【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于水产养殖，尤其涉及一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法。
技术介绍
1、大口黑鲈(micropterus salmoides)俗称加州鲈，为原产北美洲五大湖的一种肉食性鱼类。暨1983年引进，已成为我国池塘重要的养殖品种。由于肉质及营养价值媲美鳜鱼，是餐桌消费名副其实的“百姓鱼”。近年来，由弹状病毒科水泡性病毒(msrv)感染苗种引起的熟身病，到成鱼感染虹彩病毒科蛙病毒(lmbv)暴发的溃疡综合症，均对苗种和成鱼的养殖产生了极大的危害，流行范围广、传染快、出现频率高、病程短和致死率高。已有研究表明，这些病毒性疾病的暴发，除环境因子影响外，通过病鱼、中间宿主和水体水平传播引起的隐性携带病毒密切相关，但尚无垂直传播的确切证据。众所周知，病毒性疾病的防治至今仍是世界性难题，预防接种虽能发挥重要的防治作用，但并不能完全控制和消灭病毒性疾病的流行，因而控制传染源、切断传播途径和保护易感群体成为预防和控制病毒性传染病最有效的方法。由于养殖动物饲养在相对可控的特定空间环境中，疫病净化通过控制传染源、传播途径和易感群体的三个传染条件根除或消灭动物疫病，而成为建立健康种群的一种行之有效方法。
2、动物健康种群的建立主要有3种净化途径：一是利用分娩的无特定病原(spf)幼体培养健康种群；二是应用剖腹产的无特定病原幼体建立健康种群；三是通过检测(检疫)净化获得健康种群。由于spf在疾病模型、疫苗制造等方面的特殊价值，应用更普遍，水产动物中仅有南美白对虾亲虾，实现了spf商业化。spf动物饲养在特定的隔离或屏障系
技术实现思路
1、本专利技术为克服大口黑鲈隐性带毒问题，提供了一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，从而根除msrv和lmbv病毒对鱼苗、鱼种和成鱼的危害。
2、为实现上述目的，本专利技术技术方案采用以下步骤和内容：
3、1多联卵黄抗体的制备
4、1.1病毒制备：分离纯化的大口黑鲈msrv和lmbv病毒分别在鲤鱼上皮细胞系(epithelioma papulosum cyprinid，epc)中培养、扩增，待60％以上细胞出现细胞病变效应(cpe)时，收获病毒的细胞培养物，置于-80℃保存待用。
5、1.2免疫接种：2种病毒的细胞培养物分别融冻、离心，取上清液，按等体积混合，加入终浓度为0.5％的甲醛，密封置于65℃恒温灭活2h。冷却室温，加入双抗浓度为100ug/ml，与完全佛氏佐剂1∶1体积混合均匀，制成佐剂乳化疫苗，4℃保存备用。佐剂乳化疫苗采用胸肌多点注射的方式，分别于第一周、第二周免疫产蛋鸭；第三周用2种病毒等体积混合的上清液直接免疫。每次免疫1ml/羽，第五周开始收集免疫鸭蛋，4℃保存备用，蛋黄部分即含多联卵黄抗体。
6、其中，产蛋鸭应饲养在具有生物安全隔离措施的区域。饲养结束，产蛋鸭及废弃物焚烧处理，场地使用复合酚和强氯精溶液消杀处理。
7、2生物安全隔离区的建立
8、隔离区独立，通过围墙和日光塑料大棚将养殖池隔离，防止鸟类、鼠类和蛙类等动物入侵。养殖池采用50m2-400m2水泥池或面积1-5亩的土池，具有独立的水源、蓄水池和进排水系统，周边5km区域内无大口黑鲈、乌鳢、黄鳝、蛙类等易携带msrv和lmbv病毒的养殖区。
9、其中，蓄水池定期用高浓度的二氧化氯或强氯精消毒，或采用深50m以下的地下水，进水口设置0.150mm～0.125mm的过滤网，进入水泥池的水用紫外消毒器和臭氧双重处理。
10、其中，进入隔离区的工具、车辆及人员等均要消杀处理，严禁使用冰鲜鱼虾类投喂，只能使用膨化饲料。
11、3核心种群的净化
12、3.1种群来源：待检种群要求非近亲繁殖的良种基础群体，从未发生过重大病害。取冷藏备用的免疫鸭蛋，去除蛋清分离出蛋黄液，将蛋黄液和鸟嘌呤核苷按照一定比例或浓度均匀地拌在大口黑鲈膨化饲料表面，投喂良种基础种群20d-30d，抑制和防止scrv和lmbv病毒的感染。
13、3.2病毒检测：择优挑选体格健壮、体型正常、体表光滑和无病无伤的个体，逐尾取血液和鳍条样本，隔离检测scrv和lmbv病毒，检测方法按照市售的scrv和lmbv病毒检测试剂盒pcr检测，淘汰阳性个体，保留阴性个体。
14、3.3分群饲养：阴性个体以雌雄比例1∶1、数量50尾-100尾为一个小种群，保留5个-8个小种群。每个小种群一年重复检测scrv和lmbv病毒3次，3次检测合格即为净化核心种群。取样时以10尾为一个混合样，检测发现阳性，淘汰所在同群，对养殖场所内的养殖池空池暴晒7d及复合酚和强氯精溶液消杀处理。
