【技术实现步骤摘要】
本申请涉及结核分枝杆菌检测试剂盒的领域，尤其是涉及一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、结核病是一种古老的疾病，全球广泛分布，是细菌感染性疾病致死的首位原因。结核分枝杆菌，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原体，该菌可侵犯全身各器官，但以引起肺结核最多见。
2、虽然结核病是目前严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一，但只要早期诊断和合理用药，绝大多数的结核病人是可以治愈的。目前，常见的检测结核分枝杆菌的方法有：核酸检测、酶联法、胶体金法。
3、现有技术的核酸检测、酶联需要大型仪器以及专业人员操作，且操作过程复杂，时间长，对于早期或无症状结核病人来说会出现因检测成本较高而延误诊断的情况。并且由酶联法与胶体金法检测的是抗体，无法测出体内抗原是否还存在，也就是说，对于早期或无症状结核病人体内尚未出现抗体的情况时，酶联法与胶体金法难以对结核分枝杆菌进行检出，而难以及时得到早期诊断和合理用药。
技术实现思路
1、为了更加有效及时地对早期以及无症状结核病进行辅助诊断，本申请提供一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒及其制备方法。
2、第一方面，本申请提供的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒采用如下的技术方案：
3、一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括底板和均粘贴于底板同侧面的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫和吸水纸分别搭接于硝酸纤维素膜的两端，所述样本垫搭接于结合垫
4、所述硝酸纤维素膜设置有检测线和质控线，所述检测线包被有结核分枝杆菌抗体1，所述结合垫包被有结核分枝杆菌抗体2复合标记物；所述质控线包被有羊抗鼠igg。
5、通过采用上述技术方案，将人体尿液样本滴至样本垫，样本层析至结合垫，通过抗原抗体反应，形成结核分枝杆菌抗原-结核分枝杆菌抗体2复合标记物的免疫复合物。在层析作用下，免疫复合物层析至硝酸纤维素膜并向吸水纸方向流动。如果样本中存在结核分枝杆菌抗原，免疫复合物经过对应包被有结核分枝杆菌抗体1的检测线时，就会通过抗原抗体反应形成结核分枝杆菌抗体1-结核分枝杆菌抗原-结核分枝杆菌抗体2复合标记物的双抗夹心复合物，以使得免疫复合物在该检测线处富集而显色，以实现对结核分枝杆菌抗原的准确检出。如果样本中不存在结核分枝杆菌抗原，免疫复合物经过检测线时，就不会在检测线处富集也不会显色，以此来检测样本中是否存在结核分枝杆菌；并且经过检测线后的免疫复合物会在质控线与二抗体进行免疫结合，以使得免疫复合物在该质控线处富集而显色，以检验试剂盒是否正常工作，以证明检测结果的有效性。
6、并且相比于对样本中是否存在结核分枝杆菌抗体进行检测，采用双抗体进行检测，能够直接对样本是否存在结核分枝杆菌抗原进行检测，能够对体内尚未出现抗体的早期或无症状结核病人进行辅助诊断，并且采用上述试剂盒进行检测，操作简单、耗时短、成本低，能够更加及时有效地对结核病进行早期诊断和合理用药，提升治愈率。
7、核酸法和酶联法之所以需要采血检测，是因为对结核分枝杆菌抗原产生免疫应答后血液中会出现抗体。而本申请试剂盒能够直接对样本是否存在结核分枝杆菌抗原进行检测，人体尿液中就存在结核分枝杆菌抗原，因此可直接采用尿液样本进行检测。相比于血液样本，尿液样本更容易获得，测抗原敏感度也优于血液检测，可实现床边检测，且易获得结果，能够更加及时有效地对结核病进行早期诊断和合理用药。
8、可选的，所述检测线上包被的结核分枝杆菌抗体1由浓度为0.5-1.5mg/ml的结核分枝杆菌抗体1溶液以0.9-1.1ul/cm的液量喷涂得到，所述检测线的喷液宽度为3-4mm。
9、通过采用上述技术方案，采用上述浓度的结核分枝杆菌抗体1溶液溶液以上述液量喷涂于硝酸纤维素膜上，能够使得检测线上包被得到的结核分枝杆菌抗体1含量能够使得足够的免疫复合物富集于检测线，以使得检测线能够明显显色体现检测结果。
10、可选的，所述结合垫上的结核分枝杆菌抗体2复合标记物由复合标记物溶液涂抹并干燥后得到，所述复合标记物溶液的制备方法包括以下步骤：
11、在18-22ml胶体金溶液中加入0.01-0.2m的碳酸钾溶液调节ph至7.5-8.0，加入0.2-0.4mg结核分枝杆菌抗体2，反应9-11min，加入浓度为0.5％的bsa封闭液进行封闭4-6min，离心去上清，用0.01-0.03m、ph7-8的pbs重悬浮至2ml，得到复合标记物溶液。
12、通过采用上述技术方案，按照上述方案制得的复合标记物溶液，能够使得结核分枝杆菌抗体2和胶体金形成稳定的复合标记物的同时，结核分枝杆菌抗体2还能稳定地与结核分枝杆菌抗原进行特异性结合形成稳定地免疫复合物。
13、可选的，所述胶体金溶液的制备方法包括以下步骤：
14、取480-520ml浓度为0.01-0.03％的氯金酸煮沸，再加入0.8-1.2％的柠檬酸三钠2-3ml，继续煮沸9-11min后自然冷却，得到胶体金溶液。
15、可选的，所述结合垫由复合标记物溶液经干燥液稀释后涂抹玻璃纤维素膜上再经干燥裁切后得到，所述干燥液包括以下组分及其含量：4-6％海藻糖、0.4-0.6％酪蛋白钠盐，余量为0.01-0.05m、ph7-8的pbs缓冲液。
16、通过采用上述技术方案，海藻糖具有优秀的热稳定性以及能够作为基因组的保存剂，酪蛋白钠盐可作为阻断结核分枝杆菌抗体2发生非特异性结合的封闭液。采用上述干燥液对复合标记物溶液稀释后再干燥固定于结合垫上，能够将结核分枝杆菌抗体2稳定固定于结合垫上的同时，对结核分枝杆菌抗体2进行保护，以提升试剂盒的保藏性，并且能够维持结核分枝杆菌抗体2和结核分枝杆菌抗原的特异结合性，以提升检测结果准确性。
