【技术实现步骤摘要】
本文涉及医学诊断技术，尤其涉及血清生物标志物3-(4-羟基)苯基乳酸联合apri在诊断肝硬化中的应用。
技术介绍
1、慢性肝病尤其是乙型肝炎21世纪全世界共同面临的难题，抗病毒治疗目前仍未取得突破性进展。2015年病毒性肝炎造成全球134万人死亡。此外，酒精性肝病和非酒精性脂肪肝的发病率也逐年在上升。如果没有有效的管理，慢性肝病患者发展为肝纤维化、肝硬化和终末期肝病的风险会显著增加，成为对我国人民健康危害最广，后果最为严重的一种疾病。研究表明，肝纤维化是各种慢性肝病发展的共同途径，也是进一步向不可逆转肝硬化发展的必经之路。因此，肝纤维化的早期诊断，对防治肝硬化具有十分重要的意义。
2、目前临床上对于肝纤维化、肝硬化的诊断是通过综合考虑病因、病史、临床表现、并发症、治疗过程、检验、影像学及组织学等检查确定的。该过程冗长繁复且花费高昂，使得许多无明显症状患者望而却步。而通过这些方法确诊为肝硬化时，肝脏病变已经非常明显。肝活体组织病理学检查是目前诊断肝纤维化和肝硬化的金标准。医生也可通过肝穿刺病理检查把肝纤维化程度分为4级，诊断肝纤维化和肝硬化。然而，肝活体组织检查不可避免存在局限性：(1)肝活体组织检查属有创检查，损伤性穿刺有出血、损伤重要脏器的危险。(2)局部取材不能反映患者整体肝脏情况。(3)难以重复，在临床实践中，不仅第一次肝穿刺较难获得，而且为观察疾病进展和评价药物疗效进行第二次肝穿刺更不易实现。(4)不同检查者对同一组织识别的误差，也影响病理诊断的准确性。因此运用无创性检查对肝纤维化状态进行简单易行的早期评估十
3、瞬时弹性成像(如fibroscan)作为一种较为成熟的无创检查，其优势为操作简便、重复性好，能够较准确地识别轻度肝纤维化和进展性肝纤维化或早期肝硬化；但其测定成功率受肥胖、肋间隙大小及操作者的经验等因素影响，其测定值受肝脏炎症坏死、胆汁淤积及脂肪变等多种因素影响。其他还有声辐射力脉冲成像/点的剪切波弹性成像(arfi/pswe)和二维剪切波弹性成像(2d-swe)，似乎可以克服te在肥胖和腹水患者中的缺点，可作为替代方法，但是，质量标准尚未很好建立。核磁下弹性成像(mre)昂贵、耗时，目前更适合于研究。
4、血清指标是目前研究得最为广泛且简单的肝纤维化诊断方法，临床应用较多的肝纤维化血清学诊断指标包括：(1)血清in型前胶原氨基端肽；(2)血清层粘连蛋白；(3)血清透明质酸；(4)血清iv胶原；(5)基质金属蛋白酶等。上述指标在一定时期内、一定程度上对肝纤维化的诊断及肝纤维化程度的衡量都是很有价值意义的，但血清学指标目前还并不能完全与肝脏纤维化病理病程改变相对应。临床上多采用多项血清学指标的联合检测，以期提高诊断的准确性。世界卫生组织发布的《预防、关护和治疗慢性乙肝感染者指南》中推荐利用ast/血小板指数(ast to platelet ratio index，apri)评分进行无创性肝硬化诊断。研究表明，如果apri评分>2，则预示患者已经发生了肝硬化。apri评分法简单易行，但敏感度和特异性不高。而且需要注意的是，我国的乙肝和丙肝患者常常爱用联苯双酯、双环醇、五脂胶囊等降酶药。这些降酶药有可能导致alt下降，而ast上升。在这种情况下计算apri评分是不准确的，需要在未服降酶药的情况下计算apri评分。
技术实现思路
1、新兴血清生物标志物的实践优势包括它们的高适用性和高实验室再现性，以及它们潜在的广泛可用性。而且，生物标志物是潜在有用的监测和预后评估工具，具有在重复评估持续性病理生理过程的基础上预测肝纤维化临床预后的能力。
2、申请人针对不同病因的肝病存在共性疾病进程的临床现象，采用非靶向代谢组学方法，对酒精性肝病(ald)、自身免疫性肝病(aild)和药物性肝病(dili)等不同病因的684例慢性肝病患者血清标本进行了检测研究，根据患者肝硬化的进展程度将所有样本分为三个大组：非肝硬化组、肝硬化代偿组以及肝硬化失代偿组，通过主成分分析(pca)表明，筛选中心发现队列中各病因肝病进程相关差异代谢物对各病因肝病的不同进程区分度效果较好，通过韦恩分析筛选、对照品比对鉴定，准确鉴定出一个三种病因肝病共同差异代谢物3-(4-羟基)苯基乳酸，该代谢物在ald、aild、dili中均随疾病进程的发展逐渐升高；在内部验证队列中，3-(4-羟基)苯基乳酸血浆浓度也随着疾病进展逐渐升高，且组间具有显著性差异，3-(4-羟基)苯基乳酸用于肝硬化诊断时，roc曲线下面积(auc)可达0.700；随后纳入健康对照队列，研究结果表明3-(4-羟基)苯基乳酸可较好地将正常队列区分开；基于上述所有队列，我们确定了一个用于诊断肝硬化的最佳临界值3.27μmol·l-1，其auc值可达0.705；之后我们利用该临界值预测前瞻性外部验证队列的肝硬化情况，其特异度为61.76％，灵敏度为68.42％。与apri评分结合时，可使其肝硬化诊断效能由0.648提升至0.705。
