【技术实现步骤摘要】
技术介绍
0、专利技术背景
1、嵌合抗原受体(car)可以使免疫细胞重新定向以特异性识别并杀伤肿瘤细胞。car是人工多分子蛋白，由通过跨膜结构域与信号传导分子连接的抗体单链可变区(scfv)构成。当scfv连接其同源抗原时，触发信号转导，导致表达car的细胞毒性t淋巴细胞杀伤肿瘤细胞(eshhar z、waks t等，pnas usa.90(2):720-724,1993；geiger tl等，j immunol.162(10):5931-5939,1999；brentjens rj等，nat med.9(3):279-286,2003；cooper lj等，blood 101(4):1637-1644,2003；imai c等，leukemia.18:676-684,2004)。用表达car的自体t淋巴细胞进行的临床试验已经证实在患有b细胞难治性白血病和淋巴瘤的患者中有阳性反应(参见例如，till bg等，blood 119(17):3940-3950,2012；maude sl等，n engl jmed.371(16):1507-1517,2014)。
2、靶向t细胞恶性肿瘤的car技术的发展远远落后于其b细胞对应物的发展。需要针对t细胞恶性肿瘤的新型疗法，但迄今为止进展缓慢。具体而言，缺乏有效的免疫治疗选择，并且t细胞急性淋巴细胞性白血病(t-all)的治疗依赖于强化化疗和造血干细胞移植。尽管这些方法的发病率和死亡率改善，但结果远不能令人满意。
3、总之，对于患有t细胞恶性肿瘤的患者而
技术实现思路
1、一方面，本专利技术提供了一种工程化免疫细胞，其包含：(i)包含编码与定位结构域连接的靶结合分子的核苷酸序列的核酸，其中所述靶结合分子是与cd7特异性结合的第一抗体；和(ii)包含编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列的核酸，其中所述car包含4-1bb胞内信号传导结构域、cd3ζ胞内信号传导结构域和与cd7特异性结合的第二抗体。
2、在一些实施方案中，与cd7特异性结合的所述第一抗体是第一单链可变片段(scfv)。在某些实施方案中，与cd7特异性结合的所述第二抗体是第二单链可变片段(scfv)。
3、在一些实施方案中，所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq id no:2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。在其它实施方案中，所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq idno:15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。在某些实施方案中，所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq id no:17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
4、在一些实施方案中，所述定位结构域包含选自下组的氨基酸序列：内质网(er)滞留序列、高尔基体滞留序列、蛋白酶定位序列和源自cd8α、cd8β、4-1bb、cd28、cd34、cd4、fcεriγ、cd16、ox40、cd3ζ、cd3ε、cd3γ、cd3δ、tcrα、cd32、cd64、vegfr2、fas或fgfr2b的跨膜结构域序列。在一些实施方案中，所述定位结构域包含内质网(er)滞留序列，其包含seq idno:8或seq id no:9的氨基酸序列。在其它实施方案中，所述定位结构域包含源自cd8α铰链的跨膜结构域序列和包含seq id no:13的氨基酸序列的跨膜结构域序列。在一些实施方案中，靶结合分子(例如，scfv)的蛋白酶体定位通过将scfv序列连接至含三联基序的蛋白21(trim21)靶向结构域序列并且使编码人trim21 e3泛素连接酶蛋白的核酸序列共表达来实现。
5、在一些实施方案中，所述4-1bb胞内信号传导结构域包含seq id no:3的氨基酸序列并且其中所述cd3ζ胞内信号传导结构域包含seq id no:4的氨基酸序列。
6、在一些实施方案中，所述铰链和跨膜结构域包含seq id no:10的氨基酸序列。
7、在一些实施方案中，所述第二单链可变片段(scfv)包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq id no:2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。在其它实施方案中，所述第二单链可变片段(scfv)包含与seq id no:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq idno:15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。还有其它实施方案中，所述第二单链可变片段(scfv)包含与seq id no:16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq id no:17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
8、在一些实施方案中，所述工程化细胞是工程化t细胞、工程化自然杀伤(nk)细胞、工程化nk/t细胞、工程化单核细胞、工程化巨噬细胞或工程化树突细胞。
9、另一方面，本专利技术提供了一种工程化免疫细胞，其包含(i)与定位结构域连接的靶结合分子，其中所述靶结合分子是与cd7特异性结合的第一抗体；和(ii)嵌合抗原受体(car)，其中所述car包含4-1bb胞内信号传导结构域、cd3ζ胞内信号传导结构域和与cd7特异性结合的第二抗体。
10、在一些实施方案中，与cd7特异性结合的所述第一抗体是第一单链可变片段(scfv)。在某些实施方案中，与cd7特异性结合的所述第二抗体是第二单链可变片段(scfv)。
11、在一些实施方案中，所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq id no:2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。在其它实施方案中，所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq idno:15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。在某些实施方案中，所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq id no:17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
12、在一些实施方案中，所述定位结构域包含选自下组的氨基酸序列：内质网(er)滞留序列、高尔基体滞留序列、蛋白酶定位序列和源自cd8α、cd8β、4-1bb、cd28、cd34、cd4、fcεriγ、cd16、ox40、cd3ζ、cd3ε、cd3γ、cd3δ、tcrα、cd32、cd64、vegfr本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种工程化免疫细胞，其包含：
2.根据权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中与CD7特异性结合的所述第一抗体是第一单链可变片段(scFv)。
3.根据权利要求1或2所述的工程化免疫细胞，其中与CD7特异性结合的所述第二抗体是第二单链可变片段(scFv)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和
7.一种工程化免疫细胞，其包含
8.一种药物组合物，其包含权利要求1至7中任一项所述的工程化免疫细胞和药学上可接受的载体。
9.一种产生权利要求1至8中任一项所述的工程化免疫细胞的方法，所述方法包括：
10.一种治疗有需要的受试者中的癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的工程化免疫细胞，从而治疗有需要的所述受试者中的癌症，
...【技术特征摘要】
1.一种工程化免疫细胞，其包含：
2.根据权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中与cd7特异性结合的所述第一抗体是第一单链可变片段(scfv)。
3.根据权利要求1或2所述的工程化免疫细胞，其中与cd7特异性结合的所述第二抗体是第二单链可变片段(scfv)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与seq id no:2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scfv)包含与seq id no:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和...
【专利技术属性】
技术研发人员：达里奥·坎帕纳，娜塔莎·维纳尼卡，神谷尚宏，方语甜，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，
类型：发明
国别省市：
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