17、可选的，所述样品垫由玻璃纤维素膜在样品垫处理液浸泡后，再经干燥和裁切后得到。
18、可选的，所述样品垫处理液包括以下组分及其含量：
19、0.4-0.6％tween-20、0.4-0.6％酪蛋白钠盐、0.4-0.6％聚乙烯吡咯烷酮40和0.4-0.6％油醇聚氧乙烯醚，余量为0.01-0.05m、ph7-8的pbs缓冲液。
20、通过采用上述技术方案，经上述样品垫处理液对样品垫处理，能使得样品滴至样品垫上后能够进行快速扩散至结合垫，并且还能对样品中的结核分枝杆菌抗原上的未结合位点进行保护，以提升结核分枝杆菌抗原和结核分枝杆菌抗体结合的特异性，提升检测准确性。
21、可选的，所述质控线上的羊抗鼠igg由浓度为0.5-1.5mg/ml的羊抗鼠igg溶液以0.9-1.1ul/cm的液量喷涂得到，所述质控线的喷液宽度为3-4mm。
22、第二方面，本申请提供的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒的制备方法采用如下的技术方案：
23、一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒的制备方法，包括以下本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，包括试剂条（2），所述试剂条（2）包括底板（21）和均粘贴于底板（21）同侧面的样本垫、结合垫（23）、硝酸纤维素膜（24）和吸水纸（25），所述结合垫（23）和吸水纸（25）分别搭接于硝酸纤维素膜（24）的两端，所述样本垫搭接于结合垫（23）；
2.根据权利要求1所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于：所述检测线（241）上包被的结核分枝杆菌抗体1由浓度为0.5-1.5mg/ml的结核分枝杆菌抗体1溶液以0.9-1.1ul/cm的液量喷涂得到，所述检测线（241）的喷液宽度为3-4mm。
3.根据权利要求1所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述结合垫（23）上的结核分枝杆菌抗体2复合标记物由复合标记物溶液涂抹并干燥后得到，所述复合标记物溶液的制备方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述胶体金溶液的制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求3所述的一种双抗夹心测尿液中结核
6.根据权利要求1所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于：所述样品垫（22）由玻璃纤维素膜在样品垫（22）处理液浸泡后，再经干燥和裁切后得到。
7.根据权利要求6所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述样品垫（22）处理液包括以下组分及其含量：
8.根据权利要求1所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于：所述质控线（242）上的羊抗鼠IgG由浓度为0.5-1.5mg/ml的羊抗鼠IgG溶液以0.9-1.1ul/cm的液量喷涂得到，所述质控线（242）的喷液宽度为3-4mm。
9.一种如权利要求1-8任一所述的双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒的制备方法，其特征在于：制备所述结合垫（23）时，取1-3mL所述复合标记物溶液用干燥液稀释至18-22ml，得到待涂抹液，所述待涂抹液和玻璃纤维素膜的涂抹比（mL/cm2）为1：（17-19）。
...【技术特征摘要】
1.一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，包括试剂条（2），所述试剂条（2）包括底板（21）和均粘贴于底板（21）同侧面的样本垫、结合垫（23）、硝酸纤维素膜（24）和吸水纸（25），所述结合垫（23）和吸水纸（25）分别搭接于硝酸纤维素膜（24）的两端，所述样本垫搭接于结合垫（23）；
2.根据权利要求1所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于：所述检测线（241）上包被的结核分枝杆菌抗体1由浓度为0.5-1.5mg/ml的结核分枝杆菌抗体1溶液以0.9-1.1ul/cm的液量喷涂得到，所述检测线（241）的喷液宽度为3-4mm。
3.根据权利要求1所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述结合垫（23）上的结核分枝杆菌抗体2复合标记物由复合标记物溶液涂抹并干燥后得到，所述复合标记物溶液的制备方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述胶体金溶液的制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求3所述的一种双抗夹心测尿液中结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于：所述结合垫（23）由复合标记物溶液经干燥液稀释后涂抹玻璃纤维素膜上再经干燥裁切后得到...
【专利技术属性】
技术研发人员：林莉，刘峰，陈英杰，林志铿，
申请(专利权)人：厦门为正生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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