【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种鉴定香蕉种质资源的方法及其应用。
技术介绍
1、栽培型香蕉种类繁多，在香蕉的育种研究乃至香蕉的生产、销售、检测等过程中，都有对香蕉的类型进行鉴定的需求，建立高效、准确的鉴定方法有重要的现实意义和广阔的应用前景。香蕉是芭蕉目(scitamineae)芭蕉科(musaceae)芭蕉属(musa)的常绿多年生单子叶大型草本植物，热带和亚热带地区多有种植。simmonds等人认为大部分香蕉栽培种是由尖苞蕉(musa acuminata colla.)和长梗蕉(musa balbisiana colla.)两个野生种种内及种间杂交演化而成。simmonds将贡献尖苞片蕉性状的基因组称为a基因组，将贡献长梗蕉性状的基因组称为b基因组，并利用15个关键性状将香蕉栽培种分为aa、aaa、ab、aab、abb、aaaa、aaab、aabb、abbb、bb和bbb等基因组型。这种划分香蕉基因组型的方法被称为simmonds分类法。基因组型下面往往分亚组(subgroup)，例如aa基因组型有“sucrier”和“pisang jari buaya”等，aaa基因组型有“cavendish”、“gros michel”、“red”和“ibotabota”等，abb基因组型有“pisang awak”和“saba”等，aab有“pisang raja”、“plantain”和“pome”等。亚组以下往往有多个不同的栽培品种，如cavendish亚组包含‘巴西’、‘威廉斯’、‘北蕉’等栽培品种，“pisang awa
2、一般地，栽培型香蕉种质资源的类型是指该其基因组型和基因组型以下的分类(如亚组)。同一类型的香蕉种质资源往往高度相似、有相同的来源或者存在衍生关系。目前，栽培型香蕉的类别的鉴定主要有三种较常用的方法：性状观察法、基因组型分子鉴定法和简单重复序列(simple sequence repeats，ssr)法。
3、性状观察法是最常用和最主要的香蕉鉴定方法。一般地，香蕉的性状观察法可以分为性状评分法(即simmonds分类法)和性状观察精准鉴定法。性状打分基因组型鉴定法是指对待鉴定种质的15个关键性状进行打分，通过分数判断基因组型；而性状观察精准鉴定法是将其他更多、更细致的性状与已知的种质进行比较，推测其类型或品种名。然而，这种方法具有明显的局限性。为了准确判断待检测品种的类型，往往需要对待检测香蕉的完整生长周期(特别是生殖相关的性状)进行一次甚至多次的观察、监测、记录、统计和比较，整个过程费时、费力，并且观测结果容易受到地理、环境、气候甚至观测人的经验和主观判断影响。
4、基因组型分子鉴定法是目前栽培型香蕉类型鉴定的基本方法，常用于辅助性状观察法，可在一定程度代替性状打分基因组型鉴定法。有研究人员利用倍性检测和a、b基因组特异的分子标记鉴定的方法(这里统称为基因组型分子鉴定法)可以较为准确地鉴定香蕉的基因组型(一种香蕉a、b基因组的分型方法，cn201910399127.8)。然而，这种方法无法鉴定基因组型以下的类别，应用范围较窄。另外，该方法相对繁琐，需要多次pcr、酶切和跑胶，获得的结果信息量有限且易受实验操作影响。
5、ssr法在理论上能用于鉴定香蕉基因组型以下的类别。例如，王静毅等人利用5对微卫星(simple sequence repeat，ssr)标记引物，将56份香蕉资源区分开(王静毅,陈业渊,黄秉智,于飞,武耀廷.部分香蕉品种ssr指纹图谱的构建.果树学报,2009,26:733-738.)。但是，ssr法操作相对复杂、繁琐，实验结果依赖于对电泳后银染形成的电泳图谱的记录、比较和分析，这个过程易受主观和客观因素的干扰，稳定性和可重复性相对较差，实际应用效果不佳。
6、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，snp)法是目前公认的种质资源鉴定最有效、可靠的方法之一，理论上适用于所有作物的精准鉴定。然而，这种方法在香蕉研究中的应用例子还很少。主要是因为snp法往往需要对不同种质进行大量的基因组测序、比较、分析，才能找到可用于分型的snp位点并验证、应用。然而，目前有关栽培型香蕉的基因组测序不多，已报道的、具有普适性的可用于栽培型香蕉的类型鉴定的分子标记几乎没有。
