【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物催化，具体涉及糖基转移酶及其在合成二-o-β-d-葡萄糖甙中的应用。
技术介绍
1、槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙具有较高的水溶性和生物利用度。它是蔬菜中主要的膳食类黄酮，特别是洋葱(allium cepa)，可以用作膳食补充剂，功能性食品成分，或用于制药和食品工业的有价值的植物化学物质。槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙具有基本的神经保护作用[sarchielli,erica,et al."neuroprotective effects of quercetin 4’-o-β-d-diglucoside on human striatal precursor cells in nutrient deprivation condition.acta histochemica2018,120:122-128.]，另外，槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙具有抗氧化和抗衰老等功能[d,colina-coca c,char cd,cano mp,de ancos b,sánchez-moreno c.hyaluronidase inhibiting activity and radicalscavenging potential of flavonols in processed onion.j agric food chem.2013,61:4862-72.]。但是槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙在水果和蔬菜中的含量很低，例如洋葱中每公斤新鲜重量约200毫克，因此从水果和蔬菜中大
2、udpg-糖基转移酶一步催化底物的糖基化反应可生成二-o-β-d-葡萄糖甙，具有步骤简单、经济高效等优势[brazier-hicks melissa,offen wendy,gershater markus,revett timothy,lim eng-kiat,bowles dianna,davies gldeon,edwards robert.characterization and engineering of the bifunctional n-ando-glucosyltransferase involved in xenobiotic metabolismin plants.pnas2007,104:20238-20243]。尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose，简称udpg)是葡萄糖的活化形式，可以作为糖基化酶促反应体系中的糖基供体，通过底物的亲核攻击，形成糖苷键[takeshi hiromoto,eijiro honjo,naonobunoda,taro tamada,kohei kazuma,masahiko suzuki,michael blaber,ryota kuroki.structural basis for acceptor-substrate recognition of udp-glucose:anthocyanidin 3-o-glucosyltransferase from clitoria ternatea.protein science,2015,24:395-407.]。
3、到目前为止，有报道称来自a.cepa的糖基转移酶ugt73g1能够催化槲皮素或者槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖甙生成槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙。但是槲皮素和槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖甙作为底物时，产物槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙的转化率只能达到10％和50％左右[kramer cm,prata rt,willits mg,de luca v,steffens jc,graser g.cloning and regiospecificity studies of two flavonoid glucosyltransferases from allium cepa.phytochemistry.2003,64:1069-1076.]。鉴于此，本专利技术提供一种糖基转移酶以及在合成二-o-β-d-葡萄糖甙中的应用。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是提供糖基转移酶及其在合成二-o-β-d-葡萄糖甙中的应用。目的是提供一种糖基转移酶，实现高效率地制备槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
3、第一方面，糖基转移酶，所述糖基转移酶的氨基酸序列如seq id no.2所示：
4、meesktphvaiipspgmghliplvefakrlvhlhgltvtfviagegppskaq
5、rtvldslpssissvflppvdltdlssstriesrisltvtrsnpelrkvfdsfve
6、ggrlptalvvdlfgtdafdvavefhvppyifypttanvlsfflhlpkldet
7、vscefrelteplmlpgcvpvagkdfldpaqdrkddaykwllhntkryke
8、aegilvntffelepnaikalqepgldkppvypvgplvnigkqeakqteese
9、clkwldnqplgsvlyvsfgsggtltceqlnelalgladseqrflwvirsp
10、sgianssyfdshsqtdpltflppgflertkkrgfvipfwapqaqvlahpstg
11、gflthcgwnstlesvvsgipliawplyaeqkmnavllsediraalrprag
12、ddglvrreevarvvkglmegeegkgvrnkmkelkeaacrvlkddgtstkalslvalkwkahkkeleqngnh。
13、本专利技术的有益效果是：本专利技术利用糖基转移酶(atogt)作为酶催化剂，并且根据糖基转移酶的功能，推测糖基转移酶能够对槲皮素-4'-o-β-d-葡萄糖甙3位羟基进行糖基化，建立了槲皮素-4'-o-β-d-葡萄糖甙3位羟基糖基化反应，实现天然产物槲皮素-3,4'-二-o本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.糖基转移酶，其特征在于，所述糖基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.糖基转移酶的编码基因，其特征在于，所述糖基转移酶的编码基因编码如权利要求1所述的糖基转移酶。
3.根据权利要求2所述糖基转移酶的编码基因，其特征在于，所述糖基转移酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒包括权利要求2或3所述的糖基转移酶的编码基因。
5.根据权利要求4所述一种重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒的载体为pET28a、pYES2中的至少一种。
6.一种转化体，其特征在于，所述的转化体包括权利要求4或5所述的重组质粒。
7.一种槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄糖甙的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求1所述的糖基转移酶通过酶催化制备槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄糖甙。
8.根据权利要求7所述一种槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄糖甙的制备方法，其特征在于，包括如下具体的步骤：将含有Tris-HCl缓冲液、尿苷
9.根据权利要求8所述一种槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄糖甙的制备方法，其特征在于，所述尿苷二磷酸葡萄糖与所述槲皮素-4'-O-β-D-葡萄糖甙的摩尔比为3.5-4：0.1-0.5；所述的糖基转移酶与所述槲皮素-4'-O-β-D-葡萄糖甙的用量比(69-92)μg：(0.1-0.5)mmol。
10.根据权利要求8所述一种槲皮素-3,4'-二-O-β-D-葡萄糖甙的制备方法，其特征在于，酶促反应的温度为20-40℃，时间为6-24小时。
...【技术特征摘要】
1.糖基转移酶，其特征在于，所述糖基转移酶的氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.糖基转移酶的编码基因，其特征在于，所述糖基转移酶的编码基因编码如权利要求1所述的糖基转移酶。
3.根据权利要求2所述糖基转移酶的编码基因，其特征在于，所述糖基转移酶的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒包括权利要求2或3所述的糖基转移酶的编码基因。
5.根据权利要求4所述一种重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒的载体为pet28a、pyes2中的至少一种。
6.一种转化体，其特征在于，所述的转化体包括权利要求4或5所述的重组质粒。
7.一种槲皮素-3,4'-二-o-β-d-葡萄糖甙的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求1所述的糖基转移酶通过酶催化制备槲皮素-3,4'-...
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