15、3.4种群管理：每个小种群互相独立、隔离饲养，室内用复合酚溶液定期消毒，室外用强氯精溶液定期消毒。每月投喂7d含300mg/kg-500mg/kg的鸟嘌呤核苷的膨化饲料，防止病毒感染。每个小种群使用的工具独立，定期曝晒和消毒。
16、4净化核心种群的保持
17、4.1世代繁殖：(1)每个世代繁殖时检测亲鱼和受精卵scrv和lmbv病毒，检测时仍以10尾亲鱼或10尾亲鱼的受精卵混检，发现阳性，淘汰所在同群；(2)世代繁殖时应以来自不同种群的雌雄鱼相互配对，在隔离水泥池中采用自然产卵的方式交配和繁殖，以扩大随机交配，避免近亲繁殖，保持遗传多样性。(3)每个种群的受精卵孵化时用1mg/l的二氧化氯溶液浸泡消毒10min，在不同的水泥池独立孵化，防止混杂。
18、4.2世代培育：(1)每个小种群繁殖的鱼苗、鱼种和成鱼分不同的规格，隔离饲养在不同的养殖池，防止混杂；(2)鱼苗在ф1.5m-2m的pp材料圆形桶培育，放养密度2×105尾/m3-2×105尾/m3，投喂人工孵化的丰年虫，长至规格1cm时驯食配合饲料，鱼种和成鱼按照常规方法饲养；(3)每月投喂7d含300mg/kg-500mg/kg的鸟嘌呤核苷的膨化饲料，防止病毒感染；(4)每个小种群一年重复检测scrv和lmbv病毒3次，3次检测合格留种，否则淘汰所在同群。
19、4.3世代选育留种：(1)每个世代坚持严格而持续的选择和保种；(2)世代选育以生长和抗逆优势为选择目标，个体规格达到10g/尾时第一次筛选，选留比例本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于：步骤(1)中多联卵黄抗体的制备方法为：将纯化病毒制成佐剂乳化疫苗，注射到蛋鸭体内，每羽注射1mL，间隔1周注射一次，连续接种3次，第3次为混合注射，接种完成的第3周收集鸭蛋，取出蛋黄液0-4℃保存或蛋黄液冷冻干燥保存。
3.根据权利要求1所述的一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于：步骤(1)中多联卵黄抗体的投喂方法为：将蛋黄液和鸟嘌呤核苷按照比例或浓度均匀地拌在大口黑鲈膨化饲料表面，投喂良种基础种群20d-30d，日投喂2次，投喂量为体重的1.2％-1.5％，蛋黄液在饲料中的添加比例分别为15-20％，鸟嘌呤核苷的添加浓度为300mg/kg-500mg/kg。
4.根据权利要求1所述的一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于：每个小种群每月投喂7d含300mg/kg-500mg/kg的鸟嘌呤核苷的膨化饲料，一年重复检测SCRV和
5.根据权利要求1所述的一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于：净化种群的选育留种，采用个体规格达到10g/尾时第一次筛选，选留比例为5％-10％，个体规格达到400g/尾时第二次筛选，选留比例为5％-10％，每个种群的世代保种数量100尾-200尾，雌雄比例1∶1，保留5个-8个小种群，每个世代每隔2年-3年补充1个-3个新种群，新种群来源不同的良种场，按照步骤(1)和(2)的方法建立净化核心群。
...【技术特征摘要】
1.一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于：步骤(1)中多联卵黄抗体的制备方法为：将纯化病毒制成佐剂乳化疫苗，注射到蛋鸭体内，每羽注射1ml，间隔1周注射一次，连续接种3次，第3次为混合注射，接种完成的第3周收集鸭蛋，取出蛋黄液0-4℃保存或蛋黄液冷冻干燥保存。
3.根据权利要求1所述的一种隐性带毒大口黑鲈净化种群的建立、保持和利用方法，其特征在于：步骤(1)中多联卵黄抗体的投喂方法为：将蛋黄液和鸟嘌呤核苷按照比例或浓度均匀地拌在大口黑鲈膨化饲料表面，投喂良种基础种群20d-30d，日投喂2次，投喂量为体重的1.2％-1.5％，蛋黄液在饲料中的添加比例分别为15-20％，鸟嘌呤核苷的添...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴建开，王德忠，梅洁，
申请(专利权)人：射阳博海水产科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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