【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及干细胞诱导分化的，特别涉及一种人多能干细胞分化为间充质干细胞的方法。
技术介绍
1、间充质干细胞(mesenchymal stem cell,msc)是于1976年在骨髓中发现的一种专能干细胞，研究表明，间充质干细胞来源于胚胎发育早期的中胚层和外胚层，分布在人体或动物体内的脐带、胎盘、脂肪、骨髓等组织中，具有分化为脂肪、硬骨、软骨的三系分化潜能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子发挥免疫调节功能；滋养层细胞，可能存在于所有组织中，支持多种细胞的生存和生长；分泌相关抗炎性分子、抗凋亡分子促进组织修复。虽然间充质干细胞在损伤修复、免疫调节、抗衰老等方面等展现出了独特的优势，然而人体组织来源的msc存在难以规模化生产、生产批间次质量差异大、不同个体来源的msc的效用和质量难以保证等问题。随着人多能干细胞(human pluripotent stem cells，hpsc)的体外重编程技术的问世，使用人诱导多能干细胞经分化得到msc逐渐成为msc规模化生产的优选解决方案。
2、hpsc包括由人类的终末分化细胞经过重编程技术产生的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells，ipsc)，以及来源于人早期胚胎的胚胎干细胞(embryonic stem cells,esc)。hpsc具有稳定的自我更新能力，可维持正常核型及发育多能性，增殖能力强。其在特定条件下可定向分化为msc，由于其增殖扩增的稳定性，能极大地减少msc生产的批间次差异，提供稳定可持续的细胞来源。
3、通过
4、sik(salt-inducible kinases，盐诱导激酶)属于amp活化蛋白激酶(ampk)家族，其功能主要涉及调节能量反应相关的生理过程，如糖异生和脂质代谢。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供一种促进人多能干细胞(human pluripotent stem cells，hpsc)分化为间充质干细胞的方法，通过使用sik抑制剂促进hpsc向中胚层分化，进而诱导分化为msc。所述方法通过使用sik抑制剂缩短了获得msc的培养周期，所得msc表型成熟，质量高，全流程操作简便，无需流式筛选，相较原有的分化方法更为快捷，可以在更短的培养周期下得到合格的msc-p0代细胞。
2、在本专利技术的第一方面，提供一种人多能干细胞分化为间充质干细胞的方法，所述方法包括如下步骤：
3、使用分化培养基对人多能干细胞进行分化培养后即得间充质干细胞；
4、其中，所述分化培养基含有sik及其通路相关抑制剂。
5、在本专利技术的一些实施方式中，在细胞分化培养后还使用间充质干细胞维持培养基进行维持培养。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述分化培养基为人多能干细胞分化培养基。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述人多能干细胞分化培养基包括但不限于essential 6培养基、essential 7培养基、含n2b27的分化基础培养基、hplwⅸ-bm1培养基、hplwⅸ-plus-bm1培养基、hplwⅹ-bm1培养基、hplwxi-bm1培养基和biociso-bm1培养基。
8、在本专利技术的一些实施方式中，所述间充质干细胞维持培养基包括但不限于mem培养基、a-mem培养基、dmem培养基、dmem/f12培养基等基础维持培养基。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述分化培养的过程中还可以进一步添加间充质干细胞维持培养基。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述sik及其通路相关抑制剂包括ykl-06-062、mrt199665、hg-9-91-01、ykl-06-061、wh-4-025、sik2-in-1、glpg3970、mria9、ykl-05-099、arn-3236、siks-in-1、pterosin b或mr22中的至少一种。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述sik及其通路相关抑制剂为ykl-06-062、mrt199665、hg-9-91-01、ykl-06-061、wh-4-025、sik2-in-1、glpg3970、mria9、ykl-05-099、arn-3236、siks-in-1、pterosin b或mr22中的一种。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述ykl-06-062的工作浓度为0.01-20μm。
13、在本专利技术的一些实施方式中，所述mrt199665的工作浓度为0.01-10μm。
14、在本专利技术的一些实施方式中，所述hg-9-91-01的工作浓度为0.01-10μm。
15、在本专利技术的一些实施方式中，所述ykl-06-061的工作浓度为0.1-20μm。
16、在本专利技术的一些实施方式中，所述wh-4-025的工作浓度为0.1-20μm。
17、在本专利技术的一些实施方式中，所述sik2-in-1的工作浓度为0.01-10μm。
18、在本专利技术的一些实施方式中，所述glpg3970的工作浓度为0.1-10μm。
19、在本专利技术的一些实施方式中，所述mria9的工作浓度为0.1-10μm。
20、在本专利技术的一些实施方式中，所述ykl-05-099的工作浓度为0.1-10μm。
