【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人类遗传学的领域，更具体地，涉及神经肌肉病症(disorder)。具体地，本专利技术涉及具有增强如本文进一步限定的临床适用性的改善的特性的寡核苷酸的应用。
技术介绍
1、神经肌肉疾病的特征是由于肌肉或神经病理学(肌肉疾病(myopathy)和神经病变(neuropathy))导致的受损的肌肉机能(functioning)。肌肉疾病包含特征是骨骼、心脏和/或平滑肌的渐进无力和变性(退化，degeneration)的遗传性肌营养不良症(肌肉萎缩症，muscular dystrophy)。杜兴型肌营养不良(dmd)和贝克型肌营养不良(bmd)是肌营养不良的最常见的儿童形式。dmd是严重的、致命的神经肌肉病症，导致在12岁的年龄之前依赖于轮椅支撑，并且由于呼吸衰竭或心脏衰竭，患者经常在十三岁的年龄之前死亡。其由导致缺乏功能性肌养蛋白(dystrophin)的阅读框-移码缺失(删除，deletion)(～67％)或一个或更多个外显子的重复(～7％)或由2.24mb dmd基因中的点突变(～25％)引起。bmd也是由dmd基因中的突变引起的，但是这些保持开放阅读框，产生半功能性(semi-functional)的肌养蛋白，并且导致典型地更加温和的显型和更长的寿命。在过去十年期间，出现了为了修复被破坏的转录本的阅读框的剪接的特异性修饰作为用于dmd的有希望的治疗(van ommen等人，2008；yokota等人，2007；van deutekom等人，2007；goemans等人，2011；cirak等人，2011)。用结合至
2、因为大多数突变簇在外显子45至55附近，一个具体的外显子的跳读可以是具有不同的突变的很多患者的治疗剂。外显子51的跳读适用于最大的患者子集(～13％)，包括具有外显子45至50、48至50、50或52的缺失的那些。所使用的aon被化学地修饰以抵抗核酸内切酶、核酸外切酶和rna酶h(rnaseh)并促进rna结合和双链稳定性。目前正在开发用于dmd中的外显子51跳读的两种不同的aon化学品：2’-o-甲基硫代磷酸酯rna aon(2’-o-methylphosphorothioate rna aons)(2omeps，gsk2402968/pro051)和磷酰二胺吗啉代寡聚物(phosphorodiamidate morpholino oligomers)(pmo，avi-4658)(goemans等人,2011；cirak等人,2011)。在两个独立的i期/ii期研究中，显示两者均特异性地诱导外显子51跳读并且在全身给予之后至少部分地修复肌纤维细胞膜上的肌养蛋白表达。尽管典型地，健康的肌纤维不能很好的吸收aon，但dmd中的肌养蛋白缺乏、导致受损伤的并因此更加可渗透的纤维细胞膜，这事实上促进了摄取。在肌养蛋白缺陷型mdx小鼠模型的研究中，当与野生型小鼠中的摄取相比较时，证明了2’-o-甲基硫代磷酸酯rna寡核苷酸在不同的肌肉群组中最高达10倍的更高的摄取(heemskerk等人,2010)。尽管在dmd患者中，具有2’-o-甲基硫代磷酸酯rna和磷酰二胺吗啉代aon的近期i/ii期结果证实营养不良的肌肉中的这种增强的摄取，但是不同的化学修饰似乎导致通过肌肉的差别的摄取和分布。在处理3月之后，在两个研究中的新的肌养蛋白的水平是有希望的，但是，仍然是温和的和挑战研究下一代寡核苷酸化学的领域。
3、选择的化学品的具体的特征至少部分影响aon至靶标转录本的递送：给予途径、生物稳定性、生物分布、组织内分布以及细胞摄取和运输。此外，构思寡核苷酸化学的进一步的优化以增强结合亲和力和稳定性、增强活性、改进安全性和/或通过减少长度或改进合成和/或纯化程序减少成本。对于研究群体，多种化学修饰已经普遍和/或商业可获得(如2’-o-甲基rna和5-取代的嘧啶以及2,6-二氨基嘌呤)，然而，大部分其他的仍然重要的合成努力来获得。已经用含有在此处所确认的嘧啶和嘌呤碱基上的修饰的2’-o-甲基硫代磷酸酯rna获得了特别预备的鼓舞人心的结果。
4、总之，为了增强用于dmd的aon的治疗适用性，需要具有改善的特性的aon。
技术实现思路
1、寡核苷酸
2、在第一方面中，本专利技术提供包含2’-o-甲基rna单体和硫代磷酸酯骨架或由通过硫代磷酸酯骨架连接的2’-o-甲基rna单体组成、且包含5-甲基嘧啶和/或2,6-二氨基嘌呤碱基的、优选地用作用于治疗杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的药物的寡核苷酸。
3、因此，本专利技术提供包含2’-o-甲基rna单体、硫代磷酸酯骨架和5-甲基嘧啶和/或2,6-二氨基嘌呤碱基的、优选地用作用于治疗杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的药物的寡核苷酸。
4、因此，本专利技术也提供由2’-o-甲基rna单体和硫代磷酸酯骨架组成的并且包含5-甲基嘧啶和/或2,6-二氨基嘌呤碱基的、优选地用作用于治疗杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的药物的寡核苷酸。
