【技术实现步骤摘要】
本专利技术实施例涉及生物活性肽提取，具体涉及一种高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽制备及其在具有神经保护功效的功能性食品或药物中的应用。
技术介绍
1、唾液酸化糖肽(sialylglycopeptide，sgp)是鸡蛋黄中重要的生物活性肽之一，其由唾液酸化糖链和肽段两部分连接而成，肽段部分序列为赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-赖氨酸-苏氨酸(lys-val-ala-asn-lys-thr，kvankt)，其中asn被复杂型的唾液酸化n-寡糖链修饰。由于sgp中唾液酸化糖链结构十分复杂，利用化学方法难以实现完整sgp的合成。因此，需要从燕窝、鸡蛋、牛乳、鱼卵等天然产物中分离制备sgp。如seko等人利用苯酚水溶液提取sgp粗品并结合多次葡聚糖凝胶柱色谱和阴离子树脂柱层析进行分离纯化获得纯度较高的sgp。zou等人在seko方法的基础上，将富集纯化方法优化为sephadex g-50结合gcc色谱柱对鸡蛋黄sgp进行富集纯化。但现有鸡蛋黄sgp制备方法多以苯酚、乙醚、丙酮等有机试剂为提取溶剂，并以乙腈作为洗脱溶剂，存在安全性低、成本高、步骤复杂、得率低等问题，制约了sgp的开发与利用。因此，亟需建立一种绿色且安全的sgp制备方法，为其深度开发与利用奠定基础。
2、众多研究表明，sgp具有抗菌、抗骨质疏松、抗病毒等作用。sugita-konishi等人通过建立沙门氏菌感染balb/c小鼠的模型，研究了鸡蛋黄sgp及其衍生物对沙门氏菌的影响，结果表明鸡蛋黄sgp及其衍生物可以有效阻止沙门氏菌在肠道细胞表面的粘附，从而发挥抗感染作用。h
技术实现思路
1、为此，本专利技术实施例提供一种高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽制备及其在具有神经保护功效的功能性食品或药物中的应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：
3、根据本专利技术实施例的第一方面，本专利技术提供一种高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，所述方法包括如下步骤：
4、(1)将新鲜未受精的鸡蛋黄与乙醇混合并搅拌均匀，离心后收集沉淀部分，得到脱脂蛋黄；
5、(2)将脱脂蛋黄与水混合，离心后收集上清液，得到唾液酸化糖肽粗品；
6、(3)所述唾液酸化糖肽粗品依次采用棉花亲水色谱柱、c18固相萃取柱和氨基固相萃取柱进行纯化，得到高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽。
7、进一步地，步骤(1)中，所述乙醇为体积百分数90％～100％的乙醇水溶液，所述鸡蛋黄与乙醇的体积比为1～3：1；
8、所述混合的温度为0～25℃，搅拌的时间为1h～3h；
9、所述离心的转速为6000～12000r/min，时间为10min～30min。
10、进一步地，步骤(2)中，所述脱脂蛋黄与水的质量比为1：5～20；
11、所述混合的温度0～25℃，时间为30min～36h；
12、所述离心的转速为6000～12000r/min，时间为10min～30min。
13、进一步地，步骤(3)中，所述棉花亲水色谱柱的容积与装填的脱脂棉的质量的比例为1ml：100mg～300mg；
14、采用棉花亲水色谱柱进行纯化的过程为：用水将唾液酸化糖肽粗品配制成5mg/ml～20mg/ml的水溶液，上样，用体积百分比为100％～75％的乙醇水溶液洗脱除杂，再用水进行洗脱，收集洗脱液。
15、进一步地，步骤(3)中，所述c18固相萃取柱的容积与装填的c18填料的质量的比例为12ml：1g～2g，所述c18固相萃取柱在使用前经乙醇活化和水平衡；
16、采用c18固相萃取柱进行纯化的过程为：用水将棉花亲水色谱柱纯化后的粗唾液酸化糖肽配制成5mg/ml～10mg/ml的水溶液，上样，用水洗脱除杂，再用体积百分数为5％～25％的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液。
17、进一步地，步骤(3)中，所述氨基固相萃取柱的容积与装填的氨基填料的质量的比例为12ml：1g～2g，所述氨基固相萃取柱在使用前经乙醇活化和体积百分数为80％～50％的乙醇水溶液平衡；
18、采用氨基固相萃取柱进行纯化的过程为：用体积百分数为80％～50％的乙醇水溶液将c18固相萃取柱纯化后的唾液酸化糖肽配制成5mg/ml～10mg/ml的溶液，上样，用体积百分数为100％、90％、80％、70％、60％的乙醇水溶液梯度洗脱杂质，再用水进行洗脱，收集洗脱液。
19、根据本专利技术实施例的第二方面，本专利技术提供一种高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽，其由如上任一项所述的方法制成。
20、根据本专利技术实施例的第三方面，本专利技术提供如上所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽在制备具有神经保护功效的产品中的应用。
21、进一步地，所述产品包括功能性食品、保健品和药品。
22、本专利技术实施例具有如下优点：
23、1、本专利技术以水为提取溶剂，以乙醇为除脂溶剂，以及棉花亲水色谱柱的洗脱溶剂，替代了安全性低的苯酚和乙腈试剂，可实现从一个鸡蛋黄中至少制备30mg唾液酸化糖肽(sgp)，纯度为95％以上，具有得率高、成本低且绿色环保高效的优点。
24、2、本专利技术方法工艺简单，可操作性强，适合于工业化规模化生产。
25、3、本专利技术利用谷氨酸诱导小鼠海马神经元ht22细胞建立氧化损伤模型，研究表明所制备的鸡蛋唾液酸化糖肽能够有效抑制小鼠海马神经元ht22细胞因氧化应激诱导的凋亡，且唾液酸化糖肽纯度越高，抑制作用越强，为实现开发功能性食品和药品提供科学依据。
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1.一种高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，
3.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，
4.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，
5.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，
6.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，
7.一种高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽，其特征在于，其由权利要求1-6中任一项所述的方法制成。
8.权利要求7所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽在制备具有神经保护功效的产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品包括功能性食品、保健品和药品。
【技术特征摘要】
1.一种高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，
3.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，
4.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，
5.根据权利要求1所述的高纯度鸡蛋唾液酸化糖...
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