7、its是一个重要的分子标记，被广泛用于野生生物种质资源的分子系统学研究。有前人报道，利用pcr扩增its序列并sanger测序，根据序列比对和聚类可以对芭蕉科内不同的香蕉野生资源进行遗传进化分析(卢燕，中国香蕉品种的基因组型鉴定及芭蕉科分子系统学研究，中山大学，硕士论文，2007)。然而，这种方法只适用于遗传背景纯合的野生香蕉资源，不适用于遗传背景高度杂合的栽培型香蕉。这是因为栽培型香蕉不仅含有来源不同的a、b基因组，而且在长期的无性繁殖过程中积累了大量的体细胞变异。例如，与野生蕉不同(sanger测序峰图如图1所示)，对于遗传背景高度杂合的香蕉栽培品种，用传统的pcr联合sanger测序的方法得到的its序列往往为非单一序列(sanger测序峰图如图2所示)，而是多条不同its序列的集合，较难用于精准的比较和分析。栽培型香蕉its序列高度杂合的特点意味着可以通过这些不同的its序列来分型。然而，使用常规的二代测序法，由于单个种质里的多条its序列相似但又略有不同，往往无法准确地拼接出每一条原始的完整序列。
技术实现思路
1、本专利技术第一方面的目的，在于提供一种用于香蕉种质资源分子鉴定的数据库。
2、本专利技术第二方面的目的，在于提供本专利技术第一个方面数据库的构建方法。
3、本专利技术第三方面的目的，在于提供检测香蕉序列的物质在香蕉种质资源分子鉴定中的应用。
4、本专利技术第四方面的目的，在于提供一种试剂盒。
5、本专利技术第五方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的数据库和/或本专利技术第四方面的试剂盒的应用。
6、本专利技术第六方面的目的，在于提供一种鉴定或辅助鉴定香蕉品种的方法。
7、为了实现本专利技术上述的目的，本专利技术采取的技术方案是：
8、本专利技术的第一个方面，提供一种用于香蕉种质资源分子鉴定的数据库，所述数据库包括序列seq id no：1～seq id no：55中的至少一种。
9、优选地，所述香蕉包括aa、ab、aaa、a本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于香蕉种质资源分子鉴定的数据库，所述数据库包括序列SEQ ID NO：1～SEQID NO：55中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的数据库，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的数据库，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的数据库，其特征在于：
5.权利要求1或2所述用于香蕉种质资源分子鉴定的数据库的构建方法，包括以下步骤：
6.检测香蕉序列的物质在制备香蕉种质资源鉴定产品中的应用，所述序列包括SEQ IDNO：1～SEQ ID NO：55中的至少一种；
7.一种试剂盒，包括引物对、记载有权利要求1或2所述数据库中信息的对比卡；
8.权利要求1～4任一项所述的数据库、和/或权利要求7所述的试剂盒在鉴定或辅助鉴定香蕉种质资源中的应用。
9.一种鉴定或辅助鉴定香蕉品种的方法，包括使用权利要求1～4任一项所述的数据库、和/或权利要求7所述的试剂盒的步骤。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种用于香蕉种质资源分子鉴定的数据库，所述数据库包括序列seq id no：1～seqid no：55中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的数据库，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的数据库，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的数据库，其特征在于：
5.权利要求1或2所述用于香蕉种质资源分子鉴定的数据库的构建方法，包括以下步骤：
6.检测香蕉序列的物质在制备香蕉种质资源鉴定产品中的应用，所述序列包括s...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾鸿运，吴元立，黄秉智，
申请(专利权)人：广东省农业科学院果树研究所，
类型：发明
国别省市：
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