【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于合成生物学。具体涉及一种新的具有增发护法作用的重组人xvii型胶原蛋白、其制备方法及应用。
技术介绍
1、胶原蛋白是人体主要的细胞外基质，约占细胞外基质的85％，是人体组织器官的主要结构蛋白，约占人体蛋白质总量的30％一40％，常见于皮肤、血管、肌腱、筋膜等部位，发挥多种重要的生物学功能。
2、重组胶原蛋白是以生物体内胶原蛋白的氨基酸序列为模板，对其进行设计后借助合成生物学技术转入到以大肠杆菌、毕赤酵母菌为主的工程细胞内，并利用工程细胞的快速生产能力制备获得的胶原蛋白。与动物源胶原蛋白相比，重组胶原蛋白的优势明显。比如重组胶原蛋白分子单一，成分明确，可以获得高纯度产品；它无病毒隐患、细胞毒性低，而且具有极低的免疫原性，导致过敏、炎症、发热等问题的可能性小；它具有水溶性和乳化等特性，可加工性强，无需冷链运输，易储存，生产制备过程绿色环保。
3、ⅹⅶ型(col17a1基因编码)胶原蛋白是一种跨膜型非成纤维胶原蛋白，其为三条相同α1(ⅹⅶ)链构成的均相三聚体，分为胞内、跨膜、胞外三大类结构域。col17a1蛋白是细胞中半桥粒的一种组成成分，在上皮细胞-基底膜的作用中发挥重要作用，可调控上皮细胞的黏附、分离和发育分化，对毛囊细胞的分化和再生有重要作用。
4、人xvii型胶原蛋白是由三条相同的α1(ⅹⅶ)链构成的一种跨膜型非成纤维胶原蛋白，分为胞内、跨膜、胞外三大类结构域。相关研究表明xvii型胶原蛋白与毛囊干细胞和皮肤干细胞关系密切，是一种重要的细胞质基质，能调控毛囊干细胞和皮肤干细胞发
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，提供一种由来自人xvii型胶原蛋白非胶原域的独立区域组合形成的、具有较强增发护发相关活性的重组人xvii型胶原蛋白。
2、专利技术人经深入研究发现，通过将来自人xvii型胶原蛋白非胶原域的、彼此不相连的独立区域以特定方式进行组合拼接，能够获得具有较强增发护发相关活性(例如促进毛乳头细胞增殖的活性、促进毛发增长的活性)的重组人xvii型胶原蛋白。
3、即，本专利技术包括：
4、1.一种具有增发护发作用的重组人xvii型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1所示。
5、2.编码项1所述的重组人xvii型胶原蛋白的核酸。
6、3.包含项2所述的核酸的表达载体。
7、4.导入了项3所述的表达载体的宿主细胞。所述宿主细胞可以为真核或原核细胞。例如，所述宿主细胞可以是大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等细菌宿主，也可以是毕赤酵母、酿酒酵母、动物细胞、植物细胞等真核宿主，优选为毕赤酵母或大肠杆菌，更优选为毕赤酵母。
8、5.项1中所述的重组人xvii型胶原蛋白的生产方法，其包括：培养项4所述的宿主细胞，使其表达项1中所述的重组人xvii型胶原蛋白，并进行蛋白纯化。优选对所述宿主细胞进行诱导(例如甲醇诱导)，使其分泌表达所述重组人xvii型胶原蛋白。
9、6.根据项5中所述的生产方法，其中，所述蛋白纯化采用选自疏水层析、盐析、色谱层析、离子交换层析、亲和层析、酸碱沉淀、膜分离中的纯化方法或上述纯化方法的组合。
10、为方便纯化、识别、定量等，在不影响胶原蛋白结构的前提下可添加标签、小分子肽，如：his标签、flag标签、c-myc等。
11、7.包含项1所述的重组人xvii型胶原蛋白的药物、生物材料、医疗器械、护肤品、化妆品或保健食品。优选所述护肤品、化妆品被制成适合施用于头皮的形式，例如洗发液、洗发膏、护发素。
12、8.项1所述的重组人xvii型胶原蛋白在制备用于增发的外用药或化妆品中的用途。优选所述外用药、化妆品被制成适合施用于头皮的形式。
13、专利技术有益效果
14、(1)本专利技术的重组人xvii型胶原蛋白由非胶原域的片段拼接组合而成，其具有较强的增发护发相关活性，其活性不但使各种拼接组合方式中最强的，甚至还强于临床常用药米诺地尔。
15、(2)本专利技术的重组人xvii型胶原蛋白的构成元件来自非胶原域，将其应用于人体不会造成过敏和免疫排斥反应，同时具有较高的生物活性，具有促进细胞增殖、迁移和细胞粘附的功能，可广泛应用于药物、生物材料、医疗器械、护肤品或保健食品等领域。
16、(3)本专利技术的重组人xvii型胶原蛋白的发酵纯化工艺条件成熟，已具备扩大生产的条件，可大规模工业化生产。
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1.一种具有增发护发作用的重组人XVII型胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.编码权利要求1所述的重组人XVII型胶原蛋白的核酸。
3.包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4.导入了权利要求3所述的表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞可以为真核或原核细胞，优选为毕赤酵母或大肠杆菌，更优选为毕赤酵母。
5.权利要求1中所述的重组人XVII型胶原蛋白的生产方法，其包括：培养权利要求4所述的宿主细胞，使其表达权利要求1中所述的重组人XVII型胶原蛋白，并进行蛋白纯化，优选对所述宿主细胞进行诱导(例如甲醇诱导)，使其分泌表达所述重组人XVII型胶原蛋白。
6.根据权利要求5中所述的生产方法，其中，所述蛋白纯化采用选自疏水层析、盐析、色谱层析、离子交换层析、亲和层析、酸碱沉淀、膜分离中的纯化方法或上述纯化方法的组合。
7.包含权利要求1所述的重组人XVII型胶原蛋白的药物、生物材料、医疗器械、护肤品、化妆品或保健食品，优选所述护肤品、化妆品被制成适合施用于头皮的形式，例如洗发液、洗发膏、护发素。p>
8.权利要求1所述的重组人XVII型胶原蛋白在制备用于增发的外用药或化妆品中的用途，优选所述外用药、化妆品被制成适合施用于头皮的形式。
...【技术特征摘要】
1.一种具有增发护发作用的重组人xvii型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1所示。
2.编码权利要求1所述的重组人xvii型胶原蛋白的核酸。
3.包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4.导入了权利要求3所述的表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞可以为真核或原核细胞，优选为毕赤酵母或大肠杆菌，更优选为毕赤酵母。
5.权利要求1中所述的重组人xvii型胶原蛋白的生产方法，其包括：培养权利要求4所述的宿主细胞，使其表达权利要求1中所述的重组人xvii型胶原蛋白，并进行蛋白纯化，优选对所述宿主细胞进行诱导(例如甲醇...
【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，梅莎，段志广，刘琳，严钰博，
申请(专利权)人：西安巨子生物基因技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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