21、在本专利技术的一些实施方式中，所述arn-3236的工作浓度为0.01-10μm。
22、在本专利技术的一些实施方式中，所述siks-in-1的工作浓度为0.01-10μm。
23、在本专利技术的一些实施方式中，所述pterosin b的工作浓度为0.01-10μm。
24、在本专利技术的一些实施方式中，所述mr22的工作浓度为0.1-10μm。
25、在本专利技术的一些实施方式中，所述ykl-06-062的工作浓度为0.1μm。
26、在本专利技术的一些实施方式中，所述mrt199665的工作浓度为0.01μm。
27、在本专利技术的一些实施方式中，所述hg-9-91-01的工作浓度为0.08μm。
28、在本专利技术的一些实施方式中，所述ykl-06-061的工作浓度为0.2μm。
29、在本专利技术的一些实施方式中，所述wh-4-025的工作浓度为2μm。
30、在本专利技术的一些实施方式中，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人多能干细胞分化为间充质干细胞的方法，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在分化培养后还使用间充质干细胞维持培养基进行维持培养。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述分化培养基为人多能干细胞分化培养基。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述人多能干细胞分化培养基包括Essential6培养基、Essential 7培养基、含N2B27的分化基础培养基、hPLWⅨ-BM1培养基、hPLWⅨ-plus-BM1培养基、hPLWⅩ-BM1培养基、hPLWXI-BM1培养基和BioCISO-BM1培养基。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述间充质干细胞维持培养基包括MEM培养基、a-MEM培养基、DMEM培养基和DMEM/F12培养基。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SIK及其通路相关抑制剂包括YKL-06-062、MRT199665、HG-9-91-01、YKL-06-061、WH-4-025、SIK2-IN-1、GLPG3970、MRIA
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述YKL-06-062的工作浓度为0.01-20μM；所述MRT199665的工作浓度为0.01-10μM；所述HG-9-91-01的工作浓度为0.01-10μM；所述YKL-06-061的工作浓度为0.1-20μM；所述WH-4-025的工作浓度为0.1-20μM；所述SIK2-IN-1的工作浓度为0.01-10μM；所述GLPG3970的工作浓度为0.1-10μM；所述MRIA9的工作浓度为0.1-10μM；所述YKL-05-099的工作浓度为0.1-10μM；所述ARN-3236的工作浓度为0.01-10μM；所述SIKs-IN-1的工作浓度为0.01-10μM；所述Pterosin B的工作浓度为0.01-10μM；或所述MR22的工作浓度为0.1-10μM。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化培养的培养周期为3-30天。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述维持培养的培养周期为2-6天。
10.SIK及其通路相关抑制剂在诱导人多能干细胞产生间充质干细胞的分化中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种人多能干细胞分化为间充质干细胞的方法，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在分化培养后还使用间充质干细胞维持培养基进行维持培养。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述分化培养基为人多能干细胞分化培养基。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述人多能干细胞分化培养基包括essential6培养基、essential 7培养基、含n2b27的分化基础培养基、hplwⅸ-bm1培养基、hplwⅸ-plus-bm1培养基、hplwⅹ-bm1培养基、hplwxi-bm1培养基和biociso-bm1培养基。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述间充质干细胞维持培养基包括mem培养基、a-mem培养基、dmem培养基和dmem/f12培养基。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述sik及其通路相关抑制剂包括ykl-06-062、mrt199665、hg-9-91-01、ykl-06-061、wh-4-025、sik2-in-1、glpg3970、mria9、ykl-05-099、arn-3236、siks-in-1...
【专利技术属性】
技术研发人员：王淋立，余耿楠，陈月花，王培争，陈海美，
申请(专利权)人：未来智人再生医学研究院广州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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