【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物，具体涉及一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌及其应用。
技术介绍
1、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，uc)是一种病因待明确的结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病，其病程漫长，易反复发作，尚无有效的治疗的方法。目前，全球溃疡性结肠炎的患病率约为500万例，且全球范围内发病率呈现上升的趋势。溃疡性结肠炎常见症状包括腹痛、便血、体重减轻、里急后重、呕吐等，高度影响患者的生活质量，严重导致长期并发症，如肠穿孔、大出血、息肉、结肠癌变等。
2、临床上常见药物治疗主要有柳氮磺胺吡啶水杨酸制剂、皮质类固醇、免疫抑制剂、生物治疗，但仍存在一定局限性。流行病学上显示，肠道屏障的破坏、粘膜稳态的丧失、免疫反应失调以及肠道微生物菌群紊乱是溃疡性结肠炎引发和持续炎症不可缺少的一部分。在一项纳入uc患者的双盲实验中，发现益生菌大肠杆菌nissle 1917与美沙拉嗪疗效相似；另外有研究表明，鼠李糖杆菌也有良好的治疗效果。因此，通过益生菌疗法靶向溃疡性结肠炎患者肠道微生态可显著缓解uc患者腹痛等临床症状，改善患者生活质量，但也有研究发现益生菌对uc没有显著效果甚至加重病情。此外，由于uc发病机制复杂，再加上益生菌个体差异、种类以及治疗时剂量的不同，甚至生长状态的不同都会导致治疗的效果有所差异。
3、因此目前的益生菌疗法中对于菌株自身及潜在的风险是临床上应用益生菌所面临的风险，寻找一种安全、有效治疗溃疡性结肠炎的益生菌对于推动临床上使用益生菌疗法具有重要现实意义。
技术
1、本专利技术的目的在于提供一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌及其应用。
2、一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，分类命名：两歧双歧杆菌bifidobacterium bifidum；保藏号为：cgmcc no.29545；保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏日期为：2024年01月08日；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
3、优选的，所述的两歧双歧杆菌的dna序列如seq id no.1所示。
4、优选的，所述两歧双歧杆菌的制备方法为：
5、s1、采集健康婴幼儿粪便样本，放入厌氧转移培养基，保持厌氧环境；
6、s2、将s1采集到的样本于厌氧工作站中加入l-半胱氨酸盐酸盐/pbs，然后将样品在1000rpm条件下离心1min，吸取上清液进行稀释；
7、s3、吸取s2中稀释后的上清液100μl均匀涂布于mrs固体培养基中，于厌氧工作站37℃倒置培养48h。
8、s4、挑取s3中培养后的菌落数在50以内平板上单菌落，于mrs固体培养基上再次进行划线，37℃厌氧培养48h得到单菌落，然后将再次划线培养得到的单菌落接种于mrs液体培养基中，37℃厌氧培养12h即为纯化后培养液。
9、s5：将s4中得到的菌体培养液进行菌液od值测定，当od值在0.6～0.8时，3000rpm/min离心8min；
10、s6：弃去s5中经离心的菌体培养液的上清液，向剩余产物中加入无菌脱纤维绵羊血，吹打混匀后分装至冻存管内，转移至液氮，即得该两歧双歧杆菌保藏菌株。
11、优选的，所述s2中l-半胱氨酸盐酸盐/pbs的浓度为0.05g/100ml。
12、优选的，所述s2中l-半胱氨酸盐酸盐/pbs的加入量为健康婴幼儿粪便样本的十倍。
13、优选的，所述s2中上清液的稀释浓度分别为10-6、10-7、10-8。
14、两歧双歧杆菌cgmcc no.29545在制备改善溃疡性肠炎的产品上的应用：用于制备改善溃疡性结肠炎的产品。
15、本专利技术带来的有益技术效果为：
16、本专利技术筛选出了一种两歧双歧杆菌，此两歧双歧杆菌可以改善溃疡性肠炎，具体体现在：
17、(1)降低小鼠的疾病损伤；
18、(2)改善小鼠的结肠恢复程度；
19、(3)减轻结肠炎小鼠的病理损伤；
20、(4)降低结肠炎小鼠的炎症反应。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：该菌种保藏号为：CGMCCNo.29545。
2.根据权利要求1所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述的两歧双歧杆菌的DNA序列如SEQIDNO.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述两歧双歧杆菌的制备方法为：
4.根据权利要求3所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述S2中L-半胱氨酸盐酸盐/PBS的浓度为0.05g/100ml。
5.根据权利要求4所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述S2中L-半胱氨酸盐酸盐/PBS的加入量为健康婴幼儿粪便样本重量的十倍。
6.根据权利要求5所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述S2中上清液的稀释浓度分别为10-6、10-7、10-8。
7.一种如权利要求1-6任意一项所述的改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌的应用，其特征在于：用于制备改善溃疡性结肠炎的产品。
【技术特征摘要】
1.一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：该菌种保藏号为：cgmccno.29545。
2.根据权利要求1所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述的两歧双歧杆菌的dna序列如seqidno.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述两歧双歧杆菌的制备方法为：
4.根据权利要求3所述的一种改善溃疡性结肠炎的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述s2中l-半胱氨酸盐酸盐/pb...
【专利技术属性】
技术研发人员：窦晓兵，尹娟，陈林，林益游，邱剑楠，王宇浩，陈京，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。