【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及雌激素、抗生素的生物降解及环境污染物处理技术，尤其是一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株及筛选方法和应用。
技术介绍
1、以17β雌二醇(e2)为代表的内分泌干扰物是国际上关注的新污染物之一，具有极强的环境毒性。水体中极低浓度(1ng l-1)的e2就会影响水生生物的正常内分泌代谢，促进雄鱼雌化，并可造成两性繁殖不同步，孵化率降低、存活率降低等一系列问题。huang等调查了雌激素对水生环境中的野生蚊鱼的雄激素效应，发现雌激素使野生蚊鱼雄性睾丸畸形率增加。畜禽养殖废水是雌激素进入环境的主要来源。研究表明，妊娠母猪的雌激素排泄量每头每天最高可达17300μg，主要通过尿液(98％～99％)排出，泌乳奶牛每头每天最高可达7300μg，主要通过粪便(92％)排出。在我国，每年由畜禽粪污产生的e2排放量超过21900kg，占全年排放总量的94％以上。因此，养殖废水中e2的消减问题迫在眉睫。
2、与传统的物理、化学修复相比，微生物修复具有绿色、高效、低碳等一系列优点。目前，发现的e2高效降解菌包括睾丸酮丛毛单胞菌(comamonas testosteroni)、戈登氏菌(gordonia)、不动杆菌(acinetobacter)、新鞘脂菌(novosphingobium)、变色栓菌(trametes versicolor)和黄孢原毛平革菌(phanerochaete chrysosporium)等，它们普遍能够在好氧条件下在24-120小时内降解90％以上的e2。不过，在实际畜禽废水中通常还存在高盐、重金
3、经检索，中国专利公开号：cn104894012a，公开了一株17β-雌二醇降解菌株及其应用，一株红球菌jx-2，2014年9月4日保藏于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为cgmcc no.9636。一种用红球菌jx-2所生产的固定化17-β雌二醇降解菌剂，通过将该jx-2菌悬液与海藻酸钠溶液混合均匀，以cacl2溶液为交联剂，交联5.5-6.5h，得到直径约为3-5mm固定化小球。本专利技术筛选获得红球菌jx-2在实验室摇瓶培养条件下对17β-雌二醇降解率可达90％以上。固定化菌剂直接施用于17β-雌二醇污染的水体以及畜禽粪便中，能够在短时间内使其中的17β-雌二醇残留降低60％以上。
4、该专利描述的环境修复菌剂具有生产成本低，使用方便，去除效果好的优点，适合治理水体环境以及畜禽粪便中17b-雌二醇造成的雌激素污染，但对于抗生素，特别是四环素的降解能力未显现出显著作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种17β雌二醇-四环素双重降解菌株的筛选方法及应用。
2、本专利技术解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：
3、一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株，菌株名称为：aepi-s25，分类命名为：嗜盐嗜碱菌(alkalibacterium sp.)，保藏编号为：cgmcc no.30529，保藏日期为：2024年05月08日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4、优选地，在固体培养基上，所述菌株为落灰白色、半透明、略凸起；在显微镜下，所述菌株呈杆状，为单个或成对排列的短杆菌。
5、优选地，所述菌株在nacl浓度为40g l-1、温度为30℃、ph为9的条件下对17β雌二醇和四环素的降解速率达到90％。
6、提供一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株的筛选方法，包括如下步骤：
7、s1、17β雌二醇、四环素类抗生素双重降解菌的分离、纯化：样品采集于青海湖底泥，置于碱性高盐lb(hlb)培养基50ml中，30℃、180rpm摇床恒温避光培养7天，利用hlb进行培养，同时以5mg l-1的浓度加入17β雌二醇与四环素，转接同时提高e2和tc浓度；在培养完成后，梯度稀释培养液涂布于具有17β雌二醇和四环素的hlb平板，于30℃培养直至菌落长出；
8、s2、潜在降解菌的筛选：将分离纯化获得的单一菌株接种到含17β雌二醇和四环素的培养基中进行降解实验筛选，获得具有同时降解17β雌二醇、四环素能力的菌株，经形态学和16s rrna基因鉴定为嗜盐嗜碱菌。
