【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及新型乙酰羟酸合酶小亚基(ilvn)变体、编码所述变体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的表达载体、包含乙酰羟酸合酶小亚基(ilvn)变体的l-缬氨酸生产微生物以及使用所述微生物生产l-缬氨酸的方法。
技术介绍
1、l-氨基酸是蛋白质的基本结构单元，并用作药物、食品添加剂、动物饲料、营养物质、农药、杀细菌剂等的重要材料。具体地，支链氨基酸(bcaa)是必需氨基酸l-缬氨酸、l-亮氨酸和l-异亮氨酸的总称，并且已知支链氨基酸具有抗氧化作用和直接促进肌肉细胞中蛋白质合成的作用。
2、同时，支链氨基酸主要由埃希氏菌属(escherichia)或棒状杆菌属(corynebacterium)的微生物生产，并且已知在经历始于丙酮酸的数个步骤之后由作为前体的2-酮异己酸生物合成(韩国专利公开号10-0220018和10-0438146)。然而，通过微生物生产l-支链氨基酸对实现大规模工业生产提出了挑战。
3、在这些情况下，本专利技术人验证了，出于利用微生物提高l-缬氨酸生产能力的目的，引入编码参与微生物l-缬氨酸生物合成的酶的基因ilvn(乙酰羟酸合酶小亚基)活性增强的变体显著提高l-缬氨酸生产能力。
技术实现思路
1、【技术问题】
2、本专利技术人开发增加l-缬氨酸产量的新型乙酰羟酸合酶小亚基变体、编码所述变体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的表达载体、包含所述乙酰羟酸合酶小亚基变体的l-缬氨酸生产微生物以及使用所述微生物生产l-缬氨酸的方法，从而完成了本申请
3、【技术方案】
4、根据本申请的一个方面，提供乙酰羟酸合酶小亚基(ilvn)变体，其中相应于seqid no:1的氨基酸序列中第44位的氨基酸被另一个氨基酸取代。
5、根据本申请的另一方面，提供编码本申请的变体的多核苷酸和含有所述多核苷酸的表达载体。
6、根据本申请的又一方面，提供微生物，其包含本申请的变体或编码所述变体的多核苷酸。
7、根据本申请的又一方面，提供生产l-缬氨酸的方法，所述方法包括在培养基中培养所述微生物。
8、根据本申请的又一方面，提供生产l-缬氨酸的组合物，所述组合物含有：微生物，其包含本申请的变体、编码所述变体的多核苷酸、含有所述多核苷酸的载体或本申请的多核苷酸；通过培养所述微生物获得的培养基；或其两种或更多种的组合。
9、根据本申请的又一方面，提供乙酰羟酸合酶小亚基变体用于生产l-缬氨酸的用途，所述变体具有用另一个氨基酸对seq id no:1的氨基酸序列中第44位的氨基酸的取代。
10、【有利效果】
11、与具有现有未修饰多肽的微生物相比，包含本申请的乙酰羟酸合酶小亚基变体的微生物的培养物能够以高产率生产l-缬氨酸。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.乙酰羟酸合酶小亚基(ilvN)变体，其中相应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列中第44位的氨基酸被另一个氨基酸取代。
2.根据权利要求1所述的变体，其中相应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列中第42位的氨基酸进一步被另一个氨基酸取代。
3.根据权利要求1所述的变体，其中相应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列中第44位的氨基酸被丙氨酸取代。
4.根据权利要求2所述的变体，其中相应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列中第44位和第42位的氨基酸分别被丙氨酸和缬氨酸取代。
5.根据权利要求1所述的变体，其中所述变体由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。
6.根据权利要求2所述的变体，其中所述变体由SEQ ID NO:5的氨基酸序列组成。
7.多核苷酸，其编码根据权利要求1至6中任一项所述的变体。
8.表达载体，其包含根据权利要求7所述的多核苷酸。
9.微生物，其包含根据权利要求1至6中任一项所述的变体或编码所述变体的多核苷酸。
10.根据权利要求9所述的微生物，其中
11.根据权利要求9所述的微生物，其中所述微生物是棒状杆菌属(Corynebacterium)微生物。
12.根据权利要求11所述的微生物，其中所述棒状杆菌属微生物是谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。
13.生产L-缬氨酸的方法，所述方法包括在培养基中培养根据权利要求9所述的微生物。
14.根据权利要求13所述的方法，其进一步包括从所述培养基中回收目标物质。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.乙酰羟酸合酶小亚基(ilvn)变体，其中相应于seq id no:1的氨基酸序列中第44位的氨基酸被另一个氨基酸取代。
2.根据权利要求1所述的变体，其中相应于seq id no:1的氨基酸序列中第42位的氨基酸进一步被另一个氨基酸取代。
3.根据权利要求1所述的变体，其中相应于seq id no:1的氨基酸序列中第44位的氨基酸被丙氨酸取代。
4.根据权利要求2所述的变体，其中相应于seq id no:1的氨基酸序列中第44位和第42位的氨基酸分别被丙氨酸和缬氨酸取代。
5.根据权利要求1所述的变体，其中所述变体由seq id no:3的氨基酸序列组成。
6.根据权利要求2所述的变体，其中所述变体由seq id no:5的氨基酸序列组成。
7.多核苷酸，其编码根据权利要求1至6中任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·吴，金善慧，李羲奭，尹效真，尹炳勋，金柱渊，崔先亨，沈知炫，
申请(专利权)人：CJ第一制糖株式会社，
类型：发明
国别省市：
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