【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞生物学和再生医学，尤其涉及一种gmp级别细胞完全培养基、制备方法及其用途。
技术介绍
1、gmp级别通常指的是符合良好生产规范(good manufacturing practice，简称gmp)的产品，这是一套用来指导食品、药品、医疗产品生产和配方的规则和规定，以确保产品的一致性、质量、纯度和安全性。细胞培养基是用于体外培养细胞的专用液体介质，它为细胞提供了必要的营养物质和适宜的生长环境。细胞培养技术在生物医学研究、药物开发、基因工程、组织工程和生物制品生产等多个领域都有广泛的应用。目前，在再生医学方面，传统的细胞培养基含有动物源性血清，可能带来异种病原体和免疫反应。
2、鉴于此，有必要开发一种gmp级别细胞完全培养基、制备方法及其用途，以克服上述缺陷。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于揭示一种gmp级别细胞完全培养基、制备方法及其用途，通过采用人血浆和人血小板裂解物作为细胞的营养物质，并促进细胞粘附、增殖和维持活性，能够大幅减少异种病原体和免疫反应，满足临床转化的需求，促进个性化和精准医疗的发展。
2、为实现上述第一个专利技术目的，本专利技术提供了一种gmp级别细胞完全培养基，包括以下成分，体积比为4％-6％的人血浆，体积比为4％-6％的人血小板裂解物，800iu/l-1500iu/l的肝素，体积比为0.8％-1.5％的青霉素-链毒素，1mmol/l-3mmol/l的l-谷氨酰胺，其余为deme基础培养基；
3、所述人
4、优选地，包括以下成分，体积比为5％的人血浆，体积比为5％的人血小板裂解物，1000iu/l的肝素，体积比为1％的青霉素-链毒素，2mmol/l的l-谷氨酰胺，其余为deme基础培养基。
5、基于相同的专利技术原理，为实现上述第二个专利技术目的，本专利技术提供了gmp级别细胞完全培养基制备方法，包括以下步骤：
6、步骤s1：准备dmem基础培养基；
7、步骤s2：向dmem基础培养基中加入体积比为4％-6％的人血浆；
8、步骤s3：向dmem基础培养基中加入体积比为4％-6％的人血小板裂解物；
9、步骤s4：向dmem基础培养基中加入800iu/l-1500iu/l的肝素；
10、步骤s5：向dmem基础培养基中加入体积比为0.8％-1.5％的青霉素-链毒素；
11、步骤s6：向dmem基础培养基中加入1mmol/l-3mmol/l的l-谷氨酰胺；
12、步骤s7：步骤s1至步骤s6形成的混合液采用0.22μm孔径的过滤器过滤三次，得到gmp级别细胞完全培养基。
13、优选地，所述人血浆和人血小板裂解物的总体积比为10％。
14、优选地，包括以下步骤：
15、步骤s1：准备dmem基础培养基；
16、步骤s2：向dmem基础培养基中加入体积比为5％的人血浆；
17、步骤s3：向dmem基础培养基中加入体积比为5％的人血小板裂解物；
18、步骤s4：向dmem基础培养基中加入1000iu/l的肝素；
19、步骤s5：向dmem基础培养基中加入体积比为1％的青霉素-链毒素；
20、步骤s6：向dmem基础培养基中加入2mmol/l的l-谷氨酰胺；
21、步骤s7：步骤s1至步骤s6形成的混合液采用0.22μm孔径的过滤器过滤三次，得到gmp级别细胞完全培养基。
22、优选地，在步骤s2中，人血浆制备步骤包括：
23、步骤s21：从经过筛选的健康捐献者，或患者本人采集全血；
24、步骤s22：通过离心全血得到血浆；
25、步骤s23：去除血浆中的细胞成分；
26、步骤s24：将步骤s23得到的血浆进行病毒灭活处理；
27、步骤s25：将步骤s24得到的血浆进行质量检测。
28、优选地，在步骤s3中，人血小板裂解物制备步骤包括：
29、步骤s31：从经过筛选的健康捐献者，或患者本人采集全血；
30、步骤s32：从全血中分离出血小板；
31、步骤s33：将血小板浓缩后，在无菌环境下，移至容器中，在-80℃下冷冻至少12小时，然后在37℃的水浴中解冻直至冰块消失，再次在-80℃下冷冻至少12小时，再在37℃的水浴中解冻直至冰块消失；
32、步骤s34：将步骤s33得到的浓缩物，在小于4℃的环境中以3000g离心20min；
33、步骤s35：使用0.22μm孔径的过滤器，除去上清液，得到人血小板裂解物。