3、在第一方面，本申请提供了血清生物标志物3-(4-羟基)苯基乳酸在制备用于诊断肝硬化的试剂盒中的应用，其中当使用所述试剂盒时，还包括进行ast/血小板指数(apri)评分。
4、在第二方面，本申请提供了一种肝硬化早期诊断的血清检测试剂盒，其中含有检测3-(4-羟基)苯基乳酸的试剂，并且当使用所述试剂盒时，还包括进行ast/血小板指数(apri)评分。
5、在一些优选实施方案中，所述试剂盒包括含内标的甲醇溶液，所述内标为酮洛芬、l-2-氯苯丙氨酸或13c-3羟基丁酸，或者所述试剂盒包括用于配制所述含内标的甲醇溶液的试剂。
6、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括流动相a：含0.1％v/v甲酸的水，和流动相b：体积比1:1的含0.1％v/v甲酸的乙腈-水；或者用于配制流动相a和流动相b的试剂。
7、在一些优选实施方案中，ast/血小板指数(apri)评分通过下式计算：
8、ast/血小板指数(apri)评分＝(ast/uln)×100)/血小板；
9、其中ast代表天冬氨酸氨基转移酶，单位：iu/l；uln＝40；血小板：109/l。
10、在一些优选实施方案中，3-(4-羟基)苯基乳酸的血清含量通过以下步骤测量：
11、(1)样品制备：吸取200μl血浆样品于1.5 ml离心管中，加入600μl含内标的甲醇溶液，涡旋30秒混匀，13000 rpm在4℃离心10 min，取400μl上清液于离心管中，放置真空干燥机中吹干，使用时用100μl的75％v/v甲醇复溶，离心取上清液入进样瓶，即得；
12、(2)色谱条件：色谱分离采用c18分析柱(优选behc18分析柱)，柱温30℃，样品温度4℃；流动相a：含0.1％v/v甲酸的水，流动相b：体积比1:1的含0.1％v/v甲酸的乙腈-水；流速：0.20ml·min-1；进样量：4μl；梯度洗脱条件：0-2.0min，98％a；2-2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.血清生物标志物3-(4-羟基)苯基乳酸在制备用于诊断肝硬化的试剂盒中的应用，其中当使用所述试剂盒时，还包括进行AST/血小板指数(APRI)评分。
2.根据权利要求1所述的应用，其中AST/血小板指数(APRI)评分通过下式计算：
3.根据权利要求2所述的应用，其中通过以下步骤测量3-(4-羟基)苯基乳酸的血清含量：
4.根据权利要求3所述的应用，其中3-(4-羟基)苯基乳酸的截止值是3.27μmol·L-1。
5.一种肝硬化早期诊断的血清检测试剂盒，其中含有检测3-(4-羟基)苯基乳酸的试剂，并且当使用所述试剂盒时，还包括进行AST/血小板指数(APRI)评分。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，所述试剂盒还包括含内标的甲醇溶液，所述内标为酮洛芬、L-2-氯苯丙氨酸或13C-3羟基丁酸，或者所述试剂盒还包括用于配制所述含内标的甲醇溶液的试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，所述试剂盒还包括流动相A：含0.1％v/v甲酸的水，和流动相B：体积比1:1的含0.1％v/v甲酸的乙腈-水；或者用于配制流动相A和
8.根据权利要求5-7中任一项所述的试剂盒，其中AST/血小板指数(APRI)评分通过下式计算：
9.根据权利要求5-7中任一项所述的试剂盒，其中3-(4-羟基)苯基乳酸的血清含量通过以下步骤测量：
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其中3-(4-羟基)苯基乳酸的截止值是3.27μmol·L-1。
...【技术特征摘要】
1.血清生物标志物3-(4-羟基)苯基乳酸在制备用于诊断肝硬化的试剂盒中的应用，其中当使用所述试剂盒时，还包括进行ast/血小板指数(apri)评分。
2.根据权利要求1所述的应用，其中ast/血小板指数(apri)评分通过下式计算：
3.根据权利要求2所述的应用，其中通过以下步骤测量3-(4-羟基)苯基乳酸的血清含量：
4.根据权利要求3所述的应用，其中3-(4-羟基)苯基乳酸的截止值是3.27μmol·l-1。
5.一种肝硬化早期诊断的血清检测试剂盒，其中含有检测3-(4-羟基)苯基乳酸的试剂，并且当使用所述试剂盒时，还包括进行ast/血小板指数(apri)评分。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，所述试...
【专利技术属性】
技术研发人员：王伽伯，黄迎，鲁雅雯，马永刚，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：
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