【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，具体涉及一种苦碟子注射液的特征图谱及其构建方法和应用、苦碟子注射液中糖类成分的检测方法。
技术介绍
1、苦碟子注射剂(曾用名：碟脉灵注射剂)为通化华夏药业有限责任公司生产的中药注射剂。该注射剂对于冠心病、心绞痛和脑梗塞的疗效确切与同类产品相比，在促进急性脑梗死患者恢复缺血半暗袋区的血液供应，控制缺血病灶发展，保护缺血的脑细胞等方面显示出明显优势。
2、目前，苦碟子注射液化学物质已达到国家中药注射液上市后再评价“689”的要求，并完成了苦碟子大类成分含量的测定，其中，黄酮类30.23％、糖类21.97％、无机盐类17.86％、有机酸8.178％、氨基酸3.714％、核苷1.407％，大类化学成分占总固体质量的83.36％。
3、经过近十年的研究，苦碟子注射剂的有效成分含量有了明显的提高，但是在其中所含有的成分中仍然含量百分之十几的糖类成分，经研究发现，这部分糖类化合物具有明显的心肌保护作用，其作用与其中所含有的有效成分--酚酸类化合物作用相当，是苦碟子注射剂的主要活性成分之一，由于其糖类成分结构复杂、难以纯化，使得苦碟子注射剂的质量难以控制。因此，检测苦碟子注射剂中糖类成分的含量具有重要的意义。
4、由于单糖极性较强，结构相近，且缺乏光学活性，故为了改善其分离选择性和提高检测灵敏度，人们常将多糖水解后采用柱前或柱后衍生化色谱法分离和检测。例如，中国专利cn104316630a公开了一种苦碟子注射液糖类成分的含量测定方法，以gc-ms(气相色谱-质谱法)制定了苦碟子注射液糖
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种苦碟子注射液的特征图谱及其构建方法和应用、苦碟子注射液中糖类成分的检测方法。本专利技术提供的方法在衍生过程中不产生异构体，构建的糖类成分的特征图谱实现了对苦碟子注射液产品质量的有效控制和保证产品的一致性，且糖类成分的检测结果准确度高。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种苦碟子注射液特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
4、将苦碟子注射液进行醇沉，得到苦碟子注射液多糖；
5、将所述苦碟子注射液多糖与三氟乙酸水溶液混合，进行水解后干燥，将得到的水解残渣溶解于甲醇中后干燥，然后复溶于水中，得到苦碟子注射液多糖水解液；
6、将所述苦碟子注射液多糖水解液、第一1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液和第一碱金属氢氧化物水溶液混合，进行第一衍生化，然后调节ph值至中性，将得到的供试品衍生化中性液进行三氯甲烷萃取，水相为供试品溶液；
7、将混合对照品的水溶液、第二1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液和第二碱金属氢氧化物水溶液混合，进行第二衍生化，然后调节ph值至中性，将得到的对照品衍生化中性液进行三氯甲烷萃取，水相为参照物溶液；所述混合对照品包括甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖；
8、将所述供试品溶液和参照物溶液分别进行高效液相色谱检测，分别得到样品液相图谱和参照物液相图谱，根据所述样品液相图谱和参照物液相图谱得到苦碟子注射液特征图谱；
9、所述高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系包括流动相a和流动相b，所述流动相a为第一磷酸盐缓冲液-乙腈，所述流动相b为第二磷酸水溶液-乙腈，所述流动相a中乙腈的体积分数为10～25％，所述流动相b中乙腈的体积分数为35～45％；洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序包括：
10、0～10min，所述流动相a体积分数由95～100％降低至87～92％；
11、10～30min，所述流动相a体积分数由87～92％降低至65～70％；
12、30～40min，所述流动相a体积分数为65～70％；
13、40～40.01min，所述流动相a体积分数由65～70％增加至95～100％；
14、40.01～60min，所述流动相a体积分数为95～100％；
15、所述苦碟子注射液特征图谱包括甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖的特征峰。
16、优选的，所述苦碟子注射液多糖的质量与三氟乙酸水溶液的体积之比为25mg：2～4ml；
17、所述三氟乙酸水溶液的体积分数为10～15％；
18、所述水解的温度为100～120℃，时间为6～8h。
19、优选的，所述苦碟子注射液多糖的质量与复溶用水的体积之比为25mg：1.5～2.5ml。
20、优选的，所述苦碟子注射液多糖的质量与第一1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液的体积之比为25mg：1～2ml；