34、优选地，gmp级别细胞完全培养基保存条件为密封后短期4℃冷藏保存，或长期-20℃冷冻保存。
35、基于相同的专利技术原理，为实现上述第三个专利技术目的，本专利技术提供了一种gmp级别细胞完全培养基用途，第一专利技术创造所述的gmp级别细胞完全培养基用于培养纤连蛋白微图案表面的细胞。
36、基于相同的专利技术原理，为实现上述第三个专利技术目的，本专利技术还提供了一种gmp级别细胞完全培养基用途，第一专利技术创造所述的gmp级别细胞完全培养基用于培养纤连蛋白微图案表面的细胞，微图案为三角形、矩形、圆形、椭圆形、五角星形、网格中的单一阵列排列的微图案或组合排列的微图案。
37、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
38、(1)通过采用人血浆和人血小板裂解物作为细胞的营养物质，并促进细胞粘附、增殖和维持活性，能够大幅减少异种病原体和免疫反应，本专利技术的培养基中达到了gmp级别，满足临床转化的需求，促进个性化和精准医疗的发展。
39、(2)本专利技术的培养基通过0.22μm孔径的过滤器过滤三次，将培养基中的可能沉淀颗粒物，特别是蛋白颗粒物进行滤除，以免沉淀物影响纤连蛋白微图案表面的细胞的生长。
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1.GMP级别细胞完全培养基，其特征在于，包括以下成分，体积比为4％-6％的人血浆，体积比为4％-6％的人血小板裂解物，800IU/L-1500IU/L的肝素，体积比为0.8％-1.5％的青霉素-链毒素，1mmol/L-3mmol/L的L-谷氨酰胺，其余为DEME基础培养基；
2.如权利要求1所述的GMP级别细胞完全培养基，其特征在于，包括以下成分，体积比为5％的人血浆，体积比为5％的人血小板裂解物，1000IU/L的肝素，体积比为1％的青霉素-链毒素，2mmol/L的L-谷氨酰胺，其余为DEME基础培养基。
3.GMP级别细胞完全培养基制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的GMP级别细胞完全培养基制备方法，其特征在于，所述人血浆和人血小板裂解物的总体积比为10％。
5.如权利要求3所述的GMP级别细胞完全培养基制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.如权利要求3-5任一所述的GMP级别细胞完全培养基制备方法，其特征在于，
7.如权利要求3-5任一所述的GMP级别细胞完全培养基制备方法
8.如权利要求3-5任一所述的GMP级别细胞完全培养基制备方法，其特征在于，GMP级别细胞完全培养基保存条件为密封后短期4℃冷藏保存，或长期-20℃冷冻保存。
9.权利要求1或2所述的GMP级别细胞完全培养基用于培养纤连蛋白微图案表面的细胞。
10.权利要求1或2所述的GMP级别细胞完全培养基用于培养纤连蛋白微图案表面的细胞，微图案为三角形、矩形、圆形、椭圆形、五角星形、网格中的单一阵列排列的微图案或组合排列的微图案。
...【技术特征摘要】
1.gmp级别细胞完全培养基，其特征在于，包括以下成分，体积比为4％-6％的人血浆，体积比为4％-6％的人血小板裂解物，800iu/l-1500iu/l的肝素，体积比为0.8％-1.5％的青霉素-链毒素，1mmol/l-3mmol/l的l-谷氨酰胺，其余为deme基础培养基；
2.如权利要求1所述的gmp级别细胞完全培养基，其特征在于，包括以下成分，体积比为5％的人血浆，体积比为5％的人血小板裂解物，1000iu/l的肝素，体积比为1％的青霉素-链毒素，2mmol/l的l-谷氨酰胺，其余为deme基础培养基。
3.gmp级别细胞完全培养基制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的gmp级别细胞完全培养基制备方法，其特征在于，所述人血浆和人血小板裂解物的总体积比为10％。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：车荟，宁迩玉，郝跃峰，胡丹，盛丽婷，高桦，
申请(专利权)人：苏州市立医院，
类型：发明
国别省市：
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