【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生产包含非致病性痤疮丙酸杆菌（c. acnes）菌株的冷冻干燥组合物的方法、所获得的冷冻干燥组合物、包含所述冷冻干燥组合物的局部用组合物及其在人类受试者中治疗或预防痤疮的用途。
技术介绍
1、痤疮（寻常痤疮的普通名称）是一种常见的炎性慢性皮肤问题，影响毛囊的皮脂腺单位。据估计，约85%的青少年和年轻人受到这种疾病的影响。痤疮通常表现为发炎的丘疹、脓疱或结节。所述炎症还可能伴有发红、肿胀和压痛。
2、已经发现，痤疮与某些（在下文中被称为致病性）痤疮丙酸杆菌（cutibacteriumacnes（c. acnes））菌株的存在高度相关，而在下文中被称为非致病性痤疮丙酸杆菌菌株的其他菌株不导致任何不良皮肤效应。因此，最近已提出用非致病性痤疮丙酸杆菌菌株取代痤疮皮肤上的致病性痤疮丙酸杆菌菌株，以降低痤疮的程度和/或严重程度（参见：a.karoglan等，acta derm venereol 2019, 99:1253–1257）。在这种背景下，wo-2016172196提出了一种治疗痤疮的方法，所述方法包括向患有痤疮的受试者的皮肤局部施用消毒剂或抗生素以显著减少致病性痤疮丙酸杆菌的群体数量，然后向所述皮肤局部施用一种或多种活的非致病性痤疮丙酸杆菌菌株的连续步骤。这种治疗导致所述非致病性痤疮丙酸杆菌菌株成为天然皮肤微生物组的一部分，因此可用于治疗或预防痤疮，并将皮肤保持在没有痤疮的状态下。
3、wo-2018073651公开了一种用于向皮肤局部施用的组合物，其包含两种或更多种不同的活的非致病性痤疮丙酸
4、然而，在wo-2018083651中概述的产品形式并不容易适合于并入到各种常见化妆品形式例如霜剂和洗剂中。因此，在所述行业中，对易于处理、储存和运输，同时表现出高活力即至少1×109 cfu/g的活力的替代产品，以及制备此类产品形式的方法，存在着持续不断的需求。
5、令人吃惊的是，现在已经发现当通过微滤分离生物质时，可以显著提高包含非致病性痤疮丙酸杆菌菌株的冷冻干燥组合物的活力。此外还发现，通过清洗步骤可以进一步提高所述活力。此外，所述清洗步骤还令人吃惊地降低了冷冻干燥和储存后的水分含量，这是有益的。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种通过本文概述的方法生产包含非致病性痤疮丙酸杆菌菌株的冷冻干燥组合物的方法。所述方法提供了包含非致病性痤疮丙酸杆菌菌株的具有所述菌株的高活力和储存稳定性的冷冻干燥组合物。
2、本专利技术还提供了一种包含至少一种非致病性痤疮丙酸杆菌菌株的冷冻干燥组合物，其通过本文概述和定义的方法来生产。
3、本专利技术还提供了上述冷冻干燥组合物用于在人类受试者中治疗或预防痤疮的用途。
4、本专利技术还提供了局部用组合物，其包含通过本文概述的方法生产的冷冻干燥组合物。
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1.一种生产包含至少一种非致病性痤疮丙酸杆菌（C. acnes）菌株的冷冻干燥组合物的方法，所述方法包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中与离心浓缩相比，所述冷冻干燥组合物中的非致病性痤疮丙酸杆菌菌株在储存1个月后、优选地3个月后的活力提高至少30%、优选地至少40%、最优选地至少50%。
3.根据权利要求1和/或2所述的方法，其中在步骤b）中，将所述生物质浓缩物用有机酸的水性（缓冲）溶液清洗，所述有机酸选自柠檬酸、视黄酸、阿魏酸、乙醇酸、乳酸、果酸、水杨酸和透明质酸及其混合物，优选为柠檬酸。
4.根据权利要求3所述的方法，其中将所述生物质浓缩物用10-100 mM、优选地20-80mM、更优选地30-70 mM，例如40、50和60 mM的柠檬酸水性（缓冲）溶液清洗。
5.根据权利要求1至4中任一项或多项所述的方法，其中在错流微滤过程中清洗所述浓缩的生物质。
6.根据权利要求5所述的方法，其中将所述有机酸的水溶液添加到在步骤a）中获得的所述生物质浓缩物并再次进行错流微滤，优选地直至所获得的清洗的生物质浓缩物