21、单种对照品的质量和第二1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液的体积之比为2mg：1～1.5ml；
22、所述第一1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液和第二1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液的浓度独立地为86.5～87.5g/l；
23、所述第一衍生化和第二衍生化的温度独立地为65～75℃，时间独立地为25～30min。
24、优选的，所述混合对照品的水溶液中单种对照品的质量和水的体积之比为2mg：1.95～2.05ml。
25、优选的，所述高效液相色谱检测的条件还包括：色谱柱为c18色谱柱，流动相流速为0.7～0.9ml/min，检测器为紫外检测器，检测波长为243～257nm，柱温为20～35℃，进样量为1～2μl。
26、本专利技术提供了上述技术方案所述特征图谱构建方法得到的苦碟子注射液特征图谱，包括甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖的特征峰。
27、本专利技术提供了上述技术方案所述的苦碟子注射液特征图谱在苦碟子注射液中糖类成分检测中的应用。
28、本专利技术提供了一种苦碟子注射液中糖类成分的检测方法，包括以下步骤：
29、将待测苦碟子注射液进行醇沉，得到苦碟子注射液多糖；
30、将所述苦碟子注射液多糖与三氟乙酸水溶液混合，进行水解后干燥，将得到的水解残渣溶解于甲醇中后干燥，然后复溶于水中，得到苦碟子注射液多糖水解液；
31、将所述苦碟子注射液多糖本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种苦碟子注射液特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述苦碟子注射液多糖的质量与三氟乙酸水溶液的体积之比为25mg：2～4mL；
3.根据权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述苦碟子注射液多糖的质量与复溶用水的体积之比为25mg：1.5～2.5mL。
4.根据权利要求1的所述特征图谱的构建方法，其特征在于，所述苦碟子注射液多糖的质量与第一1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液的体积之比为25mg：1～2mL；
5.根据权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述混合对照品的水溶液中单种对照品的质量和水的体积之比为2mg：1.95～2.05mL。
6.根据权利要求1所述特征图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件还包括：色谱柱为C18色谱柱，流动相流速为0.7～0.9mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为243～257nm，柱温为20～35℃，进样量为1～2μL。
7.权利要求1～6任一项所述的特征图谱构建
8.权利要求7所述的苦碟子注射液特征图谱在苦碟子注射液中糖类成分检测中的应用。
9.一种苦碟子注射液中糖类成分的检测方法，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的检测条件还包括：色谱柱为C18色谱柱，流动相流速为0.7～0.9mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为243～257nm，柱温为20～35℃，进样量为2μL。
...【技术特征摘要】
1.一种苦碟子注射液特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述苦碟子注射液多糖的质量与三氟乙酸水溶液的体积之比为25mg：2～4ml；
3.根据权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述苦碟子注射液多糖的质量与复溶用水的体积之比为25mg：1.5～2.5ml。
4.根据权利要求1的所述特征图谱的构建方法，其特征在于，所述苦碟子注射液多糖的质量与第一1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液的体积之比为25mg：1～2ml；
5.根据权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述混合对照品的水溶液中单种对照品的质量和水的体积之比为2mg：1.95～2.05ml。
6.根据权利要求1所述特征图谱的构建方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：高阳，徐多多，邹敬韬，郑炜，李银清，张艳秋，律广富，
申请(专利权)人：长春中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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