5、对于技术人员清楚的是在本专利技术的寡核苷酸中出现的“rna单体”也可以被认为是“rna核苷酸残基”。在整个本申请中可交换地使用两个术语。
6、在本专利技术的背景中，每一个下列表达中的“一个(a)”意味着“至少一个”：一个2’-o-甲基rna单体、一个2’-o-甲基rna核苷酸残基、一个2’-o-甲基硫代磷酸酯rna单体、一个5-甲基嘧啶碱基、一个2,6-二氨基嘌呤碱基。
7、在本专利技术的背景中，对于技术人员清楚的是，“包含2’-o-甲基rna单体、硫代磷酸酯骨架的寡核苷酸”可以被“包含由硫代磷酸酯骨架连接的2’-o-甲基rna单体的寡核苷酸”代替。同样适用的是“由2’-o-甲基rna单体和硫代磷酸酯骨架组成的寡核苷酸”可以被“由硫代磷酸酯骨架连接的2’-o-甲基rna单体的寡核苷酸”代替。
8、在本专利技术的背景中，表述”用作用于治疗杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的药物”可被表述”用于杜兴型肌营养不良或贝克型肌营养不良的治疗”取代。...
【技术保护点】
1.一种寡核苷酸，由2’-O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架组成，并且其中，所述寡核苷酸的所有胞嘧啶碱基由5-甲基胞嘧啶碱基组成，用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症，并且其中，所述寡核苷酸由以下各项中的任一项的碱基序列组成：
2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中，与包含2’-O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架而不具有5-甲基胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶以及2,6-二氨基嘌呤的相应的寡核苷酸相比，所述寡核苷酸具有改善的参数，其中所述改善的参数是：结合亲和力、动力学、外显子跳读活性、生物稳定性、组织内分布、细胞摄取、运输和/或免疫原性。
3.一种组合物，包含在权利要求1或2中限定的寡核苷酸。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，它包含至少一种赋形剂，所述赋形剂可以进一步辅助增强所述组合物和/或所述寡核苷酸靶向组织和/或细胞和/或递送进入组织内和/或细胞内。
5.权利要求1或2中限定的寡核苷酸或权利要求3或4中限定的组合物在制备在需要其的受试者中用于预防、治疗和/或延迟杜兴型肌营养不良症或贝克型肌营养不良症的药物中的应用。>
6.一种寡核苷酸，由2’-O-甲基RNA单体和硫代磷酸酯骨架组成，并且其中，所述寡核苷酸的所有腺嘌呤碱基由2,6-二氨基嘌呤组成，用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症，并且其中，所述寡核苷酸由以下各项中的任一项的碱基序列组成：
7.一种组合物，包含在权利要求6中限定的寡核苷酸。
8.根据权利要求7所述的组合物，其中，它包含至少一种赋形剂，所述赋形剂可以进一步辅助增强所述组合物和/或所述寡核苷酸靶向组织和/或细胞和/或递送进入组织内和/或细胞内。
9.权利要求6中限定的寡核苷酸或权利要求7或8中限定的组合物在制备在需要其的受试者中用于预防、治疗和/或延迟杜兴型肌营养不良症或贝克型肌营养不良症的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种寡核苷酸，由2’-o-甲基rna单体和硫代磷酸酯骨架组成，并且其中，所述寡核苷酸的所有胞嘧啶碱基由5-甲基胞嘧啶碱基组成，用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症，并且其中，所述寡核苷酸由以下各项中的任一项的碱基序列组成：
2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中，与包含2’-o-甲基rna单体和硫代磷酸酯骨架而不具有5-甲基胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶以及2,6-二氨基嘌呤的相应的寡核苷酸相比，所述寡核苷酸具有改善的参数，其中所述改善的参数是：结合亲和力、动力学、外显子跳读活性、生物稳定性、组织内分布、细胞摄取、运输和/或免疫原性。
3.一种组合物，包含在权利要求1或2中限定的寡核苷酸。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，它包含至少一种赋形剂，所述赋形剂可以进一步辅助增强所述组合物和/或所述寡核苷酸靶向组织和/或细胞和/或递送进入组织内和/或细胞内。
5.权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：彼得·克里斯蒂安·德菲瑟，朱迪思·克里斯蒂娜·西奥多拉·范多伊特科姆，
申请(专利权)人：比奥马林技术公司，
类型：发明
国别省市：
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