【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物基因工程领域，具体涉及一种针对可溶性人乳头瘤病毒重组hpv18 蛋白，及其表达及纯化方法。
技术介绍
1、宫颈癌是全球女性中第四大常见癌症，对于全球来说都是重要的公共卫生问题，尤其在发展中国家。统计表明，宫颈癌在欠发达国家的发病率不成比例的高，可能是因为获得筛查的机会少和hpv疫苗的成本高。宫颈癌通常在宫颈的上皮组织中发展而来，是一种高度可预防疾病，有效的筛查和疫苗接种可以预防最致癌的hpv菌株，降低发病率，所以hpv疫苗的研究意义深远。同时，当下hpv检测存在许多问题，假阳性、无法确定感染程度、多型性问题、缺乏标准化、不适用于男性等等，因此hpv检测在预防宫颈癌等疾病方面仍然存在一些局限性。
2、hpv18（人乳头瘤病毒18型）是两种常见的人乳头瘤病毒，它们已被确认与宫颈癌等恶性肿瘤的发生密切相关。这些病毒通过感染人体的生殖道上皮细胞，引发异常细胞增殖，可能最终导致癌变。在防范、检测和治疗宫颈癌的过程中，研发hpv18重组蛋白具有重要意义。
技术实现思路
1、基于上述，本专利技术的目的在于提供一种人乳头瘤病毒18型（hpv18）重组亚单位基因工程蛋白 hpv18及其表达及纯化方法。本专利技术提供的技术方案中运用的方法工艺简单，所获得目标蛋白纯度高。
2、本专利技术通过大肠杆菌基因工程菌表达获得人乳头瘤病毒疫苗重组蛋白hpv18，进行诱导表达和纯化。
3、具体地，本专利技术提供一种hpv18重组蛋白，其通过将核苷酸序列分别如 s
4、优选地，所述的表达载体为his-pet30a；所述的宿主细胞为大肠杆菌bl21菌株。
5、具体地，本专利技术提供的表达及纯化上述hpv18重组蛋白的方法，主要包含如下步骤：
6、1）构建原核表达质粒
7、将seq id no:1所示的目的基因的核苷酸序列连接在表达载体质粒his-pet30a中，构成重组载体，转化至外源蛋白表达的宿主菌 e.coli bl21 中进行诱导表达；
8、2）高压破菌
9、将步骤 1）中收集的 hpv18 菌体作为目标蛋白，用 a 液：50 mm tris-hci，150mm nacl，ph 8.5混匀悬浮，预冷后高压破菌，高速离心，收集上清；
10、3）ni-nta 粗纯
11、将 ni-nta 用3倍体积0.1m naoh处理，1m咪唑清洗1遍，用预冷 a 液重悬离心3次，加入经步骤 1）收集的上清和25 mm咪唑孵育，离心收集纯化蛋白；
12、4）洗脱离心
13、先后加入 c 液 ：1m naci溶液、a 液冲洗离心，加入梯度洗脱液洗脱2次；
14、5）超滤浓缩
15、用超滤管对目的蛋白进行浓缩。
16、优选地，步骤 1）中的重组表达载体带 his 标签；步骤 2）所述的高压采用700 -800 kpa，高速离心后获取破菌上清；步骤 3）所述的孵育条件为：4 ℃，2 h；步骤 4）所述的梯度洗脱液咪唑浓度为 20 mm、50 mm、100 mm、200 mm、300 mm、500 mm。
17、hpv18抗原的序列如 seq id no：1所示。
18、malwrpsdnt vylpppsvar vvntddyvtr tsifyhagss rlltvgnpyf rvpagggnkqdipkvsayqy rvfrvqlpdp nkfglpdnsi ynpetqrlvw acagveigrg qplgvglsgh pfynklddtesshaatsnvs edvrdnvsvd ykqtqlcilg capaigehwa kgtacksrpl sqgdcpplel kntvledgdmvdtgygamdf stlqdtkcev pldicqsick ypdylqmsad pygdsmffcl rreqlfarhf wnragtmgdtvpqslyikgt gmraspgscv yspspsgs tsdsqlfnkp ywlhkaqghn ngvcwhnqlf vtvvdttrstnlticastqs pvpgqydatk fkqysrhvee ydlqfifqlc titltadvms yihsmnssil edwnfgvppppttslvdtyr fvqsvaitcq kdaapaenkd pydklkfwnv dlkekfsldl dqyplgrkfl vqaglrrkptigprkrsaps attsskpakr vrvrark
19、hpv18重组蛋白是通过基因工程技术制造的蛋白质，模拟了病毒感染时产生的免疫原性蛋白。该蛋白用于酶联免疫吸附技术，以检测人血清中的hpv，灵敏性和特异性都较高。hpv18重组蛋白能作为疫苗组分，在激活免疫系统的同时不引发实际感染，从而诱导机体产生针对hpv18的免疫应答。另外，该重组蛋白可用于筛选hpv治疗性抗体，对疾病的治疗具有重要意义。通过开发这种重组蛋白并用于检测、疫苗或治疗方法中，可以有效对hpv做出准确诊断，以及增强人体免疫系统对hpv18的抵抗能力，从而降低感染风险，减少宫颈癌等恶性肿瘤的发生率。本专利技术的技术方案提供hpv18重组蛋白的表达及纯化方法，为疾病的检测、预防和控制提供一种重要的技术手段。
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1. 一种HPV18重组蛋白，其特征在于，通过将核苷酸序列分别如 SEQ ID NO:1所示的HPV18基因导入表达载体中构建而得的重组载体在宿主菌中进行表达而获得。
2.如权利要求1所述的HPV18重组蛋白，其特征在于，所述的表达载体为His-pet30a。
3.如权利要求1或2所述的HPV18重组蛋白，其特征在于，所述的宿主细胞为大肠杆菌BL21菌株。
4. 一种表达及纯化上述任一权利要求所述的HPV18重组蛋白的方法，其特征在于，包含如下步骤：
5.如权利要求 4 所述的方法，其特征在于：步骤 1）中的重组表达载体带 His 标签。
6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，步骤 2）所述的高压采用700 - 800 kPa，高速离心后获取破菌上清。
7.如权利要求 6所述的方法，其特征在于，步骤 3）所述的孵育条件为：4 ℃，2 h。
8.如权利要求 7所述的方法，其特征在于，步骤 4）所述的梯度洗脱液咪唑浓度为 20mM、50 mM、100 mM、200 mM、300 mM、500 m
...【技术特征摘要】
1. 一种hpv18重组蛋白，其特征在于，通过将核苷酸序列分别如 seq id no:1所示的hpv18基因导入表达载体中构建而得的重组载体在宿主菌中进行表达而获得。
2.如权利要求1所述的hpv18重组蛋白，其特征在于，所述的表达载体为his-pet30a。
3.如权利要求1或2所述的hpv18重组蛋白，其特征在于，所述的宿主细胞为大肠杆菌bl21菌株。
4. 一种表达及纯化上述任一权利要求所述的hpv18重组蛋白的方法，其特征在于，包含如下步骤：
<...【专利技术属性】
技术研发人员：周金锐，刘碧霞，胡俊雅，陈立，贺春，
申请(专利权)人：利希生物制品重庆有限公司，
类型：发明
国别省市：
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