【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种nk细胞活化的方法和培养液。
技术介绍
1、自然杀伤细胞(natural killer cell,nk)是机体重要的天然免疫效应细胞，通过分泌ifn-γ等细胞因子参与免疫反应，在抵御病毒和肿瘤早期的恶性转化监视和免疫调节中具有关键作用。同时由于其成功的异基因过继转移治疗癌症和“现货”的潜力，在各种癌症的治疗上，以nk细胞为基础的免疫疗法正在吸引越来越多的关注。目前，在临床研究中，嵌合抗原受体自然杀伤细胞(chimeric antigen receptor natural killer cell，car-nk)在血液瘤的临床治疗方面有鼓舞人心的临床结果，但是因为实体瘤的特点，如复杂的免疫抑制肿瘤微环境(immunosuppressive tumor microenvironment，tme)、较强的肿瘤异质性、有限的靶抗原选择、解剖障碍、肿瘤部位运输不足等，在实体瘤治疗的临床研究中遇到了一些挑战。为了进一步提高nk细胞抗肿瘤的疗效，可以从优化nk细胞的来源，靶向抗原car区域的设计及提高nk细胞活性入手。由于nk细胞来源的优化较为复杂且需要长期培养，car结构的设计需要大量时间摸索，还需考虑对宿主的免疫反应，因此，体外提高nk细胞活性是一种较为简便的方式。nk细胞的活性提高表现在nk细胞的功能增加，比如分泌细胞因子如干扰素的能力或者表面活性受体表达的增强或者杀伤功能的提高以及抗肿瘤能力的增强。
2、现有技术cn 108026176 a涉及一种在有需要的受试者中增强nk细胞杀伤活性
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种nk细胞活化的方法和培养液。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
3、一种nk细胞活化的方法，包括以下步骤：将nk细胞用培养液在于35～39℃、3～7％co2条件下培养6～24小时得到活化的nk细胞；所述培养液包括emricasan。
4、所述emricasan的结构式如式所示：
5、
6、emricasan是一种有效的并且为口服的半胱天冬酶抑制剂，是美国conatus制药公司专利技术的在研药物(它于1998年由idun制药公司专利技术，2005年被辉瑞公司收购，2010年被conatus制药公司收购，后者随后在2017年将其独家开发和商业化许可给诺华公司。)，用于治疗肝硬化或由于多种因肝脏受创所导致的严重肝损伤，目前已完成ii期临床治疗试验，疗效优异(然而，在2019年6月，诺华和康纳图斯宣布encore-lf(iib期临床试验)失败。2019年12月底，conatus在nash进行的两项主要研究(nash相关纤维化的iib期和肝硬化的iii期)的结果发表。在接受nash治疗的肝硬化患者中进行的iii期研究没有显示出门压改善或积极的临床结果。然而，研究证实，emricasan治疗是安全的，耐受性良好)。但目前并没有任何研究将其与nk细胞的活化联系起来。本专利技术经过多次试验发现，采用emricasan培养nk细胞后，增强了有效因子的表达，提高了nk细胞对肿瘤细胞的裂解功能。
7、在其中一个优选的实施例中，所述nk细胞包括人原代纯化nk细胞、nk92细胞和人psca car nk细胞中的一种或几种。
8、在其中一个优选的实施例中，一种人原代纯化nk细胞活化的方法，包括以下步骤：将人原代纯化nk细胞用培养液在于35～39℃、3～7％co2条件下培养6～24小时得到活化的人原代纯化nk细胞；所述培养液包括emricasan。
9、在其中一个优选的实施例中，所述培养液中，包括基础培养基、8-12ng/ml白介素因子和100-250μl的8-12μm emricasan。
10、在其中一个优选的实施例中，所述基础培养基为rpmi-1640培养基或click’smedium培养基中的一种。
11、在其中一个优选的实施例中，基础培养基的添加量为，每1x106个细胞添加1mlrpmi-1640培养基。
12、根据培养液中细胞个数的增多，rpmi-1640培养基的数量也依次增多。
13、在其中一个优选的实施例中，每毫升rpmi-1640培养基含有8-12wt％胎牛血清。
14、在其中一个优选的实施例中，白介素因子包括白介素il-12、il-15、il-18中的一种或多种。
15、在其中一个优选的实施例中，一种nk92细胞活化的方法，包括以下步骤：将nk92细胞用培养液在于35～39℃、3～7％co2条件下培养6～24小时得到活化的nk92细胞；所述培养液包括emricasan。
16、在其中一个优选的实施例中，所述培养液包括含8-12wt％胎牛血清和8-12％非必需氨基酸的基础培养基、8-12ng/ml白介素因子和100-250μl的8-12μm emricasan。
17、在其中一个优选的实施例中，所述基础培养基为rpmi-1640培养基或click’smedium培养基中的一种。
18、在其中一个优选的实施例中，基础培养基的添加量为，每1x106个细胞添加1mlrpmi-1640培养基。
19、根据培养液中细胞个数的增多，rpmi-1640培养基的数量也依次增多。
20、在其中一个优选的实施例中，所述非必需氨基酸包括甘氨酸、l-丙氨酸、l-天门冬酰胺、l-天门冬氨酸、l-谷氨酸、l-脯氨酸、l-丝氨酸中的一种或几种。
21、在其中一个优选的实施例中，一种psca car nk细胞活化的方法，包括以下步骤：将psca car nk细胞用培养液在于35～39℃、3～7％co2条件下培养6～24小时得到活化的psca car nk细胞；所述培养液包括emricasan。
22、在其中一个优选的实施例中，所述培养液包括二号培养基和100iu/ml il-2(四环生物)，8-12ng/ml白介素因子和100-250μl的8-12μm emricasan
23、在其中一个优选的实施例中，二号培养基的添加量为，每1x106个细胞添加1ml二号培养基。
24、在其中一个优选的实施例中，二号培养基包括40-50wt％的rpmi-1640培养基、40-50wt％的click’s medium培养基(irvine scientific,9195)和1-15wt％的ab人血清(sigma，h4522)。
25、一种nk细胞活化的培养液，包括emricasan。
26、在其中一个优选的实施例中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种NK细胞活化的方法，其特征在于，包括以下步骤：将NK细胞用培养液在于35～39℃、3～7％CO2条件下培养6～24小时得到活化的NK细胞；所述培养液包括emricasan；所述emricasan的结构式如式所示：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述NK细胞包括人原代纯化NK细胞、NK92细胞和人PSCA CAR NK细胞中的一种或几种。
3.一种人原代纯化NK细胞活化的方法，其特征在于，包括以下步骤：将人原代纯化NK细胞用培养液在于35～39℃、3～7％CO2条件下培养6～24小时得到活化的人原代纯化NK细胞；所述培养液中，包括基础培养基、8-12ng/ml白介素因子和100-250μl的8-12μMemricasan。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述基础培养基为RPMI-1640培养基或Click’s medium培养基中的一种；优选的，每毫升基础培养基含有8-12wt％胎牛血清。
5.一种NK92细胞活化的方法，其特征在于，包括以下步骤：将NK92细胞用培养液在于35～39℃、3～7％CO2条
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述非必需氨基酸包括甘氨酸、L-丙氨酸、L-天门冬酰胺、L-天门冬氨酸、L-谷氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸中的一种或几种。
7.一种PSCA CAR NK细胞活化的方法，其特征在于，包括以下步骤：将PSCACAR NK细胞用培养液在于35～39℃、3～7％CO2条件下培养6～24小时得到活化的PSCA CAR NK细胞；所述培养液包括二号培养基和100IU/mL IL-2(四环生物)，8-12ng/ml白介素因子和100-250μl的8-12μM emricasan。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，二号培养基包括40-50wt％的RPMI-1640培养基、40-50wt％的Click’s medium培养基和1-15wt％的AB人血清。
9.一种NK细胞活化的培养液，其特征在于，包括emricasan。
10.根据权利要求9所述的培养液，其特征在于，所述培养液包括基础培养基、8-24wt％营养成分、8-12ng/ml诱导因子和100-250μl的8-12μM emricasan。
...【技术特征摘要】
1.一种nk细胞活化的方法，其特征在于，包括以下步骤：将nk细胞用培养液在于35～39℃、3～7％co2条件下培养6～24小时得到活化的nk细胞；所述培养液包括emricasan；所述emricasan的结构式如式所示：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述nk细胞包括人原代纯化nk细胞、nk92细胞和人psca car nk细胞中的一种或几种。
3.一种人原代纯化nk细胞活化的方法，其特征在于，包括以下步骤：将人原代纯化nk细胞用培养液在于35～39℃、3～7％co2条件下培养6～24小时得到活化的人原代纯化nk细胞；所述培养液中，包括基础培养基、8-12ng/ml白介素因子和100-250μl的8-12μmemricasan。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述基础培养基为rpmi-1640培养基或click’s medium培养基中的一种；优选的，每毫升基础培养基含有8-12wt％胎牛血清。
5.一种nk92细胞活化的方法，其特征在于，包括以下步骤：将nk92细胞用培养液在于35～39℃、3～7％co2条件下培养6～24小时得到活化的...
【专利技术属性】
技术研发人员：阳青兰，邓亚飞，李颂扬，刘勇杰，李雅娜，
申请(专利权)人：湖南省儿童医院湖南省红十字会医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。