7.根据权利要求1-6中任一项或多项所述的方法，其中在步骤c）中通过将所述生物质浓缩物与至少一种冷冻保护剂混合来配制所述生物质浓缩物或所述清洗的生物质浓缩物，所述冷冻保护剂选自醇例如甘油、丙二醇和乙二醇，糖例如葡萄糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、海藻糖、棉子糖、甘露糖醇和山梨糖醇，聚合物例如聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、脱脂奶、明胶、蛋白质和蛋白质水解物、肽、酵母、肉汤、糊精、麦芽糖糊精、甲基纤维素、聚维酮、血清和蛋白胨，盐例如硫酸钠、乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、柠檬酸三钠、乙酸铵和氯化铵，酸例如柠檬酸、磷酸、谷氨酸、酒石酸、氨基酸和乙二胺四乙酸（EDTA），碱例如氢氧化铵、氢氧化钠和碳酸氢钠，以及它们的混合物。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述至少一种冷冻保护剂选自蔗糖、麦芽糖糊精、谷氨酸、谷氨酸钠和柠檬酸三钠及其混合物。
9.根据权利要求1至8中任一项或多项所述的方法，其中步骤c）中的所述制剂含有以所述生物质制剂的总重量计1-20重量%、优选地5-15重量%、更优选地6-12重量%，例如6、7、8、9、10、11和12重量%的所述冷冻保护剂。
10.根据权利要求1至9中任一项或多项所述的方法，其中所述非致病性痤疮丙酸杆菌菌株选自痤疮丙酸杆菌菌株I型例如IA（即IA1和IA2）和IB以及II型及其混合物，优选地选自痤疮丙酸杆菌菌株D1、A5、C3、H1、H2、H3、K1、K2、K4、K6、K8、K9、L1和F4及其混合物。
11.根据权利要求1至10中任一项或多项所述的方法，其中所述至少一种非致病性痤疮丙酸杆菌菌株是痤疮丙酸杆菌菌株C3或痤疮丙酸杆菌菌株K8及其混合物。
12.一种冷冻干燥组合物，其包含通过根据权利要求1-11中任一项所述的方法获得的一种或多种冷冻干燥组合物。
13.根据权利要求12所述的冷冻干燥组合物，其中所述冷冻干燥组合物中所述非致病性痤疮丙酸杆菌菌株的初始活力以所述组合物的总重量计为至少1×1010 CFU/g。
14.根据权利要求12和/或13所述的冷冻干燥组合物，其中所述组合物的残余水分以所述组合物的总重量计小于3重量%，优选地小于2重量%，更优选地小于1.5重量%，最优选地小于1.2重量%。
15.根据权利要求12至14中任一项或多项所述的冷冻干燥组合物，其中所述冷冻干燥组合物在RT下、优选地在40℃下储存4周后保持所述菌株的至少80%、优选地85%、更优选地90%的活力。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种生产包含至少一种非致病性痤疮丙酸杆菌（c. acnes）菌株的冷冻干燥组合物的方法，所述方法包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中与离心浓缩相比，所述冷冻干燥组合物中的非致病性痤疮丙酸杆菌菌株在储存1个月后、优选地3个月后的活力提高至少30%、优选地至少40%、最优选地至少50%。
3.根据权利要求1和/或2所述的方法，其中在步骤b）中，将所述生物质浓缩物用有机酸的水性（缓冲）溶液清洗，所述有机酸选自柠檬酸、视黄酸、阿魏酸、乙醇酸、乳酸、果酸、水杨酸和透明质酸及其混合物，优选为柠檬酸。
4.根据权利要求3所述的方法，其中将所述生物质浓缩物用10-100 mm、优选地20-80mm、更优选地30-70 mm，例如40、50和60 mm的柠檬酸水性（缓冲）溶液清洗。
5.根据权利要求1至4中任一项或多项所述的方法，其中在错流微滤过程中清洗所述浓缩的生物质。
6.根据权利要求5所述的方法，其中将所述有机酸的水溶液添加到在步骤a）中获得的所述生物质浓缩物并再次进行错流微滤，优选地直至所获得的清洗的生物质浓缩物中的非致病性痤疮丙酸杆菌菌株含量为至少1×1010 cfu/g，更优选为至少1×1011 cfu/g，同时最优选地回收超过90%的活细胞。
7.根据权利要求1-6中任一项或多项所述的方法，其中在步骤c）中通过将所述生物质浓缩物与至少一种冷冻保护剂混合来配制所述生物质浓缩物或所述清洗的生物质浓缩物，所述冷冻保护剂选自醇例如甘油、丙二醇和乙二醇，糖例如葡萄糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、海藻糖、棉子糖、甘露糖醇和山梨糖醇，聚合物例如聚乙二醇（peg）、聚乙烯吡咯烷酮（pvp）、脱脂奶、明胶、蛋白质和蛋白质水解物、肽、酵母、肉汤、糊精、麦芽糖糊精、甲基纤维素、聚维酮、血清和蛋白胨，盐例如硫酸钠、乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、柠檬酸三钠...
【专利技术属性】
技术研发人员：西贝·哈特曼斯，理查德·海塞，
申请(专利权)人：S生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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