一种鸭肝炎抗体的制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫学领域，具体地，本发明专利技术涉及一种鸭肝炎抗体的制备方法。根据本发明专利技术的鸭肝炎抗体的制备方法，包括以下步骤：１）用杨树皮类脂饲喂健康产蛋鸡，用量为每只鸡每天０．０８～０．１ｇ，饲喂２０～３０天后，对饲喂杨树皮类脂的健康产蛋鸡进行鸭肝炎灭活疫苗强化免疫，采集鸡血清测定抗ＤＨＶ中和抗体效价，合格者，收集该鸡群产的蛋；２）无菌条件下分离蛋清，捣碎蛋黄，将卵黄液和无菌生理盐水混匀，制备卵黄抗体。通过本发明专利技术的鸭肝炎抗体的制备方法制备的抗体，与哺乳动物来源的抗体比较具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高，同时具有特异性高、稳定性较好的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫学领域，具体地，本专利技术涉及。
技术介绍
多流行于冬春季的鸭病毒性肝炎，是一种鸭急性接触性传播病。主要以运动失调、 转圈、两脚痉挛后踢，头向后背等神经症状为特征。病程急促，发病急，传播快，常在发病后 3 4天内死掉。但仅是流行于鸭雏期的一种急性传染病，故又称雏鸭病毒性肝炎，尤其1 2周雏鸭最易感，发病多，其中个体大，强壮的鸭子死亡率高，常在57% 95%左右，是威胁 养鸭业的一种严重的疾病，不容忽视。防治本病的关键应是尽早使雏鸭在易感期内获得保 护力。对种鸭进行免疫接种，通过母源抗体使雏鸭获得被动保护是一种有效的方法。以往 的做法是用鸭高免血清对雏鸭进行免疫接种。用鸭高免血清或康复血清对雏鸭进行被动免 疫效果虽好，但血清制造手续繁杂、产量低、成本高，不易满足生产需要。用鸭病毒性肝炎疫 苗，对鸡进行多次免疫，可获得安全、高效的卵黄抗体。鸡易于规模化饲养，产蛋率高，是大 批量生产卵黄抗体的理想动物。此外，应用异源动物鸡制备卵黄抗体，不但减少了同源疫病 传染的危险，也为研制其他疫病的异源高免卵黄抗体提供了有益的经验。 卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，由于卵黄中仅有IgG 类抗体，故称其为卵黄免疫球蛋白IgG(egg yolkimmunoglobulins)，简称为IgY。卵黄抗体 的研究始于19世纪末，1893年，Klemperer发现了卵黄中富含抗体；1934年Jukes的实验 证明母鸡血清中的抗体可以转移到卵黄中，从而为雏鸡提供被动免疫保护。Patters等的试 验证实，相对别的血浆蛋白，IgG被选择性的转运到卵泡中。1969年，Leslie和Clem将这 种抗体命名为IgY。 卵黄抗体的形成过程是当机体受到外界特异性抗原(尤其是灭活抗原)的剌激 后诱发一系列的免疫应答反应，激发B细胞分化成能分泌特异性抗体的浆细胞，分泌大量 的特异性抗体进入血液中。同时在产蛋禽体内，血液中的特异性抗体IgG(所有亚群)由卵 巢IgG受体的介导逐步进入到卵巢滤泡和输卵管中，并在卵黄中蓄积起来，也正是由于这 种卵黄累积作用，使卵黄中的IgG明显地高于血清中的含量，而血清中的其他抗体(主要是 IgM， IgA)与输卵管中的卵白白蛋白一起混入到鸡蛋白中。 卵黄抗体在多种环境中有较高的稳定性，在低于75t:条件下，卵黄抗体具有良好的热稳定性，9(TC处理15min后，大部分卵黄抗体丧失结合活性，在pH〈 4时，仅有少量卵 黄抗体失去活性。在pH4-12范围内，卵黄抗体的活性几乎不受影响，在pH〉 12时，卵黄抗 体迅速失去结合活性。实验表明，卵黄抗体具有耐受反复冻融的特性，即使经过5次冻融， 其抗原结合活性几乎不受影响。在室温下可保存6个月，4t:保存可达5年以上，活性仅下 降5%左右。由于具有这些稳定的理化性质，所以其的开发应用备受人们所关注。 除上述理化特性外，卵黄抗体还有其他重要的生物学特性。卵黄抗体浓度高于血 清IgG，单个卵黄(约15mL)含200mg左右的卵黄抗体，自卵黄中获得卵黄抗体较实验动物 血清方便。且卵黄抗体不与哺乳动物补体、Fc受体结合，也不与葡萄球菌蛋白A(SPA)或链球菌蛋白G(SPG)结合，卵黄抗体还不与血清中的类风湿因子(RF)结合，可提高免疫学检测 的准确性。因而可用卵黄抗体检测粪便中的病毒，因为粪便中经常含有大量SPA，用卵黄抗 体检测可避免假阳性结果。卵黄抗体是独特的IgG同种型抗体，同时哺乳动物组织结构较 禽类组织具有高度免疫性，卵黄抗体用于哺乳动物检测具有明显的优势，许多高度保守的 抗原，在免疫动物后仅产生极小的免疫原性，却可用卵黄抗体进行区分，因此卵黄抗体可用 于兽医和人类免疫学的检测。 杨树皮类脂(Poplar Bark Lipid,PBL)是从杨树皮中提取的一种橙黄色脂溶性物 质，富含大量的多糖、有机酸、甾醇、磷脂、甙类及维生素等物质。多糖类具有促胸腺体液反 应、剌激网状内皮系统，提高机体特异性免疫反应能力；有机酸具有增强机体免疫功能的作 用，能够剌激和促进单核吞噬细胞功能，对抗免疫抑制对免疫器官的抑制作用；甙类能够加 速抗体的产生、促进淋巴细胞转化和增强网状内皮系统功能等作用。