋白表达量，有效克服了目前cho细胞表达系统存在的表达水平较低的问题。
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1.一种人源hDGKθ基因的过表达载体，其特征在于，将人源hDGKθ基因片段插入Tol2载体中构建得到；
2.一种过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞系，其特征在于，将权利要求1所述人源hDGKθ基因的过表达载体转染至CHO细胞，使得hDGKθ基因整合到CHO细胞基因座中。
3.权利要求2所述过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞系的构建方法，其特征在于，将权利要求1或2所述人源hDGKθ基因的过表达载体在Tol2转座子作用下，通过转座酶的催化转染至CHO细胞中，并依据mRNA表达量筛选稳定过表达hDGKθ的CHO细胞。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述筛选包括qPCR检测过程，所述qPCR检测过程中的引物组包括hDGKθ-F和hDGKθ-R；
5.权利要求1所述人源hDGKθ基因的过表达载体在构建重组蛋白表达体系中的应用。
6.权利要求2所述过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞系在外源重组蛋白表达中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，以所述过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述外源重组蛋白包括阿达木单抗。
9.一种重组蛋白表达体系，其特征在于，包括CHO细胞系、人源hDGKθ基因的过表达载体、转座酶以及包含重组蛋白编码基因的表达载体。
...【技术特征摘要】
1.一种人源hdgkθ基因的过表达载体，其特征在于，将人源hdgkθ基因片段插入tol2载体中构建得到；
2.一种过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系，其特征在于，将权利要求1所述人源hdgkθ基因的过表达载体转染至cho细胞，使得hdgkθ基因整合到cho细胞基因座中。
3.权利要求2所述过表达人源hdgkθ基因的cho细胞系的构建方法，其特征在于，将权利要求1或2所述人源hdgkθ基因的过表达载体在tol2转座子作用下，通过转座酶的催化转染至cho细胞中，并依据mrna表达量筛选稳定过表达hdgkθ的cho细胞。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述筛选包括qpcr检测...
【专利技术属性】
技术研发人员：单琳琳，崔振武，王天云，王小引，张俊河，王芳，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：
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