【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及再生医学，具体为间充质干细胞外泌体、prp及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用。
技术介绍
1、脱发是许多人都面临的普遍问题。脱发问题可能由多种因素引起，包括遗传因素、荷尔蒙失衡、营养不良、压力、健康问题等，这些因素可能导致头皮毛囊受损，从而影响头发的生长周期和质量。
2、间充质干细胞外泌体、prp(富血小板血浆)和毛囊干细胞是近年来在脱发治疗中引起关注的方法，间充质干细胞外泌体是一种细胞产物，据说可以刺激毛囊的生长和再生，prp是一种从自体血液中提取的血小板富集物，被认为可以促进头发生长和减缓脱发，毛囊干细胞可以移植到头皮上，以帮助恢复受损的毛囊。
3、目前同类方法应用成分比较单一，基本上都是单一使用毛囊干细胞，prp或者外泌体，防止脱发促进头发再生效果不理想，为此提出间充质干细胞外泌体、prp及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供间充质干细胞外泌体、prp及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：包括以下步骤：
3、步骤一、外泌体制备：取间充质干细胞培养液，经200-300xg离心10分钟，弃掉沉淀，取上清3000xg离心10分钟，弃去沉淀，上清液再次以10000xg离心30分钟，取上清液，经30kd-100kd超滤浓缩30-50倍，即为外泌体液，经0.22微米过滤除菌，备用；
4、步骤二、
5、步骤三、毛囊干细胞培养：无菌套取单株毛发，取毛囊球部，放入二氧化碳培养箱贴壁培养毛囊干细胞，经过3次传代培养，细胞达到一定数量，经酶消化制备细胞悬液，备用；
6、步骤四、将无菌收集到的毛囊干细胞与外泌体及prp按需要混合，导入真皮层。
7、优选的，步骤三中，提取毛囊球部后用含1000u/ml青链霉素的生理盐水洗涤两次，转入96孔培养板中，加入100ul/孔的原代细胞培养液，再放入二氧化碳培养箱进行培养。
8、优选的，在放入二氧化碳培养箱进行培养时，每3天进行半量换液，待细胞长到80—90％密度时，用蛋白酶消化并进行传代扩大培养。
9、优选的，在得出细胞悬液后，用cd200、k19作为阳性标记物，cd34、nestin为阴性标记物进行细胞检测。
10、优选的，在无菌套取单株毛囊时，用中性蛋白酶消化，制备单个细胞。
11、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
12、本专利技术通过毛囊干细胞、prp及间充质干细胞外泌体联合，能有效刺激提高毛囊干细胞的活性及分化能力，对于抑制脱发、促进头发再生具有显著效果。
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1.间充质干细胞外泌体、PRP及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体、PRP及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，其特征在于：步骤三中，提取毛囊球部后用含1000u/ml青链霉素的生理盐水洗涤两次，转入96孔培养板中，加入100ul/孔的原代细胞培养液，再放入二氧化碳培养箱进行培养。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞外泌体、PRP及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，其特征在于：在放入二氧化碳培养箱进行培养时，每3天进行半量换液，待细胞长到80—90％密度时，用蛋白酶消化并进行传代扩大培养。
4.根据权利要求3所述的间充质干细胞外泌体、PRP及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，其特征在于：在得出细胞悬液后，用CD200、K19作为阳性标记物，CD34、nestin为阴性标记物进行细胞检测。
5.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体、PRP及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，其特征在于：在无菌套取单株毛囊时，用中性蛋白酶消化，制备单个细胞。
【技术特征摘要】
1.间充质干细胞外泌体、prp及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体、prp及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，其特征在于：步骤三中，提取毛囊球部后用含1000u/ml青链霉素的生理盐水洗涤两次，转入96孔培养板中，加入100ul/孔的原代细胞培养液，再放入二氧化碳培养箱进行培养。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞外泌体、prp及毛囊干细胞在生发防脱上的联合应用，其特征在于：在放入二氧化碳培...
【专利技术属性】
技术研发人员：范国才，黄斌，
申请(专利权)人：海南科颜纳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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