这些物质在动物体内 协调统一，大大提高动物体的免疫机能。 作为杨树皮的提取物，杨树皮类脂与大多数的中草药一样，也存在着双向性，当使 用剂量过大时，不但不能起到正向促进作用，相反免疫器官会出现免疫抑制作用，因此，合 适的剂量是发挥杨树皮类脂免疫增强作用的关键所在。 禽的免疫器官包括骨髓、法氏囊、胸腺、脾脏、肝脏等器官，这些器官发育的状况、 淋巴细胞发育程度、分化成熟程度将直接影响到制备肝炎抗体水平。适量的杨树皮类脂对 上述器官发育均具有明显的促进作用。由于杨树皮类脂成分中含有大量的必需氨基酸、维 生素、甾醇等，这些营养物质正是免疫器官发育过程中不可或缺的组分，通过饲喂适量的杨 树皮类脂，可以很好的促进各免疫器官的发育，剌激并促进各淋巴细胞的分裂与增值，提高 分泌抗体的水平，高水平表达的抗体可通过体液循环到达卵巢，并在卵黄形成阶段被收集， 经过卵的各个形成过程，最终以卵黄抗体的形式得到保存。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种盐肝炎抗体的制备方法。根据本专利技术的鸭肝炎抗体的制备方法，包括以下步骤 1)用杨树皮类脂饲喂健康产蛋鸡，用量为每只鸡每天0. 08 0. lg，饲喂20 30 天后，对饲喂杨树皮类脂的健康产蛋鸡进行鸭肝炎灭活疫苗强化免疫，采集鸡血清测定抗 DHV中和抗体效价，合格者，收集该鸡群产的蛋； 2)无菌条件下分离蛋清，捣碎蛋黄，将卵黄液和无菌生理盐水混匀，制备卵黄抗 体。 根据本专利技术的鸭肝炎抗体的制备方法，其中，对饲喂杨树皮类脂的健康产蛋鸡进行鸭肝炎灭活疫苗强化免疫的过程为首次免疫每只鸡注射O. 5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只鸡注射1. 0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只鸡注射1. 0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射lml油乳剂灭活苗。 根据本专利技术的鸭肝炎抗体的制备方法，其中，在制备卵黄抗体过程中，向所述卵黄和生理盐水的混合液中添加泊罗沙姆188，使其终浓度达到0. 5-2. 0%。 根据本专利技术的具体实施例，本专利技术的鸭肝炎抗体的制备方法具体包括以下步骤 1)杨树皮类脂(购自山东省莒县林产化工厂)饲喂健康产蛋鸡，每只鸡每天0. 08 0. lg，每天一次，一个月后对饲喂杨树皮类脂的健康产蛋鸡进行鸭肝炎灭活疫苗强 化免疫， 其中，鸭肝炎灭活疫苗强化免疫方法如下 利用鸭肝炎毒株AVZ111 (购自中国兽医药品监察所)接种SPF鸡胚(购自山东省 SPF试验鸡场)，收集60 96h死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取 上清液，加O. 1%甲醛灭活，然后与油佐剂(购自杭州炼油厂10号轻质白油)充分乳化制 成油乳剂灭活疫苗，用于经杨树皮类脂饲喂一个月的健康产蛋鸡的免疫，首次免疫每只鸡 胸部肌肉注射0. 5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1. 0ml油乳剂 灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只鸡肌肉注射1. 0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免 疫，每只鸡肌肉注射lm本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸭肝炎抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：　　１）用杨树皮类脂饲喂健康产蛋鸡，用量为每只鸡每天０．０８～０．１ｇ，饲喂２０～３０天后，对饲喂杨树皮类脂的健康产蛋鸡进行鸭肝炎灭活疫苗强化免疫，采集鸡血清测定抗ＤＨＶ中和抗体效价，合格者，收集该鸡群产的蛋；　　２）无菌条件下分离蛋清，捣碎蛋黄，将卵黄液和无菌生理盐水混匀，制备卵黄抗体。

【技术特征摘要】
一种鸭肝炎抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤1)用杨树皮类脂饲喂健康产蛋鸡，用量为每只鸡每天0.08～0.1g，饲喂20～30天后，对饲喂杨树皮类脂的健康产蛋鸡进行鸭肝炎灭活疫苗强化免疫，采集鸡血清测定抗DHV中和抗体效价，合格者，收集该鸡群产的蛋；2)无菌条件下分离蛋清，捣碎蛋黄，将卵黄液和无菌生理盐水混匀，制备卵黄抗体。2. 根据权利要求1所述鸭肝炎抗体的制备方法，其特征在于，对饲喂杨树皮类脂的健康产蛋鸡进行鸭肝炎灭活疫苗强化免疫的过程如下首次免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兴晓，丁军涛，吕淑荣，孔义波，郭东，王颖，
申请(专利权)人：烟台绿叶动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]