9、提供一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株在降解17β雌二醇和四环素中的应用。
10、提供一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株降解17β雌二醇、四环素的方法，包括：
11、将aepi-s25菌株进行活化，在恒温摇床中培养获得种子液，将种子液接种至ph为8-10的含17β雌二醇、四环素的培养基中进行培养，培养温度为30℃，完成17β雌二醇、四环素的快速降解。
12、提供一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株在作为制备降解17β雌二醇、四环素菌剂方面中的应用。
13、提供一种17β雌二醇和四环素双重降解菌剂的制备方法包括如下步骤：
14、将aepi-s25菌株接种于液体培养基中，该液体培养基为含有胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠40g，初始ph＝9，25℃-30℃条件下，180rpm摇床中培养48h后收集培养液，得到17β雌二醇、四环素双重降解菌剂。
15、本专利技术的优点和积极效果是：
16、1、本专利技术样品采集于青海省青海湖底泥中，通过富集驯化、分离筛选得到一种具有17β雌二醇和四环素双重降解效力的菌株，该菌株经16s rdna测序鉴定为嗜盐嗜碱菌(alkalibacterium sp.)，该菌株名称为：aepi-s25，该菌株具有双重降解17β雌二醇、四环素的功能，本专利技术为17β雌二醇、四环素双重高效降解菌的应用提供了基础，有利于丰富17β雌二醇、四环素降解菌的菌种资源库，为17β雌二醇、四环素污染的治理提供了有效的生物降解方法。
17、2、本专利技术中所使用的菌株在降解17β雌二醇和四环素时，通过调节ph和nacl浓度对其培养基进行优化，优化后，5天内双重降解效率均可达90％以上。该菌株可应用在制备双重降解17β雌二醇和四环素菌剂中，有利于丰富17β雌二醇和四环素降解菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株，其特征在于：菌株名称为：AEPI-S25，分类命名为：嗜盐嗜碱菌(Alkalibacterium sp.)，保藏编号为：CGMCC No.30529，保藏日期为：2024年05月08日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株，其特征在于：在固体培养基上，所述菌株为落灰白色、半透明、略凸起；在显微镜下，所述菌株呈杆状，为单个或成对排列的短杆菌。
3.根据权利要求1所述的一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株，其特征在于：所述菌株在NaCl浓度为40g L-1、温度为30℃、pH为9的条件下对17β雌二醇和四环素的降解速率达到90％。
4.一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：
5.权利要求1-3任一项所述的一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株在降解17β雌二醇和四环素中的应用。
6.权利要求1-3任一项所述的一种17β雌二醇和
7.权利要求1-3任一项所述的一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株在作为制备降解17β雌二醇、四环素菌剂方面中的应用。
8.权利要求1-3任一项所述的一种17β雌二醇和四环素双重降解菌剂的制备方法包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株，其特征在于：菌株名称为：aepi-s25，分类命名为：嗜盐嗜碱菌(alkalibacterium sp.)，保藏编号为：cgmcc no.30529，保藏日期为：2024年05月08日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株，其特征在于：在固体培养基上，所述菌株为落灰白色、半透明、略凸起；在显微镜下，所述菌株呈杆状，为单个或成对排列的短杆菌。
3.根据权利要求1所述的一种17β雌二醇和四环素双重降解菌株，其特征在于：所述菌株在nacl浓度为40g l...
【专利技术属性】
技术研发人员：白默涵，李文辛，王雅琼，叶会科，杨硕，李盼，王亚萍，孙扬，赵丽霞，李晓晶，
申请(专利权)人：农业农村部环境保护科研监测所，
类型：发明
国别省市：
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