【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体涉及外泌体mirna标志物在肺癌患者免疫联合化疗预后评估中的应用。
技术介绍
1、肺癌在中国的发病率和死亡率均位于恶性肿瘤中的第1位。基于多年临床数据分析结果显示，肺癌在我国的发病率平均为十万分之五十一。肺癌患者死亡率连续近20年排在我国恶性肿瘤死亡首位。目前我国每年确诊和死于肺癌的人数分别为80万和65万，预计到2030年这两项人数将分别达到500万和350万。肺癌已经成为我国恶性肿瘤死亡的第一杀手，并且每年还在快速增加。因此，肺癌已经成为威胁人们健康的重大医学难题。
2、肿瘤免疫治疗联合化疗治疗方案是临床肺癌治疗一种重要方式。基于患者接受免疫联合治疗后治疗效果评估，一般分为疾病进展(pd)，疾病稳定(sd)、疾病部分缓解(pr)和完全缓解(cr)。另外，基于肺癌患者是否响应免疫联合化疗治疗方案，也可以分为非响应组和响应组；其中，非响应组指患者接受免疫联合治疗后，疾病出现进展的情况，如pd；而响应组，指患者接受免疫联合治疗后，疾病未发生进展的情况，因此主要包括sd、pr和cr。临床上对肺癌的治疗方案的疗效评估主要基于胸部增强ct、胸部x线摄影、mri和超声等辅助影像学检查。常用的血液肿瘤标志物主要有癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，cea)，神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，nse)，细胞角蛋白19片段(cytokeratinfragment，cyfra21-1)和胃泌素释放肽前体(pro-gastrin-releasing
3、外泌体(extracellular vesicles,evs)，又称小型胞外囊泡，近年来得到了广泛的研究，它是一种脂质双分子层包裹的直径约30-150nm的囊泡。外泌体可由多种细胞类型主动分泌释放至细胞间隙，存在于血液、尿液、腹水等各种体液中。外泌体是一种信息囊泡，携带其来源细胞的脂类、蛋白质和核酸(dna、mrna和mirnas等)。外泌体通过释放内含的生物活性分子，与受体细胞膜融合或与细胞表面受体结合，介导了正常细胞和癌细胞之间的双向通信。外泌体的分子组成反映其细胞或组织来源的生理或病理变化，在疾病诊断、免疫治疗和术后检测等生物标志物的开发具有极大的潜力。
4、目前，临床上尚未有生物学标志物可用于预测肺癌免疫联合化疗联合治疗方案疗效及肺癌免疫联合化疗获益人群的应用。专利cn 110799648 a发现在肺癌患者中差异表达的329个mirna可以作为肺癌诊断的标志物，其中mir-92a-3p和mir-107作为次优组合诊断的mirna，mir-107诊断的准确性只有72％。专利cn 112301130 a发现包括mir-92a-3p在内的11个mirna诊断模型对早期肺癌诊断的敏感性和特异性较高。专利cn 112980947 a发现在肺癌患者中显著性上调的12种mirna(包括mir-92a-3p)，可以作为肺癌诊断的标志物，但诊断的准确性、敏感性和特异性未知。专利ep 3 862 442 a2通过对肿瘤患者和健康人群血液样本723个mirna进行检测发现包括mir-92a-3p在内的多种mirna在肺部肿瘤中特异性差异表达，诊断的敏感性和特异性分别是86.93％和84.11％。专利wo 2022/261039 a2在肺癌发现组找到100个差异表达的mirna(包括mir-92a-3p)，在验证组找到排名前四的4个mirna(mir-5100、mir-1343-3p、mir-1290和mir-4787-3p)组成的诊断模型可以提高肺癌的诊断效果。现有专利方案中公开的标志物均是用于肺癌诊断，诊断和免疫联合化疗的疗效预测是完全不同的两个方向，两者应用场景不同、研究的对象也不同，诊断侧重将癌症患者和健康人或者良性患者对比筛选差异表达的mirna，且患者多是i期或者ii期的早期阶段，当患者本身已是无法手术或者术后需要治疗的晚期阶段时，无法将已公开专利中的结果直接应用到肺癌免疫联合化疗的疗效预测，如若直接应用可能会得出相反错误的结论。
5、目前，临床上广泛使用的影像学检查(如胸部增强ct、胸部x线摄影、mri和超声等辅助影像学检查)和肿瘤标志物检测(如cea、nse、cyfra21-1、progrp和scc-ag)，对肺癌疗效检测的灵敏度和特异度不高，且容易出现假阳性。并且这些指标并不能够用于预测肺癌免疫联合化疗疗效及肺癌免疫联合化疗获益人群。尚没有可辅助常规影像学检查和血液肿瘤标志物的高特异性生物标志物，以提高筛选联合治疗方案获益人群的特异性，从而降低假阳性率。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是，提供外泌体mirna用于精准预测肺癌免疫联合化疗疗效评估和筛选获益肺癌患者人群的生物标志物。本专利技术采用临床上现有检测手段确定为肺腺癌的患者血浆作为研究样本，检测肺腺癌患者血浆外泌体来源mirnas的表达情况，发现可用于预测肺癌免疫联合化疗疗效评估及肺癌免疫联合化疗获益人群的血浆外泌体来源mirnas生物标志物。
2、本专利技术为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种外泌体mirna标志物在制备肺癌患者免疫联合化疗预后评估产品中的应用，所述标志物选自mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107中的至少一种。
4、作为优选实施方案，所述标志物选自mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107中的至少两种。
5、作为优选实施方案，所述免疫联合化疗为接受帕博利珠单抗联合化疗治疗。
6、作为优选实施方案，所述免疫联合化疗为接受帕博利珠单抗+培美+卡铂治疗。
7、本专利技术还提供了一种肺癌患者免疫联合化疗预后评估试剂盒，所述试剂盒包括检测标志物mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107中的一种或多种表达水平的试剂。
8、作为优选实施方案，采用二代测序方法检测标志物mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107的表达水平，使用非响应组标志物的平均log2cpm值为参照，标志物的表达水平高于所述平均log2cpm值的患者为高水平表达组，标志物的表达水平低于所述平均log2cpm本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.外泌体miRNA标志物在制备肺癌患者免疫联合化疗预后评估产品中的应用，所述标志物选自miR-769-5p、miR-589-5p、miR-6815-5p、miR-15a-5p、miR-92a-3p和miR-107中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述标志物选自miR-769-5p、miR-589-5p、miR-6815-5p、miR-15a-5p、miR-92a-3p和miR-107中的至少两种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述免疫联合化疗为接受帕博利珠单抗联合化疗治疗。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述免疫联合化疗为接受帕博利珠单抗+培美+卡铂治疗。
5.一种肺癌患者免疫联合化疗预后评估试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测标志物miR-769-5p、miR-589-5p、miR-6815-5p、miR-15a-5p、miR-92a-3p和miR-107中的一种或多种表达水平的试剂。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：采用二代测序方法检测标志物miR-7
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：采用PCR方法检测标志物miR-769-5p、miR-589-5p、miR-6815-5p、miR-15a-5p、miR-92a-3p和miR-107的表达水平，使用非响应组标志物的平均CT值为参照，以内参或外参来矫正，根据2^(-ΔΔCT)计算患者治疗前miRNA标志物相对表达量在1.5倍以上且P＜0.05判定为高水平表达组，患者治疗前miRNA标志物相对表达量在2/3倍以下且P＜0.05判定为低水平表达组。
8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：标志物miR-6815-5p、miR-15a-5p、miR-92a-3p和miR-107表达高的肺癌患者免疫联合化疗疗效佳；标志物miR-769-5p和miR-589-5p表达低的肺癌患者免疫联合化疗疗效佳。
9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述肺癌患者为肺腺癌患者。
10.权利要求5所述的试剂盒在肺癌患者免疫联合化疗疗效诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控评估中的应用。
...【技术特征摘要】
1.外泌体mirna标志物在制备肺癌患者免疫联合化疗预后评估产品中的应用，所述标志物选自mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述标志物选自mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107中的至少两种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述免疫联合化疗为接受帕博利珠单抗联合化疗治疗。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述免疫联合化疗为接受帕博利珠单抗+培美+卡铂治疗。
5.一种肺癌患者免疫联合化疗预后评估试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测标志物mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107中的一种或多种表达水平的试剂。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：采用二代测序方法检测标志物mir-769-5p、mir-589-5p、mir-6815-5p、mir-15a-5p、mir-92a-3p和mir-107的表达水平，...
【专利技术属性】
技术研发人员：张大东，张付闯，许晓雅，张继扬，陈升，刘冬雨，年宝宁，李志宽，
申请(专利权)人：上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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