【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程的，尤其涉及一种翻译调控元件、表达载体、药物组合物、疫苗组合物、构建方法、表达目的蛋白的方法及应用。
技术介绍
1、信使核糖核酸(mrna)指的是以dna的一条链作为模板转录而来的一类单链核糖核酸，是真核细胞中遗传信息从dna至核糖体传递的媒介，其所携带遗传信息作为蛋白质生物合成的直接模版，决定基因表达蛋白产物的氨基酸序列。mrna疗法是利用体外合成的mrna可做作为信息载体指导体细胞蛋白合成，来调控基因表达，进而影响细胞功能和疾病进程，实现治疗效果。
2、真核细胞中的翻译过程需要通过mrna的5'端帽结构与核糖体的结合来启动翻译；因此，需要在体外合成rna的过程进行修饰引入5'端帽结构。而帽结构的引入增加了rna制备的复杂性和成本；并且，细胞内转录因子、rna结合蛋白等调控因素如可能影响帽结构的功能，从而影响基因表达的调控；同时，帽结构可能会受到细胞内某些调控机制的影响，使得在某些情况下翻译效率不稳定；此外，帽结构通常会限制翻译的起始位置，使得翻译只能从rna的5'端开始，有可能会对翻译的准确性造成较大的不利影响，进而影响治疗的效果。传统mrna基因表达疗法在稳定性、特异性和有效性等方面仍面临着较大的挑战。因此，寻找替代5'端帽结构的翻译调控元件，如ires序列等，可以帮助克服上述问题，提高基因表达的效率和稳定性，为基因疗法和蛋白表达领域的研究和应用带来新的机遇。
3、ires序列指的是一非翻译区(utr)核苷酸序列，其具有帽结构非依赖性翻译起始能力，能够借助反式作用因子将核糖体募
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于解决现有ires序列作为翻译调控元件应用于基因表达调控中所存在的问题，而提供了一种翻译调控元件，该翻译调控元件所包括的重组ires序列具有高翻译效率，能够很好地实现目的基因的高水平表达。
2、本专利技术的第二目的在于提供一种表达载体。
3、本专利技术的第三目的在于提供以上表达载体的构建方法。
4、本专利技术的第四目的在于提供一种药物组合物、
5、本专利技术的第五目的在于提供一种疫苗组合物。
6、本专利技术的第六目的在于提供以上所述的翻译调控元件、表达载体、药物组合物和/或疫苗组合物在调控细胞目的基因表达上的应用。
7、具体的，本专利技术提供的翻译调控元件包括核苷酸序列如seq id no:8～11所示的重组ires序列中的一段或多段；和/或，所述翻译调控元件包括与如seq id no:8～11所示序列互补的重组ires序列中的一段或多段。
8、在一些具体的实施方式中，所述重组ires序列是通过取cvb3 ires序列进行dna改组获得的；所述cvb3 ires序列包括如seq id no:1所示的核苷酸片段或与如seq id no:1所示序列互补的核苷酸片段。
9、在一些具体的实施方式中，所述dna改组具体包括：取脱氧核糖核酸酶对所述cvb3ires序列进行随机碎片化，得到碎片化产物；取所述碎片化产物进行无引物pcr，得到无引物pcr产物；取所述无引物pcr产物进行有引物pcr，得到所述有引物pcr。
10、在一些具体的实施方式中，所述有引物pcr的引物体系包括核苷酸序列如seq idno:2所示的引物750-ires-f和/或如seq id no:3所示的引物750-ires-r。
11、本专利技术提供的表达载体包括以上所述的翻译调控元件。
12、在一些具体的实施方式中，所述表达载体包括目的蛋白编码区。
13、在一些具体的实施方式中，所述表达载体为线性的或环状的。
14、在一些具体的实施方式中，所述表达载体为dna或rna。
15、在一些具体的实施方式中，所述表达载体为circrna。
16、在一些具体的实施方式中，所述表达载体为线性mrna。
17、本专利技术提供的以上表达载体的构建方法包括：该构建方法包括：取所述翻译调控元件与质粒进行吉布森组装，获得所述表达载体。
18、本专利技术提供的药物组合物包括以上所述的表达载体。
19、本专利技术提供的疫苗组合物包括以上所述的表达载体。
20、本专利技术提供的表达目的蛋白的方法包括：取以上所述的表达载体导入宿主细胞进行目的蛋白的表达。
21、本专利技术提供了以上所述的翻译调控元件、表达载体、药物组合物和/或疫苗组合物在调控细胞目的基因表达上的应用。
22、有益效果：
23、本专利技术提供的翻译调控元件包含特定重组ires序列，其应用于基因表达调控中时表现出高翻译效率，可实现目的基因的高水平表达。推测其具有高翻译效率的原因为：包括序列如seq id no:8～11所示的核苷酸片段或与seq id no:8～11所示序列互补的核苷酸片段的重组ires序列结构化和紧密程度高，相较于原始cvb3 ires序列，其对于ires反式作用因子和翻译启示因子的以来程度低，能够更好地与核糖体结合，实现翻译的启动，从而表现出更高的翻译效率。
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1.一种翻译调控元件，其特征在于，所述翻译调控元件包括核苷酸序列如SEQ ID NO:8～11所示的重组IRES序列中的一段或多段；
2.根据权利要求1所述的翻译调控元件，其特征在于，所述重组IRES序列是通过取CVB3IRES序列进行DNA改组获得的；所述CVB3 IRES序列包括如SEQ ID NO:1所示的核苷酸片段或与如SEQ ID NO:1所示序列互补的核苷酸片段。
3.根据权利要求2所述的翻译调控元件，其特征在于，所述DNA改组具体包括：取脱氧核糖核酸酶对所述CVB3 IRES序列进行随机碎片化，得到碎片化产物；取所述碎片化产物进行无引物PCR，得到无引物PCR产物；取所述无引物PCR产物进行有引物PCR，得到所述有引物PCR；
4.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求1～3任一所述的翻译调控元件。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括目的蛋白编码区；
6.权利要求4或5所述的表达载体的构建方法，其特征在于，该构建方法包括：取所述翻译调控元件与质粒进行吉布森组装，获得所述表达载体。
7.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求5所述的表达载体。
8.一种疫苗组合物，其特征在于，包括权利要求5所述的表达载体。
9.一种表达目的蛋白的方法，其特征在于，该方法包括：取权利要求5所述的表达载体导入宿主细胞进行目的蛋白的表达。
10.权利要求1～3任一所述的翻译调控元件、权利要求4或5所述的表达载体、权利要求7所述的药物组合物和/或权利要求8所述的疫苗组合物在调控细胞目的基因表达上的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种翻译调控元件，其特征在于，所述翻译调控元件包括核苷酸序列如seq id no:8～11所示的重组ires序列中的一段或多段；
2.根据权利要求1所述的翻译调控元件，其特征在于，所述重组ires序列是通过取cvb3ires序列进行dna改组获得的；所述cvb3 ires序列包括如seq id no:1所示的核苷酸片段或与如seq id no:1所示序列互补的核苷酸片段。
3.根据权利要求2所述的翻译调控元件，其特征在于，所述dna改组具体包括：取脱氧核糖核酸酶对所述cvb3 ires序列进行随机碎片化，得到碎片化产物；取所述碎片化产物进行无引物pcr，得到无引物pcr产物；取所述无引物pcr产物进行有引物pcr，得到所述有引物pcr；
4.一种表达载体，其特征在于，包括权利...
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