【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种trim7基因或蛋白为靶点在筛选抑制口蹄疫病毒复制的药物中的应用。
技术介绍
1、口蹄疫(foot-and-mouth disease，fmd)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdisease virus,fmdv)引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触传染性疫病。该病可快速远距离传播，侵染对象为猪、牛、羊等主要畜种及其它偶蹄动物，易感者多达70余种。发病动物的特征症状是口、鼻、蹄和母畜乳头等部位发生水泡，或水泡破损后形成的溃疡或斑痂，表现跛行和卧地，由此导致生产力大幅下降。口蹄疫传染性强，发病率100％，可造成巨额经济损失和社会负面影响，国际动物卫生组织(oie)将该病列在法定上报的动物传染病之首，是国际活畜及畜产品通关贸易必检的一类疫病，我国也将其排在一类动物传染病的首位。如何制定有效的诊断和防控策略以及措施来防止口蹄疫病毒的不断流行和扩散是当前亟待解决的问题，急需开展研究疫苗或者药物等相关工作。
2、crispr-cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统，可用来对抗入侵的病毒及外源dna。基于此系统研发出crispr-cas9基因编辑技术，可以通过人工设计的sgrna引导cas9蛋白酶进行切割dna双链，使其断裂，实现基因的敲除与修饰。
3、三结构蛋白质(tripartite-motif-containing protein，trims)家族是一类具有e3泛素连接酶活性的蛋白质,通常包含3个保守的结构域。泛素-蛋白酶体系统(
4、本专利技术意外发现，通过抑制或沉默宿主trim7基因，能够抑制fmdv的复制，为了进一步研究trim7基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制，利用crispr cas9技术实现了trim7基因的完全敲除，获得的单克隆细胞系对口蹄疫病毒具有抗性表型，能够显著抑制小rna病毒科病毒在细胞内的复制，而且trim7基因的敲除并不影响宿主细胞的正常生长，为研究trim7基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供了研究工具和材料，也可用于抗小rna病毒科病毒的动物育种。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术首先利用crispr/cas9系统构建了trim7敲除细胞系，所述细胞系显著抑制fmdv的复制。具体包括以下内容：
2、第一方面，本专利技术提供了一种trim7基因/蛋白为靶点在制备或筛选用于预防或治疗小rna病毒感染的药物中的应用；所述药物以trim7基因/蛋白为靶点，抑制或沉默trim7基因/蛋白的表达。
3、优选地，所述小rna病毒为口蹄疫病毒。
4、第二方面，本专利技术提供了一种trim7基因/蛋白表达抑制剂在制备用于预防或治疗小rna病毒感染的药物中的应用。
5、优选地，所述小rna病毒为口蹄疫病毒。
6、优选地，所述药物包括以trim7基因/蛋白为靶点设计的小干扰rna；或靶向敲除trim7基因/蛋白的sgrna。
7、优选地，所述sgrna选自：
8、trim7-grna1-f：5’-caccg gcggtcgcacacaacgcaaat-3’，
9、trim7-grna1-r：5’-aaactttgcgttgtgtgcgaccgcc-3’；
10、或trim7-grna2-f：5’-caccg actcaacggacaccggctca-3’，
11、trim7-grna2-r：5’-aaactgagccggtgtccgttgagtc-3’。
12、第三方面，本专利技术提供了一种trim7基因/蛋白敲除细胞系在抗小rna病毒育种中的应用。
13、优选地，所述小rna病毒为口蹄疫病毒。
14、优选地，所述trim7基因/蛋白敲除细胞系的构建方法包括如下步骤：
15、(1)制备特异性靶向trim7基因/蛋白的sgrna；
16、(2)将步骤(1)制备的sgrna寡聚核苷酸的双链片段插入到表达cas9的慢病毒载体的多克隆位点，转染细胞得到同时表达cas9蛋白基因和打靶sgrna序列的重组慢病毒；
17、(3)将步骤(2)制备的重组慢病毒转导宿主细胞，挑取单个细胞，接种培养，获得trim7基因/蛋白敲除细胞系。
18、第四方面，本专利技术提供了一种trim7蛋白在制备小rna病毒或口小rna病毒疫苗生产增效剂中的应用。
19、优选地，所述小rna病毒为口蹄疫病毒。
20、第五方面，本专利技术提供了一种trim7基因/蛋白过表达细胞系在制备小rna病毒或小rna病毒疫苗生产细胞系中的应用。
21、优选地，所述小rna病毒为口蹄疫病毒。
22、优选地，所述trim7基因/蛋白过表达细胞系的构建方法包括如下步骤：
23、(1)制备trim7过表达质粒；
24、(2)构建含有步骤(1)所述trim7过表达质粒的重组慢病毒；
25、(3)将步骤(2)制备的重组慢病毒转导宿主细胞，挑取单个细胞，接种培养，获得trim7过表达细胞系。
26、本专利技术的有益效果是：本专利技术发现通过抑制或沉默宿主trim7基因，能够抑制fmdv的复制，为了进一步研究trim7基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制，利用crisprcas9技术实现了trim7基因的完全敲除，获得的单克隆细胞系对口蹄疫病毒具有抗性表型，能够显著抑制小rna病毒科病毒在细胞内的复制，而且trim7基因的敲除并不影响宿主细胞的正常生长，为研究trim7基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供了研究工具和材料，也可用于抗小rna病毒科病毒的动物育种；过表达trim7发现可以促进fmdv的复制，所述细胞系促进fmdv的复制，作为口蹄疫病毒疫苗的生产细胞系，用于口蹄疫病毒疫苗的生产，具有广阔的应用前景。
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1.TRIM7基因/蛋白为靶点在制备或筛选用于预防或治疗小RNA病毒感染的药物中的应用；所述药物以TRIM7基因/蛋白为靶点，抑制或沉默TRIM7基因/蛋白的表达。
2.TRIM7基因/蛋白表达抑制剂在制备用于预防或治疗小RNA病毒感染的药物中的应用。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述小RNA病毒为口蹄疫病毒。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物或TRIM7基因/蛋白表达抑制剂包括以TRIM7基因/蛋白为靶点设计的小干扰RNA；或靶向敲除TRIM7基因/蛋白的sgRNA。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述sgRNA选自：
6.TRIM7基因/蛋白敲除细胞系在抗小RNA病毒育种中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述小RNA病毒为口蹄疫病毒。
8.TRIM7蛋白在制备小RNA病毒或口小RNA病毒疫苗生产增效剂中的应用。
9.TRIM7基因/蛋白过表达细胞系在制备小RNA病毒或小RNA病毒疫苗生产细胞系中的应用。
10.
...【技术特征摘要】
1.trim7基因/蛋白为靶点在制备或筛选用于预防或治疗小rna病毒感染的药物中的应用；所述药物以trim7基因/蛋白为靶点，抑制或沉默trim7基因/蛋白的表达。
2.trim7基因/蛋白表达抑制剂在制备用于预防或治疗小rna病毒感染的药物中的应用。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述小rna病毒为口蹄疫病毒。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物或trim7基因/蛋白表达抑制剂包括以trim7基因/蛋白为靶点设计的小干扰rna；或靶向敲除trim7基因/蛋白的s...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑海学，杨帆，刘泓屹，张伟，李敏，曹伟军，陈治彤，蔡建涛，吕岳芹，赵晓义，邵文华，黄梦瑶，陈创伟，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心，
类型：发明
国别省市：
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