【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物领域，具体涉及一种伪狂犬病病毒湿毒保存方法、用途。
技术介绍
1、猪伪狂犬病病毒属于疱疹病毒科，甲型疱疹病毒亚科，猪疱疹病毒1型。该病毒在多种动物细胞中都可繁殖制备，并产生明显的细胞病变和核内嗜酸性包涵体。猪伪狂犬病病毒可感染多种动物，并引起死亡。
2、利用体外细胞培养技术繁殖和研究猪伪狂犬病病毒是常规的研究手段，目前病毒毒株的保存方法主要是湿毒保存和冻干毒保存。大部分病毒湿毒保存广泛的病毒保存方法为将接种病毒后的细胞培养物反复冻融后置于-20℃以下冷冻保存，在冷冻保存的过程中病毒毒力不变。但研究表明，猪伪狂犬病病毒湿毒在冷冻保存时的病毒毒力下降严重，严重影响对该病毒的研究历程。
3、免疫疫苗是预防猪伪狂犬病毒病的有效手段，目前主要以灭活疫苗或弱毒疫苗为主，强毒株常应用在灭活疫苗上，弱毒株常应用在弱毒疫苗上，如果生产出来的病毒量比较大，无法短期内制备成冻干疫苗，就必然面对生产出来的湿毒如何保存的问题。灭活疫苗在生产用毒种的短期保存问题上或弱毒疫苗在半成品的短期保存问题上均存在上述保存难题。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术的第一个目的在于提供一种伪狂犬病病毒湿毒保存方法，该方法于0℃或以上保存伪狂犬病病毒湿毒，使其病毒滴度在一定时间内基本保持不变，解决了伪狂犬病病毒在常规方法冷冻保存下病毒活力持续大幅度降低的问题，以利于后期冻干疫苗的生产。
2、本专利技术的第二个目的在于提供上述方法的应用。
3、为达到第一个专利
4、一种伪狂犬病病毒湿毒保存方法，向伪狂犬病病毒湿毒中加入保护剂和ph缓冲剂，得到病毒溶液，所述病毒溶液于0～8℃保存；
5、每100ml病毒溶液中含0.7g~0.8g明胶、1g~3g蔗糖和/或海藻糖、0.5g~1.5g甘露醇和/或山梨醇。
6、需要说明的是：传统的耐热保护剂中使用明胶、蔗糖和/或海藻糖、甘露醇和/或山梨醇是常见的，如本申请人的在先申请cn 108992674 b，但是，传统的冻干疫苗中，明胶只是作为一种溶液成分使用，在制备冻干疫苗的过程中，通过在病毒溶液中加入耐热保护剂并以溶液状态进行后续的冷冻、干燥，全程没有降温到0-8℃以制备成具有一定流动性的半胶冻状态的操作，即传统的冻干疫苗中，明胶并不起着形成半胶冻的作用。
7、在本案中，明胶的使用量、湿毒的保藏温度是非常重要的两个参数，通过在合适的温度下，使病毒湿毒处于半胶冻状态，可以实现适当长度的期限内较好的病毒保藏效果。
8、在上述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法中，所述伪狂犬病病毒湿毒中的伪狂犬病病毒为伪狂犬病病毒弱毒株或伪狂犬病病毒强毒株。
9、在上述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法中，所述ph缓冲剂为含hepes的磷酸盐缓冲剂。
10、在上述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法中，所述病毒溶液中含有0.5g~1g含hepes的磷酸盐缓冲剂。
11、在上述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法中，所述保护剂由0.7g~0.8g明胶、1g~3g蔗糖和/或海藻糖、0.5g~1.5g甘露醇和/或山梨醇以及余量的pbs缓冲液添加至10ml构成；所述保护剂、伪狂犬病病毒湿毒的体积比为10:89.5。
12、在上述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法中，所述伪狂犬病病毒湿毒的制备方法为：
13、st细胞长成良好单层时，更换为含2wt%新生牛血清的mem培养液，随后将伪狂犬病病毒毒株按1:1000的体积比比例接种细胞，当细胞病变达到90%以上时-20℃以下冻融2次后，7000r/min离心病毒5分钟后收获病毒上清，所述病毒上清为伪狂犬病病毒湿毒。
14、同时，本专利技术还公开了采用如上任一所述方法保存的病毒溶液生产冻干的伪狂犬病病毒的用途。
15、本专利技术的有益效果在于：
16、利用本专利技术的保存方法保存伪狂犬病病毒湿毒，使其病毒滴度在一定时间内基本保持不变，解决了伪狂犬病病毒在常规方法冷冻保存下病毒活力持续大幅度降低的问题，继而为研究伪狂犬病病毒和灭活疫苗带来极大的便利，同时为伪狂犬病弱毒疫苗半成品的保存提供最佳方向，以此有利于提高伪狂犬病弱毒疫苗的效价。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，向伪狂犬病病毒湿毒中加入保护剂和pH缓冲剂，得到病毒溶液，所述病毒溶液于0～8℃保存；
2.根据权利要求1所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述伪狂犬病病毒湿毒中的伪狂犬病病毒为伪狂犬病病毒弱毒株或伪狂犬病病毒强毒株。
3.根据权利要求1所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述pH缓冲剂为含HEPES的磷酸盐缓冲剂。
4.根据权利要求3所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述病毒溶液中含有0.5g~1g含HEPES的磷酸盐缓冲剂。
5.根据权利要求3所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述保护剂由0.7g~0.8g明胶、1g~3g蔗糖和/或海藻糖、0.5g~1.5g甘露醇和/或山梨醇以及余量的PBS缓冲液添加至10ml构成；所述保护剂、伪狂犬病病毒湿毒的体积比为10:89.5。
6.根据权利要求1所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述伪狂犬病病毒湿毒的制备方法为：
7.采用如权利要求1至6任一所述方法保存的病毒溶液生产冻
...【技术特征摘要】
1.一种伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，向伪狂犬病病毒湿毒中加入保护剂和ph缓冲剂，得到病毒溶液，所述病毒溶液于0～8℃保存；
2.根据权利要求1所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述伪狂犬病病毒湿毒中的伪狂犬病病毒为伪狂犬病病毒弱毒株或伪狂犬病病毒强毒株。
3.根据权利要求1所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述ph缓冲剂为含hepes的磷酸盐缓冲剂。
4.根据权利要求3所述的伪狂犬病病毒湿毒保存方法，其特征在于，所述病毒溶液中含有0.5g~...
【专利技术属性】
技术研发人员：赖月辉，齐冬梅，张东卓，穆光慧，周晓敏，李复坤，樊全宝，冯钰鑫，丘成文，吴燕华，关令红，
申请(专利权)人：